Untersuchungen zur Zelltypspezifität pathogener und apathogener Stämme des Virus der infektiösen Bursitis (IBDV):
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
D
AS
V
IRUS
DER
INFEKTIOESEN
B
URSITIS
1
1.2.
I
NFEKTIOESE
B
URSITIS
2
1.3.
VLRUSSTRUKTUR
3
1.4.
I
MMUNOGENE
E
IGENSCHAFTEN
DER
V
IRUSPROTEINE
4
1.5.
R
EPLIKATION
VON
IBDV
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
5
1.6.
P
ATHOGENITAET
VERSCHIEDENER
IBDV-S
TAEMME
7
1.7.
C
HARAKTERISIERUNG
VON
P
ATHOGENITAETSDETERMINANTEN
AUF
G
ENOMEBENE
8
1.8.
P
ROBLEMSTELLUNG
10
2.
MATERIAL
12
2.1.
V
IRUS
12
2.2.
N
AEHRMEDIEN
12
2.3.
P
UFFER
13
2.4.
C
HEMIKALIEN
20
2.5.
E
NZYME
21
2.6.
D
ETERGENTIEN
21
2.7.
C
HEMIKALIEN
FUER
G
ELELEKTROPHORESE
21
2.8.
V
ORGEFERTIGTE
S
YSTEME
("K
ITS
")
21
2.9.
A
NTIKOERPER
22
3.
METHODEN
23
3.1.
Z
ELLKULTUREN
23
3.2.
G
EWINNUNG
VON
L
YMPHOZYTEN
23
3.3.
V
IRUS
24
3.3.1.
SAATVIRUS
24
3.3.2.
VIRUSREINIGUNG
UND
-KONZENTRIERUNG
24
3.3.3
GEWINNUNG
KOMPLETTER
VIRUSPARTIKEL
25
3.3.4.
HERSTELLUNG
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
VIRUSPARTIKELN
26
3.4.
P
LAQUETEST
26
3.5.
M
ARKIERUNG
VON
Z
ELLEN
UND
P
LASMAMEMBRANEN
27
3.5.1.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
HEF
27
3.5.2.
OBERFLAECHENMARKIERUNG
VON
ZELLEN
MIT
BIOTIN
27
3.6.
P
LASMAMEMBRANGEWINNUNG
27
3.7.
P
LASMAMEMBRANCHARAKTERISIERUNG
28
3.7.1.
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTES
28
3.7.2.
NACHWEIS
VON
NUKLEINSAEURE
28
3.7
3.
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
29
3
7.3.1.
BESTIMMUNG
DER
5
-NUKLEOTIDASE
29
3
7.3.2
BESTIMMUNG
DER
OUABAIN-SENSITIVEN
NA
+
-K
+
-ATPASE
29
3.7.3.3.
BESTIMMUNG
DER
GLUKOSE-6-PHOSPHATASE
30
3.7.4.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
31
3.8.
V
ERMINDERUNG
DER
I
NFEKTIOSITAET
NACH
A
DSORPTION
VON
V
IRUS
AN
HEF
UND
L
YMPHOZYTEN
31
3.9.
B
INDUNGSSTUDIEN
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEM
V
IRUS
32
3.9.1.
ZELLZAHLABHAENGIGE
VIRUSBINDUNG
32
3.9.2.
ZEITABHAENGIGE
VIRUSBINDUNG
32
3.9.3.
SAETTIGUNGSEXPERIMENTE
32
3.9
4.
KOMPETITIONSEXPERIMENTE
33
3.9.5.
BINDUNG
VON
VIRUS
AN
VORBEHANDELTE
HEF
33
3.9.6.
INHIBITION
DER
VIRUSBINDUNG
DURCH
VORINKUBATION
DES
VIRUS
ODER
DER
ZELLEN
MIT
ANTIKOERPERN
33
3.10.
P
LASMAMEMBRAN
-ELISA
34
3.11.
SDS-P
OLYACRYLAMID
-G
ELELKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
34
3.12.
C
OOMASSIE
-F
AERBUNGVON
SDS-P
OLYACRYLAMIDGELEN
35
3.13.
I
MMUNOBLOT
35
3.14.
V
IRUS
-O
VERLAY
-P
ROTEIN
-B
INDING
-A
SSAY
(VOPBA)
36
3.15.
CROSSLINKING
36
3.16.
C
OPRAEZIPITATION
VON
V
IRUS
UND
Z
ELLREZEPTOR
37
3.17.
G
ELRETARDATIONSEXPERIMENTE
38
4.
ERGEBNISSE
39
4.1.
R
EDUKTION
DER
I
NFEKTIOSITAET
NACH
A
DSORPTION
VON
IBDV
AN
HEF
UND
L
YMPHOZYTEN
(=
A
DSORPTIONSTUDIEN
)
39
4.2.
B
INDUNGSSTUDIEN
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEM
V
IRUS
42
4
2.1.
ZELLZAHLABHAENGIGE
BINDUNG
44
4
2.2.
ZEITABHAENGIGE
VIRUSBINDUNG
46
4
2.3.
SAETTIGUNGSEXPERIMENTE
48
4.2.4.
KOMPETITIONSSTUDIEN
50
4.2
5.
BINDUNGSSTUDIEN
NACH
VORBEHANDLUNG
VON
HEF
54
4.2.5.1.
PROTEASEBEHANDLUNG
VON
HEF
54
4.2.5.2.
VORBEHANDLUNG
VON
HEF
MIT
ZUCKERSPALTENDEN
ENZYMEN
UND
PERJODAT
56
4.2.5.3.
BEHANDLUNG
VON
HEF
MIT
DETERGENTIEN
58
4.2.6.
INHIBITION
DER
VIRUSBINDUNG
DURCH
ANTIKOERPER
60
4.3.
N
ACHWEIS
VON
VIRUSBINDENDEN
Z
ELLPROTEINEN
IM
"V
IRUS
-O
VERLAY
-P
ROTEIN
-B
INDING
-A
SSAY
"
(VOPBA)
62
4.3.1.
BINDUNG
VON
IBDV
AN
ZELLPROTEINE
63
4.3.2.
VERGLEICH
DER
IN
VOPBA-EXPERIMENTEN
EINGESETZTEN
PROTEINMENGEN
64
4.4.
N
ACHWEIS
VON
P
ROTEINEN
AUF
DER
Z
ELLOBERFLAECHE
65
4.4.1.
BIOTINMARKIERUNG
65
4.4.2
PLASMAMEMBRANPRAEPARATION
67
4
4.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PLASMAMEMBRAN
70
4.4.3.1.
PROTEINBESTIMMUNG
70
4.4.3.2.
NACHWEIS
VON
NUKLEINSAEURE
72
4.4.3.3.
BESTIMMUNG
VON
MARKERENZYMEN
DER
PLASMAMEMBRAN
UND
DES
ENDOPLASMATISCHEN
RETIKULUMS
73
4.4.3.4.
MORPHOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
PM-PRAEPARATIONEN
IM
ELEKTRONENMIKROSKOP
74
4.4.3.5.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
DER
ANREICHERUNG
VON
PM
76
4.5.
P
LASMAMEMBRAN
-ELISA
78
4.6.
N
ACHWEIS
VON
IBDV
BINDENDEN
Z
ELLOBERFLAECHEN
PROTEINEN
81
4.7.
N
ACHWEIS
DER
SPEZIFISCHEN
B
INDUNG
VON
IBDV
AN
Z
ELLOBERFLAECHENPROTEINE
81
4.8.
V
ERSUCH
DER
C
OPRAEZIPITATION
EINES
V
IRUS
-Z
ELLREZEPTOR
-
KOMPLEXES
84
4.9.
G
ELRETARDATIONSEXPERIMENTE
85
4.9.1.
GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
MIT
MARKIERTEN
HEF
85
4.9.2.
GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEM
IBDV
85
5.
DISKUSSION
90
6.
ZUSAMMENFASSUNG
113
7.
LITERATURVERZEICHNIS
116 |
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