Molekulare Defekte des Insulinrezeptors bei zwei Patienten mit schwerer Insulinresistenz:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
14
1.1
AUFGABENSTELLUNG
14
2.
LITERATURUEBERSICHT
15
2.
I
INSULINREZEPTOR
UND
INSULINWIRKUNG
15
2.2
TTERMODELLE
19
2.3
ENTSTEHUNG
DER
INSULINRESISTENZ
25
3.
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
30
3.1
MATERIAL
UND
METHODEN
30
3.1.1
PATIENTEN
30
3.1.1
1
PATIENT
MK
30
3
1.1
2
PATIENT
PK
32
3.1.2
ZELLKULTUR
DER
FIBROBLASTEN
33
3
1
3
INDUKTION
DER
FIBROBLASTEN
34
3.1.4
ALLGEMEINE
METHODEN
34
3
1.4.1
DNA-PRAEZIPITATION
34
3
1.4
2
ETHANOLFALLUNG
34
3
14
3
ISOPROPANOLFAELLUNG
35
3.1.4.4
PHENOLEXTRAKTION
DER
DNA
35
3
1.4.5
ENZYMATISCHE
RESTRIKTION
DER
DNA
35
3
1.5
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
36
3
1
6
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
37
3.1.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
(RT)
38
3
1.7.1
RT
MIT
DEM
"FIRST
STRAND
CDNA
SYNTHESIS
KIT"
(PHARMACIA)
38
3.1.7.2
RT
FUER
DIE
SEMIQUANTITATIVE
PCR
38
3
1
7.2
1
MRNA-STANDARD
39
3.1.8
ELEKTROPHORESE-METHODEN
39
3
18
1
DNA-GELELEKTROPHORESE
39
3
1
8.2
RNA-GELELEKTROPHORESE
40
3.1.8.3
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
41
3.1.9
NORTHEM-BLOTTING
UND
HYBRIDISIERUNG
42
3.1.9.1
NORTHEM-BLOTTING
42
3.1.9.2
NORTHEMHYBRIDISIERUNG
43
3
1.10
HERSTELLUNG
SYNTHETISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
44
3.111
"POLYMERASE
CHAIN
REACTION"
(PCR)
45
3.1.11.1
PCR
MIT
GENOMISCHER
DNA
45
3.1.112
PCR
NACH
REVERSER
TRANSKRIPTION
47
3
1.
II.
3
SEMIQUANTITATIVERT-PCR
47
3.1.12
KLONIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
48
3.1.12.1
KLENOW-REAKTION
48
3
1.12.2
KINASE-REAKTION
48
3.1.12.3
VORBEREITUNG
DER
VEKTOREN
49
3.1.12.4
LIGATION
49
3.1.12.5
VORBEREITUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
50
3.1.12.6
TRANSFORMATION
50
3.1.13
PLASMID-DNA-PRAEPARATION
51
3.1
13.1
MINIPRAEPARATION
51
3.1.132
MAXIPRAEPARATION
52
3.1.14
SEQUENZIERMETHODEN
52
3.1.14.1
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
52
3
1
14.2
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
53
3.1.15
BINDUNGSASSAY
MIT
KULTIVIERTEN
FIBROBLASTEN
54
3.116
BINDUNGSASSAY
MIT
PARTIELL
GEREINIGTEN
REZEPTOREN
55
3.1.16.1
REZEPTORAUFREINIGUNG
55
3.1.16.2
PROTEINBESTIMMUNG
56
3.1.16.3
BINDUNGSASSAY
57
3.1.17
MATERIAL
58
3.1.18
LISTE
SYNTHETISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
60
3.2
ERGEBNISSE
61
3
2
1
UNTERSUCHUNG
DER
INSULIN
BZW.
IGF
1
-BINDUNG
61
3.2.1.1
INSULINBINDUNG
AN
KULTIVIERTE
FIBROBLASTEN
61
3.2
1
2
IGF-L-BINDUNG
AN
KULTIVIERTE
FIBROBLASTEN
63
3.2.1.3
WECHSELSEITIGE
KOMPETITION
DER
INSULINBINDUNG
DURCH
STEIGENDE
IGF-1
KONZENTRATIONEN
UND
DER
IGF-L-BINDUNG
DURCH
STEIGENDE
INSULINKONZENTRATIONEN
BEI
FIBROBLASTEN
64
3.2.1.4
INSULINBINDUNG
AN
PARTIELL
GEREINIGTE
REZEPTOREN
IN
VITRO
64
3.2.2
SEQUENZANALYSE
DES
INSULINREZEPTORS
BEI
PATIENT
MK
66
3.2.2.1
PCR-AMPLIFIKATION,
SUBKLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
GENOMISCHER
DNA
IM
BEREICH
DES
EXTRAZELLULAEREN
INSULINREZEPTORS
66
3.2.2.2
SUBKLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
DER
CDNA
IM
BEREICH
DER
EXTRAZELLULAEREN
EXONUEBERGAENGE
DES
INSULINREZEPTORS
67
3.2.2.3
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
DER
CDNA
F.
DEN
INTRAZELLULAEREN
TEIL
DES
INSULINREZEPTORS
70
3.2.3
BESTIMMUNG
DES
YYSTEADY STATE
"
-MRNA-SPIEGELS
70
3.2.4
INDUKTION
DES
C-FOS-GENS
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
71
3.2.4.1
NORTHEMBLOT-ANALYSE
DER
GESAMT-RNA
MIT
EINER
C-FOS-DNA-SONDE
71
3.2.4.2
NORTHEMBLOT-KONTROLLANALYSE
DER
GESAMT-RNA
MIT
EINER
GAPDH-DNA-SONDE
72
4.
DISKUSSION
75
4.1
GENETIK
UND
INSULINRESISTENZ
75
4.2
POSTTRANSLATIONALE
PROZESSIERUNG
DES
INSULINREZEPTORS
79
4.3
SIGNALTRANSDUKTION
80
4.3.1
INSULINREZEPTOR
80
4.3.2
INSULINREZEPTORSUBSTRAT
1
81
4.3.3
AKTIVIERUNG
DER
MAP-KINASEKASKADE
83
4.3.4
REGULATION
DER
C-FOS-EXPRESSION
83
4.4
INDUKTION
DES
C-FOS-GENS
86
5.
ZUSAMMENFASSUNG
88
6.
LITERATURVERZEICHNIS
90
7.
SUMMARY
110
1.3 |
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