Hypoxia inducible factor-1 alpha ist in Zonen aktiven Gewebsumbaus lokalisiert: eine immunhistologische Studie am Kaninchenovar
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
I. Einleitung
1.1. Der Hypoxia-inducible factor-1 alpha 1
1.1.1. Aufbau und Regulation von HIF-1 alpha 1
1.1.2. Normoxische Aktivierung von HIF-1 alpha 4
1.1.3. HIF-1: Funktionen und „target genes 4
1.1.4. VEGF als ein Haupteffektorgen von HIF-1 alpha 8
1.2. Das Ovar 10
1.2.1. Das Ovar - ein dynamisches Organ 10
1.2.2. Vaskularisation im Ovar 11
1.2.3. Corpus luteum 13
1.2.4. Follikelatresie 14
1.2.5. Mikrovaskularisation und Atresie 16
1.2.6. Die Rolle von HIF-1 alpha bei der Apoptose 18
1.2.7. Angiogenese: Endokrine Faktoren 19
1.2.8. Entzündungszellen im Ovar 20
1.3. Ziele der Arbeit 22
Material und Methoden
IM. Tiere 23
11.2. Makro-und Mikroskopische Aufarbeitung 24
11.2.1. Tötung und makroskopische Aufarbeitung 24
11.2.2. Mikroskopische Aufarbeitung 24
11.2.3. RNA-Isolation für die HIF-1 alpha PCR 25
11.3. Immunhistochemie HIF-1 alpha 25
n.3.1. Prinzip der modifizierten ABC-Technik 25
II.3.2. Ablauf der HIF-1 alpha Immunhistochemie 27
11.4. Immunhistochemie Lectin GSI (Isolectin B4) 29
11.4.1. Ursprung und Verhalten von Lectinen 29
11.4.2. Das Lectin GSI Isolectin B4 als Gefäßmarker 29
4
11.4.3. Prinzip der Immunhistochemie mit Lectin GSI 30
11.4.4. Ablauf der Lectin GSI Immunhistochemie 30
U.5. HIF-1 alpha RT-PCR 31
11.5.1. Prinzip der PCR 31
11.5.2. Ablauf der RT-PCR 32
11.6. Auswertung 34
11.6.1. Morphometrie 34
11.6.2. Antrale Follikel, Quantifizierung der Follikeltypen 35
11.6.3. Auswertung der HIF-1 alpha Immunfärbung 35
11.6.4. Auswertung der Corpora lutea 35
11.6.5. Auswertung der RT-PCR 36
III. Ergebnisse
III. 1. Morphologie 3-7
111.2. Morphometrie: Durchmesser und Anzahlen antraler Follikel 3g
111.3. absolute Anzahlen intakter und atretischer antraler Follikel 4q
111.4. HIF-1 alpha und Lectin GSI-Immunhistochemie 41
111.5. Corpora lutea 42
111.6. PCR-Ergebnisse 49
IV. Diskussion
IV. 1 Kritik der Methode 50
IV.2. HIF-1 alpha im avaskulären Gewebe , ¦
IV.3. Hypoxie trotz guter Vaskularisation? 22
IV .4. VEGFimOvar 53
IV.5. Chronische Hypoxie 55
IV.6. Follikelgröße und Atresie 56
IV.7. Inflammationstheorie co
IV.8. Ausblick 60
5
V. Zusammenfassung 62
VI. Tabellenanhang 65
VII. Literaturverzeichnis
VIII. Erklärung
Danksagung
Curriculum vitae
6
|
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Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
I. Einleitung
1.1. Der Hypoxia-inducible factor-1 alpha 1
1.1.1. Aufbau und Regulation von HIF-1 alpha 1
1.1.2. Normoxische Aktivierung von HIF-1 alpha 4
1.1.3. HIF-1: Funktionen und „target genes" 4
1.1.4. VEGF als ein Haupteffektorgen von HIF-1 alpha 8
1.2. Das Ovar 10
1.2.1. Das Ovar - ein dynamisches Organ 10
1.2.2. Vaskularisation im Ovar 11
1.2.3. Corpus luteum 13
1.2.4. Follikelatresie 14
1.2.5. Mikrovaskularisation und Atresie 16
1.2.6. Die Rolle von HIF-1 alpha bei der Apoptose 18
1.2.7. Angiogenese: Endokrine Faktoren 19
1.2.8. Entzündungszellen im Ovar 20
1.3. Ziele der Arbeit 22
Material und Methoden
IM. Tiere 23
11.2. Makro-und Mikroskopische Aufarbeitung 24
11.2.1. Tötung und makroskopische Aufarbeitung 24
11.2.2. Mikroskopische Aufarbeitung 24
11.2.3. RNA-Isolation für die HIF-1 alpha PCR 25
11.3. Immunhistochemie HIF-1 alpha 25
n.3.1. Prinzip der modifizierten ABC-Technik 25
II.3.2. Ablauf der HIF-1 alpha Immunhistochemie 27
11.4. Immunhistochemie Lectin GSI (Isolectin B4) 29
11.4.1. Ursprung und Verhalten von Lectinen 29
11.4.2. Das Lectin GSI Isolectin B4 als Gefäßmarker 29
4
11.4.3. Prinzip der Immunhistochemie mit Lectin GSI 30
11.4.4. Ablauf der Lectin GSI Immunhistochemie 30
U.5. HIF-1 alpha RT-PCR 31
11.5.1. Prinzip der PCR 31
11.5.2. Ablauf der RT-PCR 32
11.6. Auswertung 34
11.6.1. Morphometrie 34
11.6.2. Antrale Follikel, Quantifizierung der Follikeltypen 35
11.6.3. Auswertung der HIF-1 alpha Immunfärbung 35
11.6.4. Auswertung der Corpora lutea 35
11.6.5. Auswertung der RT-PCR 36
III. Ergebnisse
III. 1. Morphologie 3-7
111.2. Morphometrie: Durchmesser und Anzahlen antraler Follikel 3g
111.3. absolute Anzahlen intakter und atretischer antraler Follikel 4q
111.4. HIF-1 alpha und Lectin GSI-Immunhistochemie 41
111.5. Corpora lutea 42
111.6. PCR-Ergebnisse 49
IV. Diskussion
IV. 1 Kritik der Methode 50
IV.2. HIF-1 alpha im avaskulären Gewebe , ¦
IV.3. Hypoxie trotz guter Vaskularisation? 22
IV .4. VEGFimOvar 53
IV.5. Chronische Hypoxie 55
IV.6. Follikelgröße und Atresie 56
IV.7. Inflammationstheorie co
IV.8. Ausblick 60
5
V. Zusammenfassung 62
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