Shigatoxin-spezifische Immunglobulien und Ausscheidung von Shigatoxin-bildenden Escherichia Coli bei Kälbern:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler
2009
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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IMAGE 1
I INHALT
I INHALT
I INHALT I
II ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
III EINLEITUNG 1
IV LITERATURUEBERSICHT 2
1 DEFINITION UND WIRTSSPEKTRUM SHIGATOXIN-BILDENDER ESCHERICHIA COLI
(STEC) 2
2 VIRULENZFAKTOREN DER STEC 3
2.1 SHIGATOXINE (STX) 3
2.2 INTIMIN UND TYP III SEKRETIONSSYSTEM 8
2.3 ENTEROHAEMOLYSIN 9
3 STEC-INFEKTIONEN BEIM RIND 10
3.1 PRAEVALENZ VON STEC 10
3.2 SYMPTOMATIK BOVINER STEC-INFEKTIONEN 14
3.3 EPIDEMIOLOGIE DER STEC IN DER RINDERPOPULATION 15
3.3.1 ERSTINFEKTION UND STEC-AUSSCHEIDUNG IN VERSCHIEDENEN
LEBENSABSCHNITTEN 15
3.3.2 INTERMITTIERENDE AUSSCHEIDUNG VON STEC UND *SUPERSHEDDER" 16
3.3.3 DAUER DER STEC-AUSSCHEIDUNG 18
3.3.4 SEROTYPEN-SPEZIFISCHE STEC-AUSSCHEIDUNG 20
4 STEC-SPEZIFISCHE IMMUNITAET BEIM RIND 21
4.1 HUMORALE IMMUNITAET 21
4.1.1 O-ANTIGENE 28
4.1.2 STX 30
4.1.3 WEITERE STEC-ANTIGENE 32
4.1.4 PROTEKTIVITAET EINER HUMORALEN STEC-IMMUNITAET 34
4.2 ZELLULAERE IMMUNITAET UND IHRE MOEGLICHE BEDEUTUNG 35
5 ANTIGEN-UNSPEZIFISCHE IMMUNMODULATION DURCH STEC-FAKTOREN 36
5.1 LYMPHOSTATIN 36
5.2 STX 38
V MATERIAL UND METHODEN 40
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/994762534
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
I INHALT
1 PROBENGEWINNUNG 40
1.1 BETRIEBSDATEN 40
1.2 ENTNAHMEZEITPUNKTE UND PROBENPLAN 41
1.2.1 MUTTERTIERE 41
1.2.2 KAELBER 41
1.2.3 WEITERE TIERE 42
1.3 PROBENENTNAHME 42
1.3.1 BLUTPROBEN ZUR SERUMGEWINNUNG 42
1.3.2 KOLOSTRUM 43
1.3.3 MILCH 43
1.3.4 KOT 43
1.4 PROBENAUFBEREITUNG 43
1.4.1 GEWINNUNG VON SERUM AUS BLUTPROBEN 43
1.4.2 VERARBEITUNG VON KOLOSTRUM- UND MILCHPROBEN 43
2 ZELLKULTURMETHODEN 44
2.1 ZELLLINIEN 44
2.2 GEWINNUNG UND KULTIVIERUNG VON PRIMAEREN, BOVINEN KOLONKRYPTENZELLEN
45
3 NACHWEIS VON STX-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN IN SERUM-, KOLOSTRUM- UND
MILCHPROBEN 47
3.1 VEROZELLTEST 47
3.1.1 PRINZIP DES NEUTRALISATIONSTESTES 47
3.1.2 PRINZIP DES ZYTOTOXIZITAETSTESTES 49
3.1.3 AUSWEITUNG 50
3.1.4 BERECHNUNG DER VEROZYTOTOXISCHEN/INHIBITORISCHEN DOSIS 5 0% 51
3.1.4.1 BERECHNUNG DER VEROZYTOTOXISCHEN DOSIS 50 % 51
3.1.4.2 BERECHNUNG DER INHIBITORISCHEN DOSIS 50 % 54
3.1.4.3 NACHWEISGRENZE SOWIE DEFINITION VON TITERABFALL UND TITERANSTIEG
54
3.2 EL1SA 55
3.2.1 DURCHFUEHRUNG DES STX-ELISA 55
3.2.2 HERSTELLUNG VON E. CO//-ULTRASCHALL-LYSATEN 56
3.2.3 UEBERPRUEFUNG UND EINSTELLUNG DER ULTRASCHALL-LYSATE 57
3.2.4 DURCHFUEHRUNG DES KOMPETITIVEN ELISA 58
3.3 WESTERN BLOT UND IMMUNOFAERBUNG 60
3.3.1 TRICINE-SDS-PAGE 60
3.3.2 UEBERPRUEFUNG DES VERWENDETEN STXL 61
3.3.3 SEMI-DRY WESTERN BLOT 62
3.3.4 IMMUNOFAERBUNG 63
3.3.4.1 EINSTELLUNG DER PRIMAER- UND SEKUNDAERANTIKOERPER-KONZENTRATIONEN
63
4 NACHWEIS DER STEC-AUSSCHEIDUNG 64
IMAGE 3
I INHALT
4.1 NACHWEIS VON STX-GENEN IN KOTPROBEN 64
4.1.1 PROBENAUFBEREITUNG 64
4.1.2 STXL/STX2-MU\TIP]EX.-PCR 65
4.1.3 BESTIMMUNG DER NACHWEISGRENZE FUER DIE STX 1 /STX2-MUHIP\EX-PCR 66
4.1.4 JFT2-TYPISIERUNGS-PCRS 69
4.1.5 BESTIMMUNG DER NACHWEISGRENZE FUER DIE ITT2/STT2C-TYPISIERUNGS-PCR
71
4.2 NACHWEIS VON STX IM KOT 72
5 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON STEC-STAEMMEN 73
5.1 ANZUCHTVERFATNEN 73
5.2 TYPISIERUNG DER STEC 73
5.2.1 ITT//ITO2-MULTIPLEX-PCR UND SFT:2-TYPISIERUNGS-PCRS 73
5.2.2 MULTIPLEX-PCR FIIRSA, EHXA, EAE 73
5.2.3 INTIMIN-TYPISIERUNGS-PCR 75
5.2.4 WACHSTUM AUF SELEKTIVAGAR 75
5.2.5 UEBERPRUEFUNG DER IN W/RO-STX-BILDUNG 75
5.2.6 PULSFELD-GELELEKTROPHORESE (CHEF-PFGE) 76
5.3 BINDUNGSVERSUCHE IM ZELLKULTURMODELL (ADHAESIONSTESTS) 79
5.3.1 VERWENDETET. CO/Z-STAEMME 79
5.3.2 ANZUCHT DER BAKTERIEN 79
5.3.3 FLUORESCENCE ACTIN STAINING-TEST (FAS-TEST) 80
5.3.4 GIEMSA-TEST 82
5.3.5 NACHWEIS VON STX IN ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 83
VI ERGEBNISSE 85
1 NACHWEIS VON STX-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN IN SERUM-, KOLOSTRUM- UND
MILCHPROBEN 85 1.1 VEROZELL-NEUTRALISATIONSTEST 85
1.1.1 STX 1-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 85
1.1.1.1 SERUM, KOLOSTRUM UND MILCH DER MUTTERTIERE 85
1.1.1.2 SERUM DER KAELBER 88
1.1.1.3 SERUM WEITERER TIERE 91
1.1.2 STX2-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 92
1.1.2.1 SERUM, KOLOSTRUM UND MILCH DER MUTTERTIERE 92
1.1.2.2 SERUM DER KAELBER 92
1.1.2.3 SERUM WEITERER TIERE 94
1.1.3 STX2C-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 94
1.2 KOMPETITIVER ELISA 94
1.2.1 STX 1-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 94
1.2.2 STX2-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 95
1.2.3 STX2C-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 96
III
IMAGE 4
1 INHALT
1.3 WESTERN BLOT/IMMUNOFAERBUNG 97
1.3.1 STX 1-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 97
2 NACHWEIS DER STEC-AUSSCHEIDUNG 100
2.1 KOTUNTERSUCHUNGEN MITTELS PCR 100
2.1.1 SFCC/ATT2-MULTIPLEX-PCR 100
2.1.2 JTT2-TYPISIERUNGS-PCRS 104
2.2 NACHWEIS VON STX IM KOT 109
3 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON BOVINEN STEC-STAEMMEN 109
3.1 TYPISIERUNG DER ISOLIERTEN STAEMME 109
3.1.1 CHARAKTERISIERUNG DES MAKRORESTRIKTIONSMUSTERS VIA PFGE-ANALYSE
112
3.1.2 BESTIMMUNG DES INTIMIN-SUBTYPS 113
3.2 BINDUNGSVERSUCHE IM ZELLKULTURMODELL 113
3.2.1 BINDUNGSVERSUCHE MIT HEP2(CLONE2B)-ZELLEN 114
3.2.1.1 FAS-TEST 114
3.2.1.2 GIEMSA-TEST 115
3.2.2 BINDUNGSVERSUCHE MIT BOVINEN KOLONKRYPTENZELLEN 117
3.2.2.1 FAS-TEST 117
3.2.2.2 GIEMSA-ADHAESIONSTEST 118
3.2.2.3 NACHWEIS VON STX IN ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 120
VII DISKUSSION 122
VIII ZUSAMMENFASSUNG 136
IX SUMMARY 138
X LITERATURVERZEICHNIS 140
XI ANHANG 161
1 UEBERSICHT UNTERSUCHTE TIERE 161
2 STX-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER, VEROZELL-NEUTRALISATIONSTEST UND
KOMPETITIVER ELISA, EINZELNE
TITERWERTE 165
3 UEBERSICHT UEBER VERWENDETE GERAETE, CHEMIKALIEN UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN 172
4 VERWENDETE PUFFER UND MEDIEN 179
4.1 PUFFER, LOESUNGEN UND MEDIEN FUER ZELLKULTURTECHNIKEN 179
IV
IMAGE 5
I INHALT
4.2 PUFFER UND LOESUNGEN FUER DEN ELISA 183
4.3 PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE TRICINE-PAGE 184
4.4 PUFFER UND LOESUNGEN FUER WESTERN BLOT UND IMMMUNOFAERBUNG 185
4.5 PUFFER UND LOESUNGEN FUER CHEF-PFGE 187
4.6 PUFFERUND LOESUNGEN FUER PCRS 189
4.7 KULTURMEDIEN FUER DIE BAKTERIENANZUCHT 189
XII ABBILDUNGSVERZEICHNIS 191
1 ABBILDUNGEN 191
2 TABELLEN 192
V |
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