Lactat bei Schwangeren mit der Kontrollgruppe Schwangere mit Candidose:
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1. Candida-Problem in der Schwangerschaft 6
1.2. Bisherige Candida-Nachweismethoden 9
1.2.1. Mikroskopie 9
1.2.2. Kultur 10
1.2.3. Biochemische Diagnostik 11
1.2.4. Serologische Methoden 11
1.2.5. Molekularbiologische Methoden 13
1.3. Physiologische Vaginalflora 15
1.4. Pathologische Vaginalflora 18
1.5. Vaginale Mykosen 22
1.6. Lactat als möglicher Indikator für die gestörte Vaginalflora 30
1.6.1. Lactat 30
1.6.2. Allgemeine Stellung des Lactats im Stoffwechsel 31
1.6.3. Lactat im Vaginalmilieu 33
1.7. Problemstellung 34
2. Material und Methode 35
2.1. Patientengut 35
2.2. Material 37
2.2.1. Chemikalien für die Untersuchungsmaterialentnahme 37
2.2.2. Chemikalien für die DNA-Extraktion 37
2.2.3. Chemikalien für die Candida-PCR 38
2.2.4. Chemikalien für die Gelelektrophorese 38
2.2.5. Chemikalien für die Lactatbestimmung 39
2.3. Methode 40
2.3.1. Entnahme des Untersuchungsmaterials 40
2.3.2. Vorbereitung der Reagenzien 40
2.3.3. Untersuchungsmethode der Candidabestimmung mittels PCR 40
2.3.3.1. DNA-Extraktion 41
2.3.3.2. Durchführung der PCR 42
2.3.3.3. Gelelektrophorese 44
2.3.4. Untersuchungsmethoden der Lactatbestimmung 46
2.3.5. Statistische Methoden 48
3. Ergebnisse 49
3.1. Ergebnisse zum Candidanachweis mittels PCR 49
4
3.2. Vergleich der Parameter von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 49
3.2.1. Altersvergleich von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 49
3.2.2. Vergleich der SSW von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 51
3.2.3. Vergleich der Lactatwerte von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 52
3.3. Analyse der Abhängigkeit der Lactatkonzentration von der SSW 54
3.4. Vergleich der Gruppen in Bezug auf die Lactatkonzentration unter Einbezug des
Alters 57
3.5. Detaillierte Analyse der Lactatkonzentration der Patientinnen ohne Pilzerkrankung .58
3.6. Untersuchung eines nicht-linearen Zusammenhangs zwischen Lactat-Spiegel und
SSW bei Candidose 61
4. Diskussion 62
5. Zusammenfassung 68
6. Abbildungsverzeichnis 69
7. Literaturverzeichnis 70
8. Anhang 95
Danksagung 101
Lebenslauf 102
69
6. Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Sekretion von Östron, Östradiol und Östriol 17
Abbildung 2: Lactobacillus-Grad I nach Schröder (Donders, G. 2004) 19
Abbildung 3: Lactobacillus-Grad II nach Schröder (Donders, G. 2004) 20
Abbildung 4: Lactobacillus-Grad III nach Schröder (Donders, G. 2004) 20
Abbildung 5: Einige Einflussfaktoren auf das Vaginalmilieu (Martius, G. et al. 1994) 21
Abbildung 6: Erreger der Mykosen im Genitalbereich (Weissenbacher, E. R. et al. 2001) 22
Abbildung 7: Klinische Bilder der Vaginalcandidose (Weissenbacher, E. R. et al. 2001) 24
Abbildung 8: Strukturformel von Milchsäure und L-Lactat 30
Abbildung 9: Stoffwechselwege bei der Bildung und Metabolisierung von Lactat 31
Abbildung 10: Mikrobielle Besiedlung der Vagina in Abhängigkeit des pH-Wertes (Klein.F. 1991) 33
Abbildung 11: Patientenalter des gesamten Patientengutes 35
Abbildung 12: Beispiel für die Analyse einer PCR mit Gelelektrophorese unter UV-Licht: 45
Abbildung 13: Diaglobal-Lactat-Photometer mit Einzeltestküvetten 46
Abbildung 14: Messreaktion für die Lactatbestimmung (Schlegel, R. 1994) 47
Abbildung 15: Diaglobal-Lactat-Photometer 47
Abbildung 16: Altersvergleich von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 50
Abbildung 17: Vergleich der SSW von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 51
Abbildung 18: Vergleich der Lactatwerte von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 53
Abbildung 19: Lactatkonzentration in Abhängigkeit der SSW bei der Kontrollgruppe 54
Abbildung 20: Lactatkonzentration in Abhängigkeit der SSW bei der Untersuchungsgruppe 54
Abbildung 21: Lowess-Smoother-Analyse der Kontrollgruppe 55
Abbildung 22: Lowess-Smoother-Analyse der Untersuchungsgruppe 56
Abbildung 23: Covarianzanalyse 57
Abbildung 24: Multiple Regressionsanalyse der Untersuchungsgruppe 58
Abbildung 25: Graphische Zusammenfassung der einzelnen Analysen 59
Abbildung 26: Lowess-Smoother-Analyse der Untersuchungsgruppe nach Altersgruppen 60
Abbildung 27: Lowess-Smoother-Analyse der Kontrollgruppe nach Altersgruppen 61
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1. Candida-Problem in der Schwangerschaft 6
1.2. Bisherige Candida-Nachweismethoden 9
1.2.1. Mikroskopie 9
1.2.2. Kultur 10
1.2.3. Biochemische Diagnostik 11
1.2.4. Serologische Methoden 11
1.2.5. Molekularbiologische Methoden 13
1.3. Physiologische Vaginalflora 15
1.4. Pathologische Vaginalflora 18
1.5. Vaginale Mykosen 22
1.6. Lactat als möglicher Indikator für die gestörte Vaginalflora 30
1.6.1. Lactat 30
1.6.2. Allgemeine Stellung des Lactats im Stoffwechsel 31
1.6.3. Lactat im Vaginalmilieu 33
1.7. Problemstellung 34
2. Material und Methode 35
2.1. Patientengut 35
2.2. Material 37
2.2.1. Chemikalien für die Untersuchungsmaterialentnahme 37
2.2.2. Chemikalien für die DNA-Extraktion 37
2.2.3. Chemikalien für die Candida-PCR 38
2.2.4. Chemikalien für die Gelelektrophorese 38
2.2.5. Chemikalien für die Lactatbestimmung 39
2.3. Methode 40
2.3.1. Entnahme des Untersuchungsmaterials 40
2.3.2. Vorbereitung der Reagenzien 40
2.3.3. Untersuchungsmethode der Candidabestimmung mittels PCR 40
2.3.3.1. DNA-Extraktion 41
2.3.3.2. Durchführung der PCR 42
2.3.3.3. Gelelektrophorese 44
2.3.4. Untersuchungsmethoden der Lactatbestimmung 46
2.3.5. Statistische Methoden 48
3. Ergebnisse 49
3.1. Ergebnisse zum Candidanachweis mittels PCR 49
4
3.2. Vergleich der Parameter von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 49
3.2.1. Altersvergleich von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 49
3.2.2. Vergleich der SSW von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 51
3.2.3. Vergleich der Lactatwerte von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 52
3.3. Analyse der Abhängigkeit der Lactatkonzentration von der SSW 54
3.4. Vergleich der Gruppen in Bezug auf die Lactatkonzentration unter Einbezug des
Alters 57
3.5. Detaillierte Analyse der Lactatkonzentration der Patientinnen ohne Pilzerkrankung .58
3.6. Untersuchung eines nicht-linearen Zusammenhangs zwischen Lactat-Spiegel und
SSW bei Candidose 61
4. Diskussion 62
5. Zusammenfassung 68
6. Abbildungsverzeichnis 69
7. Literaturverzeichnis 70
8. Anhang 95
Danksagung 101
Lebenslauf 102
69
6. Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Sekretion von Östron, Östradiol und Östriol 17
Abbildung 2: Lactobacillus-Grad I nach Schröder (Donders, G. 2004) 19
Abbildung 3: Lactobacillus-Grad II nach Schröder (Donders, G. 2004) 20
Abbildung 4: Lactobacillus-Grad III nach Schröder (Donders, G. 2004) 20
Abbildung 5: Einige Einflussfaktoren auf das Vaginalmilieu (Martius, G. et al. 1994) 21
Abbildung 6: Erreger der Mykosen im Genitalbereich (Weissenbacher, E. R. et al. 2001) 22
Abbildung 7: Klinische Bilder der Vaginalcandidose (Weissenbacher, E. R. et al. 2001) 24
Abbildung 8: Strukturformel von Milchsäure und L-Lactat 30
Abbildung 9: Stoffwechselwege bei der Bildung und Metabolisierung von Lactat 31
Abbildung 10: Mikrobielle Besiedlung der Vagina in Abhängigkeit des pH-Wertes (Klein.F. 1991) 33
Abbildung 11: Patientenalter des gesamten Patientengutes 35
Abbildung 12: Beispiel für die Analyse einer PCR mit Gelelektrophorese unter UV-Licht: 45
Abbildung 13: Diaglobal-Lactat-Photometer mit Einzeltestküvetten 46
Abbildung 14: Messreaktion für die Lactatbestimmung (Schlegel, R. 1994) 47
Abbildung 15: Diaglobal-Lactat-Photometer 47
Abbildung 16: Altersvergleich von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 50
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Abbildung 18: Vergleich der Lactatwerte von Untersuchungsgruppe und Kontrollgruppe 53
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Abbildung 20: Lactatkonzentration in Abhängigkeit der SSW bei der Untersuchungsgruppe 54
Abbildung 21: Lowess-Smoother-Analyse der Kontrollgruppe 55
Abbildung 22: Lowess-Smoother-Analyse der Untersuchungsgruppe 56
Abbildung 23: Covarianzanalyse 57
Abbildung 24: Multiple Regressionsanalyse der Untersuchungsgruppe 58
Abbildung 25: Graphische Zusammenfassung der einzelnen Analysen 59
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