Pharmakologische Charakterisierung von Komponenten des epithelialen ATP-empfindlichen Kaliumkanals der Niere:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1999
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PHARMAKOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG
VON KOMPONENTEN DES EPITHELIALEN ATP-EMPFINDLICHEN KALIUMKANALS DER
NIERE
DISSERTATION
DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND PHARMAZIE
DER EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAET TUEBINGEN
ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES DOKTORS
DER NATURWISSENSCHAFTEN
1999
VORGELEGT VON
ALEXANDER THOMAS BACHMANN
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS IH_
II INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
1.1 ATP-EMPFLNDLICHE KALIUMKANAELE (K ATP -KANAELE) ENTLANG DES TUBULUS-
SYSTEMS DER NIERE 1
1.1.1 FUNKTION UND MOLEKULARE STRUKTUR VON K ATP -KANAELEN 1
1.1.2 EPITHELIALE K ATP -KANAELE DER NIERE 3
1.2 CFTR- (CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR)
CHLORIDKANAL 5
1.2.1 TOPOLOGIE DES CFTR 5
1.2.2 BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN UND FUNKTION 6
1.2.3 CFTR ALS EIN REGULATOR ANDERER KANAELE 14
1.3 PHARMAKOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN DES CFTR UND CHARAKTERISIERUNG
DER VERWENDETEN SUBSTANZEN 17
1.3.1 SULFONYLHARNSTOFFE UND BENZOESAEURE-ANALOGA 17
1.3.2 OEFFNER 20
21
1.4 ROMK-KALIUMKANAELE (KIRL.L) 26
1.5 XENOPUS LAEVIS-OOZYTEN ALS EXPRESSIONSSYSTEM 28
1.6 AUFGABENSTELLUNG 30
IMAGE 3
IV
INHALTSVERZEICHNIS
MATERIAL UND METHODEN 31
2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 31
2.1.1 MATERIAL 31
2.1.2 HERSTELLUNG VON KOMPETENTEN E.RO/I -BAKTERIEN UND TRANSFORMATION
MIT DEM CFTR-VEKTOR 36
2.1.3 GEWINNUNG VON PLASMID-DNA 37
2.1.4 LINEARISIERUNG DER PLASMID-DNA 38
2.1.5 IN VITRO TRANSKRIPTION 39
2.2 OOZYTENPRAEPARATION 42
2.2.1 MATERIAL
2.2.2 OOZYTENISOLIERUNG
2.2.3 CRNA-INJEKTION
42
43
44
2.3 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE ARBEITSMETHODEN 46
2.3.1 MATERIAL
2.3.2 ZWEI-MIKROELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME
2.3.3 PATCH CLAMP-TECHNIK
2.3.4 AUFBAU DES ELEKTROPHYSIOLOGISCHCN MESSPLATZES
46
48
49
52
2.4 AKTIVIERUNG DES CFTR-CHLORIDKANALS 54
2.5 VERWENDETE SUBSTANZEN 55
2.6 DATENAUSWERTUNG UND STATISTIK 56
INHALTSVERZEICHNIS
3 ERGEBNISSE 57
3.1 IN VITRO TRANSKRIPTION 57
3.2 CFTR-CHLORIDIONENKANAL 59
3.2. 1 UNTERSUCHUNGEN MIT HILFE DER ZWEI-MIKROELEKTRODEN-SPANNUNGS-
KLEMME
3.2.2 GLIBENCLAMID (GBC) UND METABOLITEN
3.2.3 ANDERE K ATP -MODULATOREN
3.2.4 SURAMIN
3.2.5 HOE293B
3.2.6 PHLOXIN B
3.2.7 UNTERSUCHUNGEN MIT PHENOLPHTHALEIN UND PHTHALSAEURE
59
63
67
68
70
75
86
3.3 ROMKL-KALIUMKANAL 87
4 DISKUSSION 93
4.1 PHARMAKOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DES CFTR-CHLORIDIONENKANALS 93
4.1.1 BIOPHYSIK DES CFTR-CHLORIDIONENSTROMES 93
4.1.2 GLIBENCLAMID ALS INHIBITOR DES OFFENEN CFTR-KANALS 94
4.1.3 POTENTE HEMMUNG VON I A DURCH SURAMIN 95
4.1.4 INHIBITION DES CHLORIDIONENSTROMS DURCH HOE 293B 95
4.1.5 STIMULATION UND INHIBITION DES CFTR-CHLORIDKANALS DURCH PHLOXIN B
98
4.2 PHARMAKOLOGIE VON ROMK1 101
ZUSAMMENFASSUNG 102
IMAGE 4
VI INHALTSVERZEICHNIS
6 LITERATUR 104
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