Identifizierung und Charakterisierung des Aurantimycin-Biosynthesegenclusters in Streptomyces aurantiacus IMET 43917:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2008
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 120 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
Internformat
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|---|---|
| adam_text | 1. Inhalt
1. Zusammenfassung 1
2. Einleitung 3
2.1 Die Gattung Streptomyces 3
2.2 Streptomyces aurantiacus IMET 43917, Produzent des Peptid/Polyketid-Antibiotikums
Aurantimycin 4
2.3 Polyketid-Synthasen (PKS) 7
2.4 Nichtribosomale Peptidsynthetasen (NRPS) 11
2.5Peptid-/Polyketid-Mischsrrukturen 13
2.6 Screening nach Sekundärmetabolit-Biosynthese-Genclustern und reverse Genetik 14
2.7 Kombinatorische Biosynthese 15
2.8 Ziel der Arbeit 17
3. Material und Methoden 18
3.1 Bakterienstämme und Phagen 18
3.2 Plasmide, Cosmide und Vektoren 19
3.3 Synthetische Oligonukleotid-Primer 22
3.4 Nährmedien 25
3.5 Medienzusätze und Antibiotika 28
3.6 Puffer und Lösungen 30
3.6.1 Puffer und Lösungen zur DNA-Isolierung 30
3.6.1.1 Puffer zur Plasmid-Isolierung durch alkalische Lyse 30
3.6.1.2 Puffer und Lösungen zur Gesamt-DNA-Isolierung aus Streptomyceten 30
3.6.1.3 Puffer und Lösungen zur Plasmid-Isolierung aus Streptomyceten 30
3.6.2 Puffer und Lösungen für die Gelelektrophorese 31
3.6.2.1 Puffer und Lösungen für die Agarose-Gelelektrophorese 31
3.6.2.2 Pufferund Lösungen für die SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 31
3.6.2.3 Puffer und Lösungen für die Pulsfeld-Gelelektrophorese 32
3.6.3 Puffer und Lösungen zur Southem-Hybridisierung 32
3.6.4 Pufferund Lösungen für Western-Hybridisierung 33
3.6.5 Puffer und Lösungen für die denaturierende Proteinaufreinigung 33
3.6.6 Puffer und Lösungen für die Protoplastentransformation bei Actinomyceten 34
3.6.7 Lösungen für die Analytik 34
3.7 Enzyme, Chemikalien und andere Materialien 35
3.7.1 Enzyme 35
3.7.2 Chemikalien 35
3.7.3 Längenstandards 36
3.7.4 Antikörper 36
3.8 Methoden 37
3.8.1 Kultivierung von Mikroorganismen 37
3.8.1.1 Kultivierung von Escherichia coli 37
3.8.1.2 Kultivierung von Actinomyceten 37
3.8.1.3 Kultivierung von S. aurantiacus zur Aurantimycin-Produktion 38
3.8.2 Gentechnische Methoden 38
3.8.2.1 Methoden zur Isolierung von DNA 38
3.8.2.1.1 Isolierung von Plasmid-DNA aus Escherichia coli 38
3.8.2.1.2 Isolierung von Plasmid-DNA aus Actinomyceten 39
3.8.2.1.3 Isolierung von Gesamt-DNA aus Actinomyceten 39
3.8.2.1.4 Isolierung von DNA aus Agarose-Gelen 40
3.8.2.2 Reinigung und Aufkonzentrieren von DNA durch Alkoholfällung 40
3.8.2.3 Methoden zur Charakterisierung von DNA-Molekülen 40
3.8.2.3.1 Restriktionsspaltung 40
1. Inhalt
3.8.2.3.2 Agarose-Gelelektrophorese Größenbestimmung von DNA-Molekülen41
3.8.2.3.3 Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE) 41
3.8.2.3.4 Konzentrationsbestimmung von DNA-Lösungen 42
3.8.2.3.5 DNA-Sequenzierung und Sequenzanalyse 42
3.8.2.3.6 Southern-Hybridisierung 43
3.8.2.3.6.1 Markieren von DNA-Sonden 44
3.8.2.3.6.2 Southera-Blot (Transfer von DNA auf Nylonmembran) 44
3.8.2.3.6.3 Hybridisierung 45
3.8.2.3.6.4 Immunologischer Nachweis markierter DNA-Sonden 45
3.8.2.4 Polymerase-Kettenreaktion 46
3.8.2.5 Klonieringsexperimente 47
3.8.2.5.1. Pasmidkonstruktionen zur Genunterbrechungsmutagenese 47
3.8.2.5.1.1 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Protoplasten-
transformation 47
3.8.2.5.1.2 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Protoplasten-.... 47
3.8.2.5.1.3 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation 48
3.8.2.5.1.4 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Thiostreptonresistenz 48
3.8.2.5.1.5 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Novobiocinresistenz 48
3.8.2.5.1.6 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Turimycinresistenz 48
3.8.2.5.2 Plasmidkonstruktionen zur heterologen Expression inE. coli 49
3.8.2.5.2.1 Expression von hyd 49
3.8.2.5.2.2 Expression von cytl 49
3.8.2.5.2.3 Expression vonpcpl 50
3.8.2.5.2.4 Expression von nrpsl 50
3.8.2.5.2.5 Expression vonnrps2 50
3.8.2.5.3 Plasmidkonstruktionen zur heterologen Expression in S. lividans T7 50
3.8.2.5.3.1 Expression von hyd, p450, nrpsl, pcp und nrps2.2 50
3.8.2.5.3.2 Expression von abcAlabcB 51
3.8.2.5.4 Ligation 52
3.8.2.5.5 Klenow-Behandlung 52
3.8.2.6 Methoden zur Transformation von Bakterien 52
3.8.2.6.1 Transformation von Escherichia coli durch die CaCU-Methode 52
3.8.2.6.2 PEG-induzierte Transformation von Actinomyceten 53
3.8.2.6.3 Intergenerische Konjugation (HOPWOOD, 1989) 54
3.8.2.6.4 Transfektion durch Phagen 54
3.8.3 Analytische Methoden 55
3.8.3.1 Extraktion von Aurantimycin 55
3.8.3.2 Dünnschichtchromatographie zum Nachweis von Aurantimycin 55
3.8.3.3 HPLC-Analyse für Aurantimycin 56
3.8.3.4 Proteinanalytik 56
3.8.3.4.1 Heterologe Expression in Escherichia coli 56
3.8.3.4.2 Heterologe Expression in Streptomyces lividans 56
3.8.3.4.3 Denaturierende Reinigung von Fusionsproteinen 56
3.8.3.4.3.1 Verwendung von pRSETB und pET43.1a 56
3.8.3.3.3.2 Verwendung des pMAL-Systems 57
3.8.3.3.4 SDS-PAGE 57
3.8.3.3.5 Western-Blotting (Immunoblotting) 58
3.8.3.3.5.1 Semi-Dry-Blotting 58
1. Inhalt
3.8.3.3.5.2 Immunofärbung 58
4. Ergebnisse 60
4.1 Etablierung eines Wirts-Vektor-Systems für Streptomyces aurantiacus IMET 43917. 60
4.1.1 Bestimmung des Antibiotika-Resistenzmuster von Streptomyces aurantiacus für
die Auswahl geeigneter Resistenzkassetten 60
4.1.2 PEG-induzierte Protoplasten-Transformation für S. aurantiacus 61
4.1.2.1 Präparation und Regeneration von S. aurantiacus-Protop asten nach
HOPWOOD (1985) 61
4.1.2.2 PEG-induzierte Transformation von S. aurantiacus-Protop asien nach
HOPWOOD (1985) zur Inaktivierung eines NRPS-Gens (nrps4) des Aurantimycin-
Clusters durch Genunterbrechungsmutagenese 62
4.1.2.3 Protoplastierung durch Lysozym-Behandlung löst bei S. aurantiacus
Multiresistenz aus 63
4.1.3 Gewinnung von S. aurantiacus-Sporsn zur Verwendung für die intergenerische
Konjugation 64
4.1.4 Intergenerische Konjugation mit Substratmycel von S. aurantiacus 65
4.1.5 Transfektion von Streptomyces aurantiacus mit dem Phagen S7 (DSM 49153).... 66
4.2 Charakterisierung des Aurantimycin-Produzenten S. aurantiacus IMET 43917 66
4.2.1 Morphologie und Wachstumsverhalten von Streptomyces aurantiacus 67
4.2.1.1 Festmedien 67
4.2.1.2 Flüssigmedien 68
4.2.1.3 Stress verändert das Resistenzmuster von Streptomyces aurantiacus 69
4.2.2 Analyse der Aurantimycin-Produktion 70
4.2.3 Analyse des roten Pigmentes 71
4.3 Genomanalyse von 5. aurantiacus 72
4.3.1 Auftrennung des Genoms von S. aurantiacus durch Pulsfeldgelelektrophorese 72
4.3.2 PSA1 ist bei allen unterschiedlichen S. aurantiacus-Phänotypen vorhanden 73
4.3.3 Das Aurantimycin-Biosynthesegencluster ist nicht auf PSA1 lokalisiert 73
4.4 Identifizierung des Aurantimycin-Biosynthesegenclusters 75
4.4.1 Erstellung und Screening einer Cosmid-Genbank 75
4.4.2 Charakterisierung des Cosmids cosAU52 mit potentiellen Aurantimycin-
Biosynthesegenen 77
4.4.3 Sequenzierung des Cosmids cosAU52 mit potentiellen Aurantimycin-
Biosynthesegenen 78
4.4.4 Screenen nach Folgecosmiden 78
4.4.4.1 Suche nach Folgecosmiden rechts von cosAU52 79
4.4.4.2 Suche nach Folgecosmiden links von cosAU52 80
4.4.5 Schematische Karte des sequenzierten DNA-Bereichs 81
4.5 Sequenzierung des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 83
4.5.1 Sequenz-Polishing/Finishing der Aurantimycin-Biosyntheseregion aus S.
aurantiacus IMET 43917 83
4.5.2 Genorganisation des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 84
4.5.3 Sequenzanalysen von potentiellen Aurantimycin-Biosynthesegenen 89
4.5.3.1 Gene/Enzyme mit Ähnlichkeit zu Transportern und Membranproteinen 89
4.5.3.2 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese der Polyketid-Seitenkette beteiligt sind
89
4.5.3.3 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese des Peptid-Anteils von Aurantimycin
beteiligt sind 92
4.5.3.4 Gene/Enzyme mit potentiell regulatorischer Funktion 94
4.5.3.5 Gene/Enzyme, die an Oxidationsreakhonen beteiligt sind 95
1. Inhalt
4.5.3.6 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese von Bausteinen der Polykeüd-
Seitenkette beteiligt sind 95
4.5.3.7 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese der aproteinogenen Aminosäure
Piperazinsäure beteiligt sind 96
4.5.3.8 Gene/Enzyme mit unbekannter Funktion 96
4.6 Heterologe Expression von Genen des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 98
4.6.1 Heterologe Expression des Polyketidanteils mittels cosAU54 und cosAU37 in
Streptomyces UvidansTK23 98
4.6.2 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans 99
4.6.2.1 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans TK23 mit dem
Plasmid pWHM4abc mit konstitutivem ermü^-Promotor 100
4.6.2.2 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans T7 mit dem
Plasmid pABC mit induzierbarem rtp/1-Promotor 100
5. Diskussion 102
5.1 Biosynthese des Polyketid-Anteils von Aurantimycin 102
5.2 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese des Peptid-Anteils von Aurantimycin beteiligt
sind 104
5.3 Synthese und Einbau von Piperazinsäure 106
5.4 Gene/Enzyme mit Ähnlichkeit zu Transportern und Membranproteinen 107
5.5 Gene/Enzyme mit unbekannter Funktion 108
5.6 Gene mit Ähnlichkeit zu Regulatoren 108
5.7 Streptomyces aurantiacus ist genetisch instabil 109
5.8 Weiterführende Arbeiten 110
6. Literatur 112
7. Anhang 121
|
| adam_txt |
1. Inhalt
1. Zusammenfassung 1
2. Einleitung 3
2.1 Die Gattung Streptomyces 3
2.2 Streptomyces aurantiacus IMET 43917, Produzent des Peptid/Polyketid-Antibiotikums
Aurantimycin 4
2.3 Polyketid-Synthasen (PKS) 7
2.4 Nichtribosomale Peptidsynthetasen (NRPS) 11
2.5Peptid-/Polyketid-Mischsrrukturen 13
2.6 Screening nach Sekundärmetabolit-Biosynthese-Genclustern und reverse Genetik 14
2.7 Kombinatorische Biosynthese 15
2.8 Ziel der Arbeit 17
3. Material und Methoden 18
3.1 Bakterienstämme und Phagen 18
3.2 Plasmide, Cosmide und Vektoren 19
3.3 Synthetische Oligonukleotid-Primer 22
3.4 Nährmedien 25
3.5 Medienzusätze und Antibiotika 28
3.6 Puffer und Lösungen 30
3.6.1 Puffer und Lösungen zur DNA-Isolierung 30
3.6.1.1 Puffer zur Plasmid-Isolierung durch alkalische Lyse 30
3.6.1.2 Puffer und Lösungen zur Gesamt-DNA-Isolierung aus Streptomyceten 30
3.6.1.3 Puffer und Lösungen zur Plasmid-Isolierung aus Streptomyceten 30
3.6.2 Puffer und Lösungen für die Gelelektrophorese 31
3.6.2.1 Puffer und Lösungen für die Agarose-Gelelektrophorese 31
3.6.2.2 Pufferund Lösungen für die SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 31
3.6.2.3 Puffer und Lösungen für die Pulsfeld-Gelelektrophorese 32
3.6.3 Puffer und Lösungen zur Southem-Hybridisierung 32
3.6.4 Pufferund Lösungen für Western-Hybridisierung 33
3.6.5 Puffer und Lösungen für die denaturierende Proteinaufreinigung 33
3.6.6 Puffer und Lösungen für die Protoplastentransformation bei Actinomyceten 34
3.6.7 Lösungen für die Analytik 34
3.7 Enzyme, Chemikalien und andere Materialien 35
3.7.1 Enzyme 35
3.7.2 Chemikalien 35
3.7.3 Längenstandards 36
3.7.4 Antikörper 36
3.8 Methoden 37
3.8.1 Kultivierung von Mikroorganismen 37
3.8.1.1 Kultivierung von Escherichia coli 37
3.8.1.2 Kultivierung von Actinomyceten 37
3.8.1.3 Kultivierung von S. aurantiacus zur Aurantimycin-Produktion 38
3.8.2 Gentechnische Methoden 38
3.8.2.1 Methoden zur Isolierung von DNA 38
3.8.2.1.1 Isolierung von Plasmid-DNA aus Escherichia coli 38
3.8.2.1.2 Isolierung von Plasmid-DNA aus Actinomyceten 39
3.8.2.1.3 Isolierung von Gesamt-DNA aus Actinomyceten 39
3.8.2.1.4 Isolierung von DNA aus Agarose-Gelen 40
3.8.2.2 Reinigung und Aufkonzentrieren von DNA durch Alkoholfällung 40
3.8.2.3 Methoden zur Charakterisierung von DNA-Molekülen 40
3.8.2.3.1 Restriktionsspaltung 40
1. Inhalt
3.8.2.3.2 Agarose-Gelelektrophorese Größenbestimmung von DNA-Molekülen41
3.8.2.3.3 Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE) 41
3.8.2.3.4 Konzentrationsbestimmung von DNA-Lösungen 42
3.8.2.3.5 DNA-Sequenzierung und Sequenzanalyse 42
3.8.2.3.6 Southern-Hybridisierung 43
3.8.2.3.6.1 Markieren von DNA-Sonden 44
3.8.2.3.6.2 Southera-Blot (Transfer von DNA auf Nylonmembran) 44
3.8.2.3.6.3 Hybridisierung 45
3.8.2.3.6.4 Immunologischer Nachweis markierter DNA-Sonden 45
3.8.2.4 Polymerase-Kettenreaktion 46
3.8.2.5 Klonieringsexperimente 47
3.8.2.5.1. Pasmidkonstruktionen zur Genunterbrechungsmutagenese 47
3.8.2.5.1.1 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Protoplasten-
transformation 47
3.8.2.5.1.2 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Protoplasten-. 47
3.8.2.5.1.3 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation 48
3.8.2.5.1.4 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Thiostreptonresistenz 48
3.8.2.5.1.5 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Novobiocinresistenz 48
3.8.2.5.1.6 Plasmidkonstruktionen zur Genunterbrechung mittels Konjugation mit
zusätzlicher Turimycinresistenz 48
3.8.2.5.2 Plasmidkonstruktionen zur heterologen Expression inE. coli 49
3.8.2.5.2.1 Expression von hyd 49
3.8.2.5.2.2 Expression von cytl 49
3.8.2.5.2.3 Expression vonpcpl 50
3.8.2.5.2.4 Expression von nrpsl 50
3.8.2.5.2.5 Expression vonnrps2' 50
3.8.2.5.3 Plasmidkonstruktionen zur heterologen Expression in S. lividans T7 50
3.8.2.5.3.1 Expression von hyd, p450, nrpsl, pcp und nrps2.2 50
3.8.2.5.3.2 Expression von abcAlabcB 51
3.8.2.5.4 Ligation 52
3.8.2.5.5 Klenow-Behandlung 52
3.8.2.6 Methoden zur Transformation von Bakterien 52
3.8.2.6.1 Transformation von Escherichia coli durch die CaCU-Methode 52
3.8.2.6.2 PEG-induzierte Transformation von Actinomyceten 53
3.8.2.6.3 Intergenerische Konjugation (HOPWOOD, 1989) 54
3.8.2.6.4 Transfektion durch Phagen 54
3.8.3 Analytische Methoden 55
3.8.3.1 Extraktion von Aurantimycin 55
3.8.3.2 Dünnschichtchromatographie zum Nachweis von Aurantimycin 55
3.8.3.3 HPLC-Analyse für Aurantimycin 56
3.8.3.4 Proteinanalytik 56
3.8.3.4.1 Heterologe Expression in Escherichia coli 56
3.8.3.4.2 Heterologe Expression in Streptomyces lividans 56
3.8.3.4.3 Denaturierende Reinigung von Fusionsproteinen 56
3.8.3.4.3.1 Verwendung von pRSETB und pET43.1a 56
3.8.3.3.3.2 Verwendung des pMAL-Systems 57
3.8.3.3.4 SDS-PAGE 57
3.8.3.3.5 Western-Blotting (Immunoblotting) 58
3.8.3.3.5.1 Semi-Dry-Blotting 58
1. Inhalt
3.8.3.3.5.2 Immunofärbung 58
4. Ergebnisse 60
4.1 Etablierung eines Wirts-Vektor-Systems für Streptomyces aurantiacus IMET 43917. 60
4.1.1 Bestimmung des Antibiotika-Resistenzmuster von Streptomyces aurantiacus für
die Auswahl geeigneter Resistenzkassetten 60
4.1.2 PEG-induzierte Protoplasten-Transformation für S. aurantiacus 61
4.1.2.1 Präparation und Regeneration von S. aurantiacus-Protop\asten nach
HOPWOOD (1985) 61
4.1.2.2 PEG-induzierte Transformation von S. aurantiacus-Protop\asien nach
HOPWOOD (1985) zur Inaktivierung eines NRPS-Gens (nrps4) des Aurantimycin-
Clusters durch Genunterbrechungsmutagenese 62
4.1.2.3 Protoplastierung durch Lysozym-Behandlung löst bei S. aurantiacus
Multiresistenz aus 63
4.1.3 Gewinnung von S. aurantiacus-Sporsn zur Verwendung für die intergenerische
Konjugation 64
4.1.4 Intergenerische Konjugation mit Substratmycel von S. aurantiacus 65
4.1.5 Transfektion von Streptomyces aurantiacus mit dem Phagen S7 (DSM 49153). 66
4.2 Charakterisierung des Aurantimycin-Produzenten S. aurantiacus IMET 43917 66
4.2.1 Morphologie und Wachstumsverhalten von Streptomyces aurantiacus 67
4.2.1.1 Festmedien 67
4.2.1.2 Flüssigmedien 68
4.2.1.3 Stress verändert das Resistenzmuster von Streptomyces aurantiacus 69
4.2.2 Analyse der Aurantimycin-Produktion 70
4.2.3 Analyse des roten Pigmentes 71
4.3 Genomanalyse von 5. aurantiacus 72
4.3.1 Auftrennung des Genoms von S. aurantiacus durch Pulsfeldgelelektrophorese 72
4.3.2 PSA1 ist bei allen unterschiedlichen S. aurantiacus-Phänotypen vorhanden 73
4.3.3 Das Aurantimycin-Biosynthesegencluster ist nicht auf PSA1 lokalisiert 73
4.4 Identifizierung des Aurantimycin-Biosynthesegenclusters 75
4.4.1 Erstellung und Screening einer Cosmid-Genbank 75
4.4.2 Charakterisierung des Cosmids cosAU52 mit potentiellen Aurantimycin-
Biosynthesegenen 77
4.4.3 Sequenzierung des Cosmids cosAU52 mit potentiellen Aurantimycin-
Biosynthesegenen 78
4.4.4 Screenen nach Folgecosmiden 78
4.4.4.1 Suche nach Folgecosmiden rechts von cosAU52 79
4.4.4.2 Suche nach Folgecosmiden links von cosAU52 80
4.4.5 Schematische Karte des sequenzierten DNA-Bereichs 81
4.5 Sequenzierung des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 83
4.5.1 Sequenz-Polishing/Finishing der Aurantimycin-Biosyntheseregion aus S.
aurantiacus IMET 43917 83
4.5.2 Genorganisation des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 84
4.5.3 Sequenzanalysen von potentiellen Aurantimycin-Biosynthesegenen 89
4.5.3.1 Gene/Enzyme mit Ähnlichkeit zu Transportern und Membranproteinen 89
4.5.3.2 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese der Polyketid-Seitenkette beteiligt sind
89
4.5.3.3 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese des Peptid-Anteils von Aurantimycin
beteiligt sind 92
4.5.3.4 Gene/Enzyme mit potentiell regulatorischer Funktion 94
4.5.3.5 Gene/Enzyme, die an Oxidationsreakhonen beteiligt sind 95
1. Inhalt
4.5.3.6 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese von Bausteinen der Polykeüd-
Seitenkette beteiligt sind 95
4.5.3.7 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese der aproteinogenen Aminosäure
Piperazinsäure beteiligt sind 96
4.5.3.8 Gene/Enzyme mit unbekannter Funktion 96
4.6 Heterologe Expression von Genen des Aurantimycin-Biosynthese-Genclusters 98
4.6.1 Heterologe Expression des Polyketidanteils mittels cosAU54 und cosAU37 in
Streptomyces UvidansTK23 98
4.6.2 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans 99
4.6.2.1 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans TK23 mit dem
Plasmid pWHM4abc mit konstitutivem ermü^-Promotor 100
4.6.2.2 Heterologe Expression von abcAB in Streptomyces lividans T7 mit dem
Plasmid pABC mit induzierbarem rtp/1-Promotor 100
5. Diskussion 102
5.1 Biosynthese des Polyketid-Anteils von Aurantimycin 102
5.2 Gene/Enzyme, die an der Biosynthese des Peptid-Anteils von Aurantimycin beteiligt
sind 104
5.3 Synthese und Einbau von Piperazinsäure 106
5.4 Gene/Enzyme mit Ähnlichkeit zu Transportern und Membranproteinen 107
5.5 Gene/Enzyme mit unbekannter Funktion 108
5.6 Gene mit Ähnlichkeit zu Regulatoren 108
5.7 Streptomyces aurantiacus ist genetisch instabil 109
5.8 Weiterführende Arbeiten 110
6. Literatur 112
7. Anhang 121 |
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