Einfluß von tumorpromovierenden Xenobiotika auf den programmierten Zelltod (Apoptose) in kultivierten Primärhepatozyten der Ratte:
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1998
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| adam_text | H- EINFLUSS VON TUMORPROMOVIERENDEN XENOBIOTIKA AUF DEN PROGRAMMIERTEN
ZELLTOD (APOPTOSE) IN KULTIVIERTEN PRIMAERHEPATOZYTEN DER RATTE
DISSERTATION DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND PHARMAZIE DER
EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAET TUEBINGEN ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES
DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN 1998 VORGELEGT VON WOLFGANG WOERNER
INHALT 1 . EINLEITUNG . . * .** / * * *- . R H 1.1 DER PROGRAMMIERTE
ZELLTOD 1 1.2 TUMORPROMOTION IN DER RATTENLEBER, TUMORPROMOTOREN 6 1.3
WACHSTUMSKONTROLLE, TUMORSUPPRESSORGENE 12 1.4 AUFGABENSTELLUNG 19 2
MATERIAL UND METHODEN T; . * **- -* **- *& 2.1 CHEMIKALIEN UND
BIOCHEMIKALIEN 20 2.2 GERAETE UND MATERIALIEN 21 2.3 LOESUNGEN,
NAEHNNEDIEN, PUFFER 24 2.4 VERSUCHSTIERE 31 2.4.1 KOLLAGENBESCHICHTUNG
DER PETRISCHALEN 31 2.5 GEWINNUNG VON HEPATOZYTEN 31 2.5.1
PRIMAERHEPATOZYTEN AUS DER RATTENLEBER 31 2.5.2 PRIMAERHEPATOZYTEN DES
MENSCHEN 32 2.5.3 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 32 2.5.4 BESTIMMUNG DER
VITALITAET 33 2.6 ZELLKULTUR 33 2.6.1 KULTURBEDINGUNGEN DER ZELLEN 33
2.6.2 BEHANDLUNG DER ZELLEN 34 2.6.3 RADIOAKTIVES LABELING DER ZELLEN
MIT ORTHOPHOSPHAT ALS [ 32 P] 35 2.7 BESTIMMUNG DER
7-ETHOXYRESORUFIN-O-DEETHYLASE (EROD) 35 2.7.1 ERNTE DER ZELLEN FUER DEN
EROD-TEST 35 2.7.2 PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 36 2.7.3 FHIORIMETRISCHE
BESTIMMUNG DER EROD-AKTIVITAET 37 2.8 HOECHST-FAERBUNG 38 2.8.1
CHARAKTERISIERUNG UND QUANTIFIZIERUNG DER APOPTOTISCHEN NUCLEI 38 2.8.2
STATISTIK 38 2.9 DNA-FRAGMENTIERUNGS-ANALYSE 39 2.9.1 ISOLIERUNG DER DNA
40 2.9.2 QUANTIFIZIERUNG DER DNA 42 2.9.3 DNA-GELELEKTROPHORESE 42 2.10
WESTERN BLOT ANALYSE .-. 43 2.10.1 PROTEINGEWINNUNG 43 2.10.2
IMMUNOPRAEZIPITATION VON P53 43 INHALT 2.10.3
SDS-PORYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 44 2.10.4 TRANSFER 46 2.10.5
IMMUNOBLOT/ECL-TECHNIK 46 2.11 DETEKTION VON PHOSPHORYLIERTEM P53 48
2.11.1 PROTEINGEWINNUNG 48 2.11.2 WESTERN-ANALYSE VON PHOSPHORYLIERTEM
P53 48 ;3 : ERGEBNBSE . : . .^ 7 . 50
HOECHST-FAERBUNG 50 .1 INDUKTION DER APOPTOSE NACH BEHANDLUNG MIT TGF SSL,
2-AAF UND UV-BESTRAHHING 53 .2 EFFEKTE VON PHENOBARBITAL UND TCDD AUF
DIE TGF SSL-INDUZIERTE APOPTOSE.. 54 .3 EFFEKTE VON PHENOBARBITAL UND
TCDD NACH 2-AAF-BEHANDHING 55 .4 EFFEKTE VON PHENOBARBITAL UND TCDD NACH
UV-BESTRAHLUNG: ZEITVERLAUF. 57 .5 EFFEKTE VON TCDD NACH UV-BESTRAHLUNG:
KONZENTRATIONSABHAENGIKEIT 58 .6 MENSCHLICHE PRIMAERHEPATOZYTEN 58 3.2
DNA-FRAGMENTIERUNG... 59 3.2.1 ABHAENGIGKEIT DER DNA-FRAGMENTIERUNG VON
DER ZELLDICHTE 59 3.2.2 DNA-FRAGMENTIERUNG NACH TGF SSL-BEHANDLUNG 60
3.2.2.1 INDUKTION DER DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH TGF SSL 60 3.2.2.2 EINFLUSS
DES TCDD AUF DIE DNA-FRAGMENTIERUNG NACH TGF SSL-PRAEINKUBATION61 3.2.3
DNA-FRAGMENTIERUNG NACH 2-AAF-BENANDLUNG 62 3.2.3.1 INDUKTION DER
DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH 2-AAF: KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT UND
ZEITVERLAUF 62 3.2.3.2 EINFLUSS VON TCDD UND PHENOBARBITAL AUF DIE
DNA-FRAGMENTIERUNG NACH 2- AAF-VORBEHANDLUNG: KONZENTRATIONSREIHEN 63
3.2.4 DNA-FRAGMENTIERUNG NACH UV-BESTRAHLUNG 64 3.2.4.1 INDUKTION DER
DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH UV-BESTRAHLUNG: DOSISABHAENGIGKEIT 64 3.2.4.2
EINFLUSS VON TCDD UND PHENOBARBITAL AUF DIE DNA-FRAGMENTIERUNG NACH
UV-VORBEHANDLUNG: DOSISABHAENGIGKEIT 65 3.2.4.3 INDUKTION DER
DNA-FRAGMENTIERUNG DURCH UV-BESTRAHLUNG: ZEITVERLAUF. 66 3.2.4.4 EINFLUSS
VON TCDD AUF DIE DNA-FRAGMENTIERUNG: ZEITVERLAUF. 67 3.3 EINFLUSS AUF DEN
P53 (PROTEIN)-GEHALT 68 3.3.1 INDUKTION VON P53 DURCH UV-LICHT UND 2-AAF
68 3.3.2 EINFLUSS VON TCDD AUF P53 69 3.3.3 EINFLUSS VON TCDD UND
PHENOBARBITAL AUF DEN P53-GEHALT NACH UV-LICHT- BEHANDLUNG: DOSISREIHEA
70 3. VI INHALT 3.3.4 EINFLUSS VON TCDD UND PHENOBARBITAL AUF DEN
P53-GEHALT NACH 2-AAF- BEHANDLUNG: KONZENTRATIONSSREIHEN 71 3.3.5
EINFLUSS VON TCDD UND PHENOBARBITAL AUF DEN P53-GEHATT NACH UV-LICHT UND
2-AAF-BEHANDLUNG: WIRKUNGSVERGLEICH DER TUMORPROMOTOREN. 72 3.3.6
EINFLUSS VON TCDD AUF DEN P53-GEHALT NACH UV-LICHT- UND 2-AAF-BEHANDLUNG:
ZEITABHAENGIGKEIT 73 3.3.7 AH-REZEPTOR UND P53 74 3.4 PHOSPHORYLIERUNG
VON P53 75 3.4.1 EINFLUSS VON TCDD: KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT 76 3.4.2
EINFLUSS VON PHENOBARBITAL: KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT 78 3.4.3 UV/TCDD:
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS IM VERGLEICH 79 3.4.4 EINFLUSS VON TCDD NACH
UV-BEHANDLUNG 79 4 DISKUSSION ~ 7 ~ * * * 82; 4.1
INDUKTION DER APOPTOSE DURCH TGF SSL 81 4.1.1 EINFLUSS VON TCDD UND
PHENOBARBITAL AUF DIE DURCH TGF SS 1 -INDUZIERTE APOPTOSE 82 4.2
INDUKTION DER APOPTOSE DURCH GENTOXISCHE AGENZIEN 84 4.2.1 UV-LICHT UND
2-AAF 84 4.2.2 EINFLUSS DER UNTERSUCHTEN TUMORPROMOTOREN AUF DIE APOPTOSE
NACH BEHANDLUNG MIT GENTOXISCHEN AGENZIEN 86 4.2.2.1 EFFEKTE VON TCDD
UND PHENOBARBITAL NACH UV-BESTRAHLUNG 86 4.2.2.2 EFFEKTE VON TCDD UND
PHENOBARBITAL NACH 2-AAF-BEHANDLUNG 87 4.3 BEDEUTUNG VON P53 FUER DIE
APOPTOSE 89 4.3.1 EINFLUSS VON UV-LICHT UND 2-AAF AUF P53-LEVEL 90 4.3.2
EINFLUSS VON TUMORPROMOTOREN AUF P53 93 4.3.3 PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS VON
P53 94 4.3.3.1 DER AH-REZEPTOR UND SEINE MOEGLICHE ROLLE BEI DER
TCDD-VERMITTELTEN APOPTOSEHEMMUNG IN PRIMAERHEPATOZYTEN 97 4.4 AUSBLICK:
WEITERE MECHANISMEN DER APOPTOSEHEMMUNG OHNE/MIT TUMORPROMOTOREN IN DER
KANZEROGENESE 99
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