Rolle von ABCA1 auf das HDL-induzierte Recycling von chylomikronen Bestandteilen:
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2008
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Einleitung 1.
1. Biochemie der Lipoproteine 1
2. Der Lipoproteinstoffwechsel 2
2.1. Der exogene Stoffwechsel weg 3
2.2. Der endogene Stoffwechselweg 4
2.3. Der reverse Cholesterintransport 5
2.4. Apolipoproteine 6
2.4.1. Apolipoprotein AI 6
3. Intrazellulärer Lipid- und Lipoproteinstoffwechsel 7
3.1. Transkriptionelle Regulation der zellulären Cholesterinkonzentration 7
3.2. Recycling von Apolipoprotein E 10
3.3. Zellulärer Cholesterolefflux 14
3.4. Rolle von ABCA1 für den zellulären Lipidstoffwechsel 17
4. Ziel der Arbeit 20
Material und Methoden 2J.
1. Geräte 21
2. Verbrauchsmaterialien 21
3. Reagenzien 22
4. Methoden 24
4.1. Zellkultur 24
4.2. Proteinbestimmung 26
4.3. Infektion der Hepatomazellen HuH7 mit Adenoviren 27
4.4. Recycling-Experiment 28
4.5. Herstellung von delipidiertem HDL 30
4.6. 125I-Chylomikronen-Recycling in Abhängigkeit von
der HDL-Konzentration 31
4.7. Efflux-Experiment der Zellen mit 3H-Cholesterol +/- si RNA 33
4.8. Efflux-Experiment der Zellen mit 3H-Cholesterol +/- Hydroxycholesterol 35
4.9. ApoE CM-Recycling Experiment +/- Hydroxycholesterol 37
Ergebnisse 39
1. l25I-Chylomikronen-Recycling in Abhängigkeit von der HDL-Konzentration 40
2. Down-Regulierung von ABC AI durch Adenoviren-vermittelte siRNA in
humanen Hepatomazellen 42
3. Cholesterolefflux in HuH7 Zellen und Fibroblasten mit und ohne Zusatz von
Hydroxycholesterol 45
4. Chylomikronen-Recycling in An- und Abwesenheit von Hydroxycholesterol 47
5.3H-Cholesteroleffluxexperimente in HuH7-Zellen +/- siRNA 49
6. I25I-Chylomikronen-Recycling in HuH7 +/- siRNA 50
Diskussion 53
Zusammenfassung 59
Literatu rverzeichnis 60
Abbildungsverzeichnis 79
Abkürzungsverzeichnis 80
Erklärung 8J.
Lebenslauf 82
Danksagung 83_
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 79
Abbildungsverzeichnis
Tabelle 1: Zusammensetzung und Eigenschaften der Serumlipoproteine
nach Ultrazentrifugation 2
Abbildung!: ApoE-Recycling Modell 13
Abbildung 2: Zellulärer Cholesterolefflux 16
Abbildung 3: Schematische Darstellung des ABCA1 -Proteins 17
Tabelle 2: Zusammensetzung humaner CM und HDL 40
Abbildung 4: I25I-CM Recycling in Abhängigkeit von der
HDL-Konzentration 41
Abbildung 5: Konfokal mikroskopische Darstellung der
HuH 7-Infektion mit AdGFP 43
Abbildung 6: Abschalten der mRNA-ABCAl Synthese mit siRNA
in HuH7 Zellen 44
Abbildung 7 A-D: Cholesterolefflux in Huh7 Zellen und Fibroblasten mit und
ohne Zusatz von Hydroxycholesterol 46
Abbildung 8 A-B: 125I-ApoE Chylomikronen-Recycling in HuH7 Zellen und
Fibroblasten +/- Hydroxycholesterol nach 240 Minuten 47
Abbildung 9 A-B: 3H-Cholesterinefflux nach 90 Minuten (A) und nach 240
Minuten (B) in HuH7 Zellen+/-siRNA 49
Abbildung 10: l25I-Chylomikronen Recycling nach 90 Minuten in
HuH7+/- siRNA 51
|
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Inhaltsverzeichnis
Einleitung 1.
1. Biochemie der Lipoproteine 1
2. Der Lipoproteinstoffwechsel 2
2.1. Der exogene Stoffwechsel weg 3
2.2. Der endogene Stoffwechselweg 4
2.3. Der reverse Cholesterintransport 5
2.4. Apolipoproteine 6
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3.1. Transkriptionelle Regulation der zellulären Cholesterinkonzentration 7
3.2. Recycling von Apolipoprotein E 10
3.3. Zellulärer Cholesterolefflux 14
3.4. Rolle von ABCA1 für den zellulären Lipidstoffwechsel 17
4. Ziel der Arbeit 20
Material und Methoden 2J.
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4. Methoden 24
4.1. Zellkultur 24
4.2. Proteinbestimmung 26
4.3. Infektion der Hepatomazellen HuH7 mit Adenoviren 27
4.4. Recycling-Experiment 28
4.5. Herstellung von delipidiertem HDL 30
4.6. 125I-Chylomikronen-Recycling in Abhängigkeit von
der HDL-Konzentration 31
4.7. Efflux-Experiment der Zellen mit 3H-Cholesterol +/- si RNA 33
4.8. Efflux-Experiment der Zellen mit 3H-Cholesterol +/- Hydroxycholesterol 35
4.9. ApoE CM-Recycling Experiment +/- Hydroxycholesterol 37
Ergebnisse 39
1. l25I-Chylomikronen-Recycling in Abhängigkeit von der HDL-Konzentration 40
2. Down-Regulierung von ABC AI durch Adenoviren-vermittelte siRNA in
humanen Hepatomazellen 42
3. Cholesterolefflux in HuH7 Zellen und Fibroblasten mit und ohne Zusatz von
Hydroxycholesterol 45
4. Chylomikronen-Recycling in An- und Abwesenheit von Hydroxycholesterol 47
5.3H-Cholesteroleffluxexperimente in HuH7-Zellen +/- siRNA 49
6. I25I-Chylomikronen-Recycling in HuH7 +/- siRNA 50
Diskussion 53
Zusammenfassung 59
Literatu rverzeichnis 60
Abbildungsverzeichnis 79
Abkürzungsverzeichnis 80
Erklärung 8J.
Lebenslauf 82
Danksagung 83_
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 79
Abbildungsverzeichnis
Tabelle 1: Zusammensetzung und Eigenschaften der Serumlipoproteine
nach Ultrazentrifugation 2
Abbildung!: ApoE-Recycling Modell 13
Abbildung 2: Zellulärer Cholesterolefflux 16
Abbildung 3: Schematische Darstellung des ABCA1 -Proteins 17
Tabelle 2: Zusammensetzung humaner CM und HDL 40
Abbildung 4: I25I-CM Recycling in Abhängigkeit von der
HDL-Konzentration 41
Abbildung 5: Konfokal mikroskopische Darstellung der
HuH 7-Infektion mit AdGFP 43
Abbildung 6: Abschalten der mRNA-ABCAl Synthese mit siRNA
in HuH7 Zellen 44
Abbildung 7 A-D: Cholesterolefflux in Huh7 Zellen und Fibroblasten mit und
ohne Zusatz von Hydroxycholesterol 46
Abbildung 8 A-B: 125I-ApoE Chylomikronen-Recycling in HuH7 Zellen und
Fibroblasten +/- Hydroxycholesterol nach 240 Minuten 47
Abbildung 9 A-B: 3H-Cholesterinefflux nach 90 Minuten (A) und nach 240
Minuten (B) in HuH7 Zellen+/-siRNA 49
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