Untersuchungen zur Induktion von Chromosomenaberrationen und Mikrokernen mit durchflußzytometrischen Techniken und einer Immunfluoreszenzmethode zur Anfärbung von Kinetochoren:
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München
Gesellschaft für Strahlen- u. Umweltforsch.
1989
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INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG I
II. BIOLOGISCHE
GRUNDLAGEN 3
11.1 CHROMOSOMEN 3
11.1.1 STRUKTUR UND FUNKTION VON CHROMOSOMEN 3
11.1.2 PHASEN DER MITOSE UND ZELLTEILUNG 6
11.2 BIOLOGISCHE WIRKUNGEN IONISIERENDER STRAHLUNG
7
11.3 ABERRATIONEN 8
M.3.1 ENTSTEHUNG VON CHROMOSOMENABERRATIONEN 8
11.3.2 HOMOGENE UND HETEROGENE CHROMOSOMENABERRATIONEN 9
11.3.3 ZELLZYKLUSABHAENGIGE INDUKTION VON ABERRATIONEN DURCH 10
STRAHLUNG
11.4- ENTSTEHUNG VON MIKROKERNEN AUS ABERRANTEN MITOTISCHEN
12
CHROMOSOMEN
III. MATERIAL UND
METHODEN
U
111.1 CHARAKTERISIERUNG DER ZELLINIEN UND KULTIVIERUNG
H
111.2 BESTRAHLUNG UND DOSIMETRIE
15
111.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE
16
111.3.1 PRINZIPIEN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 16
111.3.2 ANWENDUNGEN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 18
111.3.3 BESCHREIBUNG DES VERWENDETEN DURCHFLUSSZYTOMETERS 19
III.3.4- STEUERUNG DER DATENERFASSUNG UND AUSWERTUNG DER 20
MESSUNGEN
LLUE HERSTELLUNG VON CHROMOSOMENSUSPENSIONEN
22
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/910608016
111.5 HERSTELLUNG VON MIKROKERNSUSPENSIONEN
25
111.6 ANFAERBUNG VON KINETOCHOREN MIT EINER IMMUNFLUORESZENZTECHNIK
25
111.6.1 BIOCHEMISCHE GRUNDLAGEN DER IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 26
111.6.2 ANWENDUNGEN DER KINETOCHORANFAERBUNG 27
111.7 ENTWICKLUNG UND OPTIMIERUNG EINER PRAEPARATIONSMETHODE ZUR
29
KINETOCHORANFAERBUNG IN ANWACHSENDEN ZELLEN
IV,
MESSUNG VON STRAHLENINDUZIERTEN CHROMOSOMEN- 36
ABERRATIONEN
MIT DEM DURCHFLUSSZYTOMETER
IV.1 CHROMOSOMENSPEKTREN UNBESTRAFTER ZELLEN
36
IV.1.1 KARYOTYPEN DER ZELLINIEN 36
IV.1.2 BEURTEILUNG DER QUALITAET EINES CHROMOSOMENSPEKTRUMS 42
IV.1.3 OPTIMIERUNG DER PRAEPARATION VON CHE- UND MUNTJAC-ZELLEN 44
IV.1.4 KARYOTYPANALYSE MIT CHROMOSOMENSPEKTREN 46
IV.2 ANALYSE VON CHROMOSOMENSPEKTREN BESTRAHLTER ZELLEN
50
IV.2.1 CHARAKTERISTISCHE VERAENDERUNGEN IN CHROMOSOMENSPEKTREN 50
NACH STRAHLENEINWIRKUNG MIT VARIABLER DOSIS
IV.2.2 DEFINITION VON PARAMETERN ZUR ANALYSE DES STRAHLENEFFEKTES 54
IV.2.3 DOSISABHAENGIGKEIT DES UNTERGRUNDANTEILS 55
IV.2.4 DOSISABHAENGIGKEIT DER RELATIVEN PEAKFLAECHEN UND ABHAENGIG- 57
KEIT DER SCHAEDIGUNG VON CHROMOSOMEN VOM DNA-GEHALT
IV.2.5 DOSISABHAENGIGKEIT DES VARIATIONSKOEFFIZIENTEN CV 60
IV.2.6 ZELLKINETISCHE UNTERSUCHUNGEN MIT CHROMOSOMENSPEKTREN 61
IV.2.7 KRITISCHE PRAEPARATIONSPARAMETER FUR DIE ANALYSE DES 62
STRAHLENEFFEKTS
IV.3 MATHEMATISCHES MODELL FUER DEN EFFEKT IONISIERENDER STRAHLUNG 66
IV.3.1 VORAUSSETZUNGEN DES MODELLS 66
IV.3.2 BERECHNUNG DES SPEKTRUMS VON FRAGMENTEN FUER EIN 67
SPEZIELLES CHROMOSOM MIT VORGEGEBENER ZAHL VON BRUECHEN
IV.3.3 BERECHNUNG DES CHROMOSOMENSPEKTRUMS 69
IV.3.4 BERECHNETER UNTERGRUNDANTEIL UND RELATIVE PEAKFLAECHEN ALS 7 1
FUNKTION DER DOSIS
IV.3.5 ABSCHAETZUNG DER ABERRATIONEN PRO ZELLE AUS GEMESSENEN 74
UNTERGRUNDSPEKTREN
IV.4- VERGLEICH MIKROSKOPISCHER UND DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER
76
ABERRATIONSMESSUNGEN UND DISKUSSION DES MODELLS
IV. 5 CHROMOSOMENSPEKTREN NACH BESTRAHLUNG MIT SCHWERIONEN SI
IV.5.1 BESONDERHEITEN DER STRAHLENSCHAEDEN DURCH SCHWERIONEN 81
IV.5.2 BESTRAHLUNG UND DURCHFUEHRUNG DER EXPERIMENTE 82
IV.5.3 EXPERIMENTELLE ERGEBNISSE 83
IV. 5.4 DISKUSSION 86
V,
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSE VON STRAHLENINDUZIERTEN
90
MIKROKERNEN
V.
1
MESSUNG VON MIKROKERNSPEKTREN
91
V. 1.1 DNA-VERTEILUNGEN VON ZELLKERNEN UND MIKROKERNEN 91
V.1.2 SORTIEREN VON MIKROKERNEN UND MIKROSKOPISCHE ANALYSE 92
V.1.3 BESTIMMUNG DER ANZAHL DER MIKROKERNE AUS DURCHFLUSSZYTO- 93
METRISCH GEMESSENEN DNA-SPEKTREN
V.2 ANALYSE VON MIKROKERNSPEKTREN BESTRAHLTER ZELLEN
96
V.2.1 DOSISABHAENGIGKEIT DER MIKROKERNINDUKTION 96
V.2.2 KINETIK DER MIKROKERNINDUKTION 99
V.3 MODELL ZUR BERECHNUNG VON MIKROKERNSPEKTREN
105
V.3.1 BERECHNUNG DER VERTEILUNG VON AZENTRISCHEN FRAGMENTEN FUER 105
EIN SPEZIELLES CHROMOSOM MIT VORGEGEBENER ZAHL VON BRUECHEN
V.3.2 BERECHNUNG DER MIKROKERNVERTEILUNG 110
V.4- ANALYSE DER DNA-GEHALTE DER MIKROKERNE DURCH VERGLEICH
112
BERECHNETER UND GEMESSENER SPEKTREN
V.5 ERGAENZUNG: UNTERSUCHUNGEN ZUR KORRELATION ZWISCHEN MIKROKERN-
121
ENTSTEHUNG, ABERRATIONSBILDUNG UND MAKROKOLONIEBILDUNGSFAEHIGKEIT
VL
IMMUNFLUORESZENZANFAERBUNG VON KINETOCHOREN
126
VI.1 ZELLBIOLOGISCHE ANWENDUNGEN DER KINETOCHORANFAERBUNG BEI
127
ANWACHSENDEN ZELLEN
VI.1.1 KINETOCHORANFAERBUNG IN VERSCHIEDENEN ZELLINIEN 127
VI.1.2 ANFAERBUNG VON KINETOCHOREN ALS ERGAENZUNG ZELLBIOLOGISCHER 128
ARBEITSMETHODEN
VI.1.3 BESONDERHEITEN DER ANORDNUNG DER KINETOCHORE IN INTERPHA- 130
SEZELLEN DES INDISCHEN MUNTJAC
VI.1.3.1 AUFSPALTUNG DER KINETOCHORE IM LAUFE DES ZELLZYKLUS 130
BEI ZELLEN DES INDISCHEN MUNTJAC
VI.1.3.2 AGGREGATION DER KINETOCHORE IN ZELLEN DES INDISCHEN 134
MUNTJAC
VI.
2
ANALYSE VON MIKROKERNEN MIT DER KINETOCHORANFAERBETECHNIK
142
VI.2.1 NACHWEIS VON KINETOCHOREN IN MIKROKERNEN 142
VI.2.2 SPONTANE INDUKTION VON KINETOCHORPOSITIVEN UND KINETOCHOR- 143
NEGATIVEN MIKROKERNEN
VI.3 INDUKTION VON KINETOCHORPOSITIVEN UND KINETOCHORNEGATIVEN
145
MIKROKERNEN DURCH IONISIERENDE STRAHLUNG
VI.3.1 KINETIK DER MIKROKERNENTSTEHUNG 145
VI.3.2 DOSISABHAENGIGKEIT DER MIKROKERNINDUKTION 149
VI.3.3 KORRELATION ZWISCHEN MIKROKERNGROESSE UND KINETOCHORGEHALT 153
VI.4- INDUKTION VON KINETOCHORPOSITIVEN UND KINETOCHORNEGATIVEN
155
MIKROKERNEN DURCH CHEMIKALIEN
VL.4.1 COLCEMID ALS BEISPIEL EINES REINEN SPINDELGIFTS 155
VL.4.2 CHEMIKALIEN MIT CLASTOGENEN UND SPINDELSCHAEDIGENDEN 157
EFFEKTEN
VIA.3 UNTERSUCHUNG DER KINETIK DER MIKROKERNBILDUNG NACH 160
EINWIRKUNG VON DIETHYLSULFAT
VI.5 AUSBLICK AUF WEITERE ANWENDUNGEN DER KINETOCHORANFAERBUNG
162
VI.5.1 ANFAERBUNG DER KINETOCHORE VON KERNEN UND MIKROKERNEN IN 162
SUSPENSION
VI.5.2 KINETOCHORANFAERBUNG VON CHROMOSOMEN IN SUSPENSION 163
VI.5.3 ANWENDUNG DER KINETOCHORANFAERBETECHNIK AUF MIT DEM 165
DURCHFLUSSZYTOMETER SORTIERTE PARTIKEL
VII. ZUSAMMENFASSUNG
166
VIII. ANHANG
170
VIII.
1
LISTE DER VERWENDETEN VARIABLEN
170
VIII.2 ABKUERZUNGEN
171
VIII.3 COMPUTERPROGRAMME
172
VIII.4- DATEN DER ZELLINIEN V79 UND CHE FUER DIE BERECHNUNG VON
1
78
CHROMOSOMEN- UND MIKROKERNSPEKTREN
VIII
.5
LITERATUR
179 |
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| spelling | Krämer, Matthias Verfasser aut Untersuchungen zur Induktion von Chromosomenaberrationen und Mikrokernen mit durchflußzytometrischen Techniken und einer Immunfluoreszenzmethode zur Anfärbung von Kinetochoren von Matthias Krämer München Gesellschaft für Strahlen- u. Umweltforsch. 1989 187 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier GSF-Bericht 1990, 10 Zugl.: Frankfurt am Main, Univ., Fachber. Physik, Diss. 1989 Ionisierende Strahlung (DE-588)4027633-8 gnd rswk-swf Immunfluoreszenz (DE-588)4161372-7 gnd rswk-swf Kleinkern (DE-588)4164140-1 gnd rswk-swf Centromer (DE-588)4283659-1 gnd rswk-swf Durchflusscytometrie (DE-588)4226628-2 gnd rswk-swf Chromosomenaberration (DE-588)4010163-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Chromosomenaberration (DE-588)4010163-0 s Ionisierende Strahlung (DE-588)4027633-8 s Durchflusscytometrie (DE-588)4226628-2 s DE-604 Centromer (DE-588)4283659-1 s Immunfluoreszenz (DE-588)4161372-7 s Kleinkern (DE-588)4164140-1 s Gesellschaft für Strahlen- und Umweltforschung <Neuherberg, Oberschleissheim> GSF-Bericht 1990,10 (DE-604)BV000015815 1990,10 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=019467009&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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