Der Experimentator: Molekularbiologie, Genomics:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Heidelberg [u.a.]
Spektrum, Akad. Verl.
2003
|
| Ausgabe: | 4. Aufl. |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XII, 280 S. Ill., graph. Darst. 24 cm |
| ISBN: | 3827414601 |
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| adam_text | CORNEL MUELHARDT MOLEKULARBIOLOGIE/ GENOMICS 5. AUFLAGE SPEKTRUM
K-ZLAKADEMISCHER VERLAG ELSEVIER SPEKTRUM AKADEMISCHER VERLAG INHALT 1
WAS IST DENN MOLEKULARBIOLOGIE , BITTESCHOEN? 1 1.1 DAS SUBSTRAT DER
MOLEKULARBIOLOGIE, ODER: MOLLI-WORLD FUER ANFAENGER .... 2 1.2 WAS BRAUCHE
ICH ZUM ARBEITEN? 7 1.3 SICHERHEIT IM LABOR 8 2 EINIGE GRUNDLEGENDE
METHODEN 12 2.1 NUCLEINSAEURE IST GLEICH NUCLEINSAEURE UND AUCH WIEDER
NICHT 12 2.2 METHODEN ZUR DNA-PRAEPARATION 14 2.2.1 BAKTERIENMEDIEN 14
2.2.2 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA 16 2.2.3 MINIPRAEPARATION 16 2.2.4
MAXIPRAEPARATION 18 2.2.5 PRAEPARATION VON PHAGEN-DNA 20 2.2.6 PRAEPARATION
EINZELSTRAENGIGER DNA MITTELS HELFERPHAGEN 24 2.2.7 PRAEPARATION VON
GENOMISCHER DNA 24 2.3 DIE REINIGUNG VON NUCLEINSAEUREN 26 2.3.1
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION 27 2.3.2 ANIONENAUSTAUSCHERSAEULEN 28 2.3.3
GLASMILCH / SILICA-MEMBRANEN 30 2.3.4 CAESIUMCHLORID-DICHTEGRADIENT 31
2.3.5 FAELLUNG MIT PEG 32 2.3.6 DIALYSE 33 2.3.7 MAGNETIC BEADS 33 2.3.8
PROTEINBINDENDE FILTERMEMBRANEN 34 2.3.9 ALKOHOL-FAELLUNG 34 2.3.10
KONZENTRATOREN 35 2.3.11 EXONUCLEASE-PHOSPHATASE-VERDAU 35 2.4
KONZENTRIEREN VON NUCLEINSAEUREN 35 2.4.1 ALKOHOL-FAELLUNG 36 2.4.2
KONZENTRATOREN 39 2.4.3 SPEED-VAC 40 2.4.4 AUSSALZEN 40 2.5
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUCLEINSAEURE-LOESUNGEN 41 3 DAS WERKZEUG 46
3.1 RESTRIKTIONSENZYME 46 3.2 GELE 55 3.2.1 AGAROSEGELE 56 INHALT 3.2.2
DNA-FRAGMENTE AUS AGAROSEGELEN ISOLIEREN .63 3.2.3 POLYACRYLAMIDGELE
(PA-GELE) .67 3.2.4 DNA-FRAGMENTE AUS PA-GELEN ISOLIEREN 69 3.2.5
PULSFELDGELELEKTROPHORESE (PFGE) 70 3.2.6 KAPILLARELEKTROPHORESE 71
3.2.7 MIKROCHIP-KAPILLARELEKTROPHORESE 71 3.3 BLOTTEN 71 3.3.1 SOUTHERN
BLOT 72 3.3.2 NORTHERN BLOT 75 3.3.3 DOT UND SLOT BLOT 77 4 DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 80 4.1 DIE STANDARD-PCR 80 4.2 NEUE
ENTWICKLUNGEN 91 4.3 TIPPS ZUR VERBESSERUNG DER PCR 92 4.3.1 NESTED PCR
94 4.3.2 MULTIPLEX PCR 95 4.3.3 AMPLIFIKATION LANGER DNA-FRAGMENTE (
5KB) 96 4.4 PCR-ANWENDUNGEN 96 4.4.1 REVERSE TRANSKRIPTION -
POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-PCR) 97 4.4.2 RAPID AMPLIFICATION OF CDNA
ENDS (RACE) 98 4.4.3 AMPLIFIKATION ZUFAELLIGER PRODUKTE 100 4.4.4
KLASSISCHE QUANTITATIVE PCR 102 4.4.5 REAL-TIME QUANTITATIVE PCR 105
4.4.6 INVERSE PCR 110 4.4.7 BIOTIN-RAGE UND SUPPORTED PCR 110 4.4.8
MUTAGENESE MIT MODIFIZIERTEN PRIMERN 111 4.4.9 ARMS (AMPLIFICATION
REFRACTORY MUTATION SYSTEM) 112 4.4.10 IN-SITU-PCR 113 4.4.11 CYCLE
SEQUENCING 114 4.4.12 CDNA-SYNTHESE 114 4.4.13 EINZELZELL-PCR 114 5 RNA
117 5.1 METHODEN DER RNA-ISOLIERUNG 118 5.2 METHODEN DER MRNA-ISOLIERUNG
120 5.3 REVERSE TRANSKRIPTION (CDNA-SYNTHESE) 122 5.4
IN-VITRO-TRANSKRIPTION (RNA-SYNTHESE) 123 5.5 RNA-INTERFERENZ (RNAI) 125
INHALT * XI 6 DIE KLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 130 6.1 DIE GRUNDLAGEN
DES KLONIERENS 130 6.1.1 KLONIEREN VON PCR-PRODUKTEN 137 6.1.2 KLONIEREN
MIT REKOMBINASE-SYSTEMEN 140 6.2 MIT WELCHEN VEKTOREN KLONIEREN? 143
6.2.1 PLASMIDE 143 6.2.2 PHAGEN 146 6.2.3 COSMIDE .148 6.2.4 PACS UND
BACS 149 6.2.5 YACS 149 6.3 WELCHE BAKTERIEN? 150 6.4 HERSTELLEN
KOMPETENTER ZELLEN UND TRANSFORMATION 151 6.5 PROBLEME BEIM KLONIEREN
156 6.6 DIE LAGERUNG VON KLONEN 157 7 WIE MAN DNA AUFSPUERT 160 7.1
HERSTELLUNG VON SONDEN 160 7.1.1 METHODEN ZUR HERSTELLUNG MARKIERTER
SONDEN 162 7.2 HYBRIDISIERUNG 166 7.3 NACHWEIS DER MARKIERTEN DNA 168
7.3.1 AUTORADIOGRAPHIE 168 7.3.2 NICHT-RADIOAKTIVE NACHWEISMETHODEN 170
7.4 SCREENEN VON REKOMBINANTEN DNA-BANKEN 173 7.5 TWO-HYBRID SYSTEM 177
7.6 PHAGE DISPLAY 181 8 DNA-ANALYSE 183 8.1 SEQUENZIERUNG 183 8.2
RADIOAKTIVE SEQUENZIERUNG 185 8.3 NICHT-RADIOAKTIVE SEQUENZIERUNG UND
AUTOMATISCHE SEQUENZIERGERAETE ..187 8.4 MINISEQUENZIERUNG 189 8.5
PYROSEQUENZIERUNG ZUM ERSTEN 191 8.6 PYROSEQUENZIERUNG ZUM ZWEITEN 193
8.7 SCHROTSCHUSS-SEQUENZIERUNG 194 8.8 KURIOSES ZUM THEMA SEQUENZIEREN:
OCTAMERE 194 8.9 METHODEN ZUR ANALYSE VON DNA AUF MUTATIONEN 195 8.9.1
RESTRIKTIONSFRAGMENT-LAENGENPOLYMORPHISMUS (RFLP) 195 8.9.2 SINGLE-STRAND
CONFORMATION POLYMORPHISM (SSCP) 196 XII * INHALT 8.9.3 DENATURIERENDE
GRADIENTENGELELEKTROPHORESE (DGGE) 198 8.9.4 TEMPORAL TEMPERATURE
GRADIENT ELECTROPHORESIS (TTGE) 200 8.9.5 HETERODUPLEXANALYSE (HA) 200
8.9.6 ARMS 201 8.9.7 ENZYMATISCHE SPALTUNG VON FEHLPAARUNGEN 201 8.9.8
PROTEIN TRUNCATION TEST (PTT) 203 9 UNTERSUCHUNG DER FUNKTION VON
DNA-SEQUENZEN 205 9.1 UNTERSUCHUNG DER TRANSKRIPTION IN GEWEBEN 206
9.1.1 RIBONUCLEASE PROTECTION ASSAY (RPA) 206 9.1.2 REAL-TIME
QUANTITATIVE PCR (RTQ-PCR) 207 9.1.3 IN-SITU-HYBRIDISIERUNG 207 9.1.4
CHROMOSOMALE LOKALISIERUNG EINES GENS (FISH) 210 9.1.5 IN-SITU-PCR 212
9.1.6 MICROARRAYS 212 9.2 MUTAGENESE ;. : 218 9.3 IN-VITRO-TRANSLATION ;
227 9.4 EXPRESSIONSSYSTEME 229 9.4.1 BAKTERIELLE EXPRESSIONSSYSTEME 230
9.4.2 BACULOVIRUS-EXPRESSIONSSYSTEME 230 9.4.3 WEITERE
EXPRESSIONSSYSTEME 232 9.4.4 HETEROLOGE EXPRESSION IN SAEUGERZELLEN 233
9.4.5 TRANSFEKTIONSMETHODEN 235 9.4.6 KOTRANSFEKTION MEHRERER GENE 243
9.4.7 TRANSIENTE UND STABILE TRANSFEKTIONEN 243 9.4.8 REPORTERGENE 245
9.5 TRANSGENE MAEUSE 252 9.5.1 METHODEN DES GENTRANSFERS 254 9.6
REGULATION DER TRANSGENEXPRESSION 259 9.6.1 DAS TET-SYSTEM 259 9.6.2 DAS
ECDYSON-SYSTEM 260 9.7 GENTHERAPIE 261 9.8 GENOMIK 263 10 DER COMPUTER
UND DU 267 11 TIPPS FUER DIE KARRIEREPLANUNG, ODER: DER GANZ KLEINE
MACCHIAVELLI FUER JUNGFORSCHER 272 12 ZU GUTER LETZT 280 INHALT * XIII 13
ANHANG 28 2 13.1 NUETZLICHE TABELLEN 282 13.2 STANDARDLOESUNGEN 283 13.3
GLOSSAR 285 14 WER, WAS, WO? 289 14.1 LIEFERANTEN / ADRESSEN 289 14.2
LITERATUR 292 REGISTER 294
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