In-vitro-Untersuchungen zum Einfluss von Synovialozyten auf die Matrixdeposition und Proliferation von Gelenkknorpelzellen in einem Co-Kultursystem:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 1
1.1 Allgemeines 1
1.2 Struktur und Funktion von Knorpelgewebe 2
1.3 Struktur und Funktion von Gelenkkapselgewebe 5
1.4 Interaktion von hyalinem Gelenkknorpel und Gelenkkapsel 6
1.5 Zielsetzung der Arbeit 8
2. Material und Methoden 9
2.1 Zellkultur von bovinen Chondrozyten 9
2.2 Isolierung und Kultur von Chondrozyten 9
2.3 Chondrozyten in Monolayerkultur 10
2.4 Chondrozyten in Alginatkultur 10
2.2 Zellkultur von bovinen Synovialozyten 11
2.2.1 Isolierung und Kultur von Synovialozyten 11
2.2.2 Subkultivierung von Synovialozyten 11
2.2.3 Einfrieren und Auftauen von Synovialozyten 12
2.3 Zellkultur von bovinen Corneafibroblasten 13
2.3.1 Isolierung und Kultur von Corneafibroblasten 13
2.3.2 Subkultivierung von Corneafibroblasten 14
2.3.3 Einfrieren und Auftauen von Corneafibroblasten 14
2.4. Das Co-Kultur-System 15
2.4.1 Apparativer Aufbau 15
2.4.2 Chondrozyten und Synovialozyten in Co-Kultur 16
2.5 Untersuchungen an mono-und co-kultivierten Chondrozyten 18
2.5.1 Messen der Biosyntheseaktivität durch Einbau von [3H]-Prolin 18
2.5.2 Proliferationsverhalten von Mono-und Co-Kulturen 19
2.5.2.1 Bestimmung der Zellzahl von mono- und co-kultivierten
Chondrozyten in Monolayerkultur 19
Inhaltsverzeichnis
Seite
2.5.2.2 DNA-Bestimmung nach Karsten und Wollenberger (1977) an
Chondrozyten in Alginatkulturen 19
2.5.3 Immunhistochemie an Chondrozyten in Alginatkultur 20
2.5.3.1 Beschichten der Objektträger mit Chromalauengelatine 20
2.5.3.2 Einbetten von Alginatkugeln in Paraffin und Herstellen von
Paraffinschnitten 20
2.5.3.3 Ansetzen von Tris-NaCL 21
2.5.3.4 Qualitativer Nachweis von Kollagen Typ I und Kollagen Typ II 22
2.5.4 Elektronenmikroskopie von Chondroyzten in Monolayerkultur 23
2.5.4.1 Einbetten von Monolayern in den Inserts in Araldit 23
2.5.4.2 Herstellen von Dünnschnitten und Elektronenmikroskopie 24
2.5.5 Westernblot/Semiquantitativer Nachweis von Kollagen Typ II an
Chondrozyten in Alginatkultur 25
2.5.5.1 Auflösen der Alginatkugeln und Probenverdau 25
2.5.5.2 Herstellen von Sammel- und Trenngel 26
2.5.5.3 Acrylamidgelelektrophorese 27
2.5.5.4 Westernblot 28
3. Ergebnisse 30
3.1 Technische Realisierung der Co-Kultur 30
3.2 Synovialozyten und Corneafibroblasten in Kultur 30
3.2.1 Lichtmikroskopische Darstellung von Synovialozyten 30
3.2.2 Lichtmikroskopische Darstellung von Corneafibroblasten 31
3.3 Untersuchungen von mono- und co-kultivierten Chondrozyten
in Monolayerkultur 33
3.3.1 Lichtmikroskopische Darstellung von Chondrozyten 33
3.3.2 Elektronenmikroskopische Darstellung von Chondrozyten 34
3.3.3 Bestimmung der Zellzahl von mono- und co-kultivierten
Chondrozyten 34
Inhaltsverzeichnis
Seite
3.4 Untersuchungen von mono- und co-kultivierten Chondrozyten
in Alginatkultur 36
3.4.1 Lichtmikroskopische Darstellung von Chondrozyten 36
3.4.2 Messung der Biosyntheseaktivität 37
3.4.3 DNA-Bestimmung 39
3.4.4 Immunhistochemischer Nachweis von Kollagen Typ II
und Bewertung der Ausbildung von Zellclustern 40
3.4.5 Westernblot: Semiquantitativer Nachweis von Kollagen Typ II 42
3.4.6 Immunhistochemischer Nachweis von Kollagen Typ I 43
4. Diskussion 45
5. Zusammenfassung 52
6. Literaturverzeichnis 54
7. Danksagung 60
8. Lebenslauf 61
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
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1. Einleitung 1
1.1 Allgemeines 1
1.2 Struktur und Funktion von Knorpelgewebe 2
1.3 Struktur und Funktion von Gelenkkapselgewebe 5
1.4 Interaktion von hyalinem Gelenkknorpel und Gelenkkapsel 6
1.5 Zielsetzung der Arbeit 8
2. Material und Methoden 9
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2.2 Isolierung und Kultur von Chondrozyten 9
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2.2 Zellkultur von bovinen Synovialozyten 11
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2.3.3 Einfrieren und Auftauen von Corneafibroblasten 14
2.4. Das Co-Kultur-System 15
2.4.1 Apparativer Aufbau 15
2.4.2 Chondrozyten und Synovialozyten in Co-Kultur 16
2.5 Untersuchungen an mono-und co-kultivierten Chondrozyten 18
2.5.1 Messen der Biosyntheseaktivität durch Einbau von [3H]-Prolin 18
2.5.2 Proliferationsverhalten von Mono-und Co-Kulturen 19
2.5.2.1 Bestimmung der Zellzahl von mono- und co-kultivierten
Chondrozyten in Monolayerkultur 19
Inhaltsverzeichnis
Seite
2.5.2.2 DNA-Bestimmung nach Karsten und Wollenberger (1977) an
Chondrozyten in Alginatkulturen 19
2.5.3 Immunhistochemie an Chondrozyten in Alginatkultur 20
2.5.3.1 Beschichten der Objektträger mit Chromalauengelatine 20
2.5.3.2 Einbetten von Alginatkugeln in Paraffin und Herstellen von
Paraffinschnitten 20
2.5.3.3 Ansetzen von Tris-NaCL 21
2.5.3.4 Qualitativer Nachweis von Kollagen Typ I und Kollagen Typ II 22
2.5.4 Elektronenmikroskopie von Chondroyzten in Monolayerkultur 23
2.5.4.1 Einbetten von Monolayern in den Inserts in Araldit 23
2.5.4.2 Herstellen von Dünnschnitten und Elektronenmikroskopie 24
2.5.5 Westernblot/Semiquantitativer Nachweis von Kollagen Typ II an
Chondrozyten in Alginatkultur 25
2.5.5.1 Auflösen der Alginatkugeln und Probenverdau 25
2.5.5.2 Herstellen von Sammel- und Trenngel 26
2.5.5.3 Acrylamidgelelektrophorese 27
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3.2 Synovialozyten und Corneafibroblasten in Kultur 30
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3.2.2 Lichtmikroskopische Darstellung von Corneafibroblasten 31
3.3 Untersuchungen von mono- und co-kultivierten Chondrozyten
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3.3.3 Bestimmung der Zellzahl von mono- und co-kultivierten
Chondrozyten 34
Inhaltsverzeichnis
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3.4 Untersuchungen von mono- und co-kultivierten Chondrozyten
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3.4.1 Lichtmikroskopische Darstellung von Chondrozyten 36
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