Zur Immunpathogenese der tropischen Theileriose des Rindes: phänotypische Charakterisierung und Proliferation Theileria annulata-(Dschunkowsky und Luhs, 1904) infizierter Zellen = Phenotypical characterisation and proliferation of Theileria annulata (Dschunkowsky and Luhs, 1904)-infected cells
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| Veröffentlicht: |
Aachen
Shaker
1996
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| adam_text | Titel: Zur Immunpathogenese der tropischen Theileriose des Rindes
Autor: Schop, Birte
Jahr: 1996
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung __________________________________________________________1
2. Literaturübersicht_____________________________________________________3
2.1. Ätiologie der tropischen Theileriose 3
2.2. Klinische Symptomatik 5
2.3. Immunologische Aspekte 6
2.3.1. Allgemeine immunologische Mechanismen gegen Theilerien 6
2.3.2. Humorale Immunantwort 6
2.3.2.1. Humorale Immunantwort gegen Sporozoiten 7
2.3.2.2. Humorale Immunantwort gegen Schizonten 8
2.3.2.3. Humorale Immunanwort gegen Merozoiten 8
2.3.3. Zelluläre Immunantwort 8
2.4. Transformation von Rinderzellen durch Theilerien 11
2.4.1. Phänotypische Charakterisierung der Zielzellen 11
2.4.1.1. Phänotypische Differenzierung boviner Leukozyten 11
2.4.1.2. Phänotypische Charakterisierung Theileria-ioSinerter Zellen 13
2.4.2. Bedeutung von Zytokinen für das Wachstum Theileriainfizierter Zellen 16
3. Material und Methoden ________________________________________________20
3.1. Zellkulturtechnik 20
3.1.1. Isolierung peripherer Bhittymphozvten (PBL) 20
3.1.2. Zellzahl- und Vitalitätsbestimmung 20
3.1.3. In vitro-Infektion von Rinder-PBL
mit Sporozoiten von Theileria annulata 21
3.1.4. Gewinnung von in vivo-infizierten Zeilen und
die Etablierung als Zellinie 21
3.1.5. Kultivierung Theileria-iaBziecter Zellen 22
3.1.6. Klonierung von Theileria anmtlata-m Äenea Zellen 22
3.1.7. Stimulation von PBL mk dem Mhogen Concanavalin A (Con A) 23
3.2. Immunzytochemische Färbungen 23
3.2.1. Verwendete Zellinien 24
3.2.2. Monoklonale Antikörper 25
3.2.3. Herstellung und Vorbereitung der Präparate 25
3.2.4. Immunenzymatische Färbung mit der „Alkalische Phosphatase-
Anti-Alkalische Phosphatase (APAAP)-Technik 26
3.2.5. lmmunenzymatische Färbung mit Meerrettichperoxidase 27
3.2.6. DoppelfarbungmitderAPAAP-TechnikundderPeroxidasefirbung 28
3.2.7. Verwendete Materialien 28
3.3. Immunfluoreszenztechnik 31
3.3.1. Verwendete Zellinien und Antikörper 31
3.3.2. Nachweis verschiedener Oberflächenantigene auf Theileria armulata-
infizierten Zellen mittels der FACS-Analyse 33
3.4. Proliferation Theileriaannulata-ir äenei: Zellen 34
3.4.1. ^-Thymidineinbau 34
3.4.2. Behandlung Theileria armulata-in nerter Zellen mit dem Medikament
Buparvaquone (Butalex ) in Mikrotiterplatten 35
3.4.3. Stimulation unbehandeher Theileria armulata-in zierta Zellen mit
Zytokinen 35
3.4.4. Gewinnung von Überständen von Theileria armulata-ui nerten Zellen 36
3.4.5. Inkubation 7Äe;fena-infizierter Zellen
mit einem Antikörper gegen Interieukin-2 (anti-IL-2) 36
3.5. Molekularbiologische Methoden 37
3.5.1. Vorbehandlung von Geräten und Losungen 37
3.5.2. Isolierung von mKNA aus Tkeileria-inSiaerten Zellen 38
3.5.3. Herstellung von cDNA 39
3.5.4. Herstellung der Primer 40
3.5.5. Porymerase-Ketteiireaktion(PCR) 41
3.5.6. Auftrennung der PCR-Produkte in der Agarose-Gdeiektrophorese 42
3.5.7. Verwendete Reagenzien und Lösungen 43
4. Ergebnisse________________________________________________________45
4.1. Phänotypische Charakterisierung Theileria-wßTierter Zellen 45
4 2. Proüferationsvennögen Theileria annulata- nf±rierter Zellen 58
4.3. Einfluß der theilerraden SubstanzBuparvaquone
auf das Wachstum Theileria armulata-xs äenec Zellen 60
4.4. Wirkung verschiedener Zytokine auf das Proliferationsverhalten
von Theileria anmtlata-nßäerten Zeilen 63
4.5. Rolle des Interieukin-2 (IL-2) bei der Proliferation
Theileria amiulata- in nertet Zellen 63
4.6. Bilden Theileria armulata-m neite Zellen einen Wachstumsfäktor? 65
4.6.1. Wirkung von anti-IL-2 auf das Wachstum
Theileria-infizierter Zellen 67
4.6.2. Nachweis der Expression von mRNA
für bovines IL-2 in Theileria annulata-aßnertea Zellinien 70
5. Diskussion 74
6. Zusammenfassung 84
7. Summarv 85
8. Literaturverzeichnis 86
9. Anhang 101
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