Analyse der Bindung von Peptiden und Glycopeptiden aus dem V3-Bereich des HIV-1 Glycoproteins gp120 mit dem humanen Korezeptor CCR5:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Marburg
Görich und Weiershäuser
2006
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| Schriftenreihe: | Wissenschaft in Dissertationen
823 |
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Inhaltsverzeichnis:
1 Biologischer Hintergrund 1
1.1 AIDS und HIV 1
1.1.1 Allgemeines 1
1.1.2 Beschreibung des Erregers 2
1.1.3 Mechanismus der Infektion 3
1.2 Beteiligte Proteine 6
1.2.1 Der primäre Rezeptor CD4 6
1.2.2 Die Korezeptoren CXCR4 und CCR5 6
1.2.3 Das Glycoprotein gpl20 7
1.3 Therapieansätze 10
1.3.1 HAART-Kombinationstherapie 10
1.3.2 Weitere Therapieansätze 11
1.3.3 fnfry-Inhibitoren 11
2 Methoden 13
2.1 Peptidsynthese 13
2.2 Massenspektrometrische Methoden. 15
2.3 Liposomenpräparation 15
2.4 NMR-Methoden. 18
2.4.1 NMR-Screening 18
2.4.2 STD-NMR 20
2.4.3 STDD-NMR 23
3 Problemstellung 25
4 Ergebnis und Diskussion 26
4.1 Übersicht der dargestellten Liganden des CCR5 Rezeptors 26
4.2 Darstellung von Vesikeln 27
4.2.1 Ghostzellenpräparation 27
4.2.2 Liposomenpräparation 28
4.2.2.1 Liposomen aus humanen osteo sarcoma Zellen 28
4.2.2.2 Liposomen aus lipiden. 30
4.3 Optimierung der NMR-spektroskopischen Sättigung der Liposomen 30
4.4 NMR-Experimente zur Uposomenhüllkurve 32
II Inhaltsverzelchnl»
4.5 Bestimmungen der Iigandenaitefakte 34
4.6 STDD-NMR-Studien von Liganden des CCR5: Bestimmung des Kp 36
4.6.1 Bestimmung der Bindungskonstante der Glycopeptids 1 39
4.6.2 Bestimmung der Bindungskonstante der Peptids 2 40
4.6.3 Bestimmung der Bindungskonstante des NrChitobiosylasparagins 3 41
4.7 STD-NMR-Studien von Liganden des CCR5: Bestimmung der Bindungsepitope ..42
4.7.1 Bestimmung des Bindungsepitops des Glycopeptids 1 44
4.7.2 Bestimmung des Bindungsepitops des Peptids 2 52
4.7.3 Bestimmung des Bindungsepitops des JvyChitobiosylasparagins 3 58
4.8 Untersuchungen zur Spezifitat der beobachteten Bindungsereignisse 60
4.8.1 Interaktion des Glycopeptids 1 mit leberlipidhaltigen Liposomen 60
4.8.2 Interaktion des Fibronepeptid A mit CCR5-Liposomen. 61
4.8.3 Interaktion des Glycopeptids 1 mit den Parentalliposomen 63
4.8.4 Vergleich der Untersuchungen zur Spezifitat der Bindungsereignisse 64
4.9 Struktur-Aktivitäts-Beziehung 64
4.9.1 Vergleich der Dissoziationskonstanten 64
4.9.2 Vergleich der Bindungsepitope 65
4.9.3 Analyse des Bindungsmotifs der V3-Loop .67
4.10 Ausblick .74
5 Zusammenfassung 75
6 Summary 77
7 Experimenteller Teil 79
7.1 Allgemeine Arbeitsvorschriften 82
7.2 Synthese des Glycopeptids 1 88
7.3 Synthese des Peptids 2 94
7.4 Synthese des tfyChitobiosylasparagins 3 100
7.5 Charakterisierung des Fibrinopeptids A 102
7.6 Bestimmung des CCR5 Rezeptors auf den CCR5 Zellen. 104
7.7 NMR-Proben der Ligandea 104
7.8 STD NMR-Proben der Liposomen und Liganden 106
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