Untersuchungen zum Export verzweigtkettiger Aminosäuren in Corynebacterium glutamicum:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Jülich
Forschungszentrum, Zentralbibliothek
2003
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| Schriftenreihe: | Berichte des Forschungszentrums Jülich
4054 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
7
1
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
7
2
NAEHRMEDIEN
UND
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
11
2.1
NAEHRMEDIEN
11
2.2 ZUSAETZE
ZU
DEN
MEDIEN
11
2.3
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
12
2.4
STAMMHALTUNG
13
3
MOLEKUIARGENETISCHE
METHODEN
13
3.1
DNA-ISOLIERUNG
14
3.2
RESTRIKTION,
MODIFIKATION
UND
LIGATION
VON
DNA
15
3.3
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MITTELS
POLYMERASEKETTEN
REAKTION
16
3.4
TRANSFORMATIONSTECHNIKEN
17
3.5 PLASMIDTRANSFER
VON
E.
COLI
NACH
C.
GLUTAMICUM
DURCH
KONJUGATION_
18
3.6
T
RANSPOSONMUTAGENESE
19
3.7
KONSTRUKTION
UND
NACHWEIS
VON
INTEGRATIONS
UND
DELETIONSMUTANTEN
VON
C.
GLUTAMICUM
20
3.8
HERSTELLUNG
VON
STAEMMEN
ZUR
PRODUKTION
VON
L-ISOLEUCIN
MIT
C.
GLUTAMICUM
21
3.9
SEQUENZIERUNG
UND
COMPUTERGESTUETZTE
SEQUENZANALYSEN
23
4
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
AMINOSAEUREN
24
5
BESTIMMUNG
VON
EXPORTRATEN
24
5.1
EXPORTRATENASSAY
25
5.2
SILIKONOELZENTRIFUGATION
26
5.3
BERECHNUNGEN
ZUR
EXPORTRATE
FUER
L-ISOLEUCIN,
L-LEUCIN
UND
L-VALIN
_
27
6
BIOCHEMISCHE
METHODEN
28
6.1
NATIVE
PROTEINAUFREINIGUNG
VON
6
X
HISTIDIN-FUSIONSPROTEINEN
MIT
NI
NTA-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
28
6.2 PROTEINBESTIMMUNG
30
6.3
PROTEIN
UND
WESTERN-BLOT-ANALYSE
30
6.4
ANALYSE
VON
PROTEINEN
MITTELS
MALDI-TOF-MS
ANALYSE
31
6.5
BESTIMMUNG
VON
SS-GALAKTOSIDASE
AKTIVITAET
32
III.
ERGEBNISSE
33
1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
PEPTID-SENSITIVER
TRANSPOSONMUTANTEN
33
1.1
SCREENINGSYSTEM
AUF
PEPTIDSENSITIVITAET
33
1.2
TRANSPOSONMUTAGENESE
UND
ISOLIERUNG
PEPTID-SENSITIVER
MUTANTEN
_34
1.3
IDENTIFIZIERUNG
DES
INSERTIONSORTES
DES
TRANSPOSONS
PEPTID-SENSITIVER
MUTANTEN
36
1.4
UNTERSUCHUNGEN
DER
TRANSPOSONMUTANTEN
38
2
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EXPORT
VERZWEIGTKETTIGER
AMINOSAEUREN
43
2.1
ISOLIERUNG
DES
BRNFEIRP
GENCLUSTERS
AUS
C.
GLUTAMICUM
13032
UND
SEQUENZVERGLEICH
43
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.2
STAMMKONSTRUKTIONEN
UND
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
FUNKTION
DES
BMFEIRP
GENCLUSTERS
IN
C.
GLUTAMICUM
45
2.3
QUANTIFIZIERUNG
VON
ISOLEUCIN-EXPORTRATEN
IN
C.
GLUTAMICUM
BEI
UNTERSCHIEDLICHER
EXPRESSION
VON
BMFE
49
2.4
PHYSIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
HETERODIMEREN
AUFBAU
DES
EXPORTERS
BRNFE
_
54
2.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPEZIFITAET
DES
EXPORTES
_
56
2.6
BEDEUTUNG
DES
PUTATIVEN
REGULATORS
LRP
FUER
DEN
ISOLEUCINEXPORT
_
59
3
IDENTIFIZIERUNG
DER
LIV-E
FAMILIE
DER
TRANSPORTER
_
60
3.1
PHYLOGENETISCHE
ANALYSEN
_
60
3.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
PARALOGEN
BMFE-SYSTEM
IN
C.
GLUTAMICUM
_
67
3.2.1
SEQUENZANALYSE
67
3.2.2
KONSTRUKTION
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINER
BMF-2
INAKTIVIERUNGSMUTANTE
70
3.2.3
KONSTRUKTION
EINES
BRNF-2-/ACZ-FUSIONSSTAMMES
UND
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EXPRESSION
_
73
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
STRUKTUR
DES
ISOLEUCINEXPORTERS
77
4
EINFLUSS
DES
TRANSPORTES
VERZWEIGTKETTIGER
AMINOSAEUREN
AUF
DIE
ISOLEUCINBILDUNG
MIT
C.
GLUTAMICUM
84
4.1
EINFLUSS
DES
EXPORTERS
BRNFE
AUF
DIE
ISOLEUCINBILDUNG
IN
MH20-
22BA/YSA
86
4.2
EINFLUSS
DES
AUFNAHMESYSTEMS
BRNQ
AUF
DIE
ISOLEUCINBILDUNG
89
IV.
DISKUSSION
92
V.
ZUSAMMENFASSUNG
103
V.
LITERATURVERZEICHNIS
104
VI.
ANHANG
117
1
OLIGONUKLEOTIDSEQUENZEN
117
2
PLASMID
KARTEN
120
3
DELETIONSNACHWEISE
126
4
DATENBLAETTER
ZUR
PRODUKTBILDUNG
128 |
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