Untersuchung von präsynaptischen Zytomatrixproteinen an den Photorezeptor-Bandsynapsen der Mausretina:
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|---|---|
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Verzeichnisse
Inhaltsverzeichnis
Verzeichnisse 1
Inhaltsverzeichnis 1
Tabellenverzeichnis 6
Abkürzungen 7
1 Einleitung 9
1.1 Die konventionelle chemische Synapse 10
1.1.1 Molekulare Organisation der aktiven Zone 12
1.2 Die Retina 17
1.3 Die Bandsynapse 20
1.4. Fragestellung und Arbeitshypothese 26
2 Material und Methoden 29
2.1 Versuchstiere 29
2.2 Gewebepräparationen 29
2.2.1 Retinapräparation für Lichtmikroskopie 29
2.2.2 Retinapräparation für Pree/nöedof/ng-lmmunoelektronenmikroskopie 29
2.2.3 Retinapräparation für Elektronenmikroskopie mit guter Fixierung 30
2.2.4 Retinapräparation für Proteinumsatz-Experimente 30
2.3 Immunzytochemie 31
2.3.1 Immunzytochemie für Lichtmikroskopie 31
2.3.2 Immunzytochemie für Preem/jecfcf/ng-lmmunoelektronenmikroskopie 32
2.4 Mikroskopie 33
2.5 Genotypisierung 34
2.5.1 Genotypisierung der Bassoon-mutanten Maus 34
2.5.2 Genotypisierung der CASJ-Knockout-Maus 35
2.6 Western Blot-Analyse 36
2.6.1 Gelelektrophorese, Western Blot-Transfer und PonceauS-Färbung 37
2.7 Quantifizierungen 38
2.7.1 Quantifizierung der Kolokalisation von Marker-Proteinen an den
ektopischen Synapsen 38
2.7.2 Messung der OPL bei wildtypischen und CAST-Knoc/cotrt-Mäusen 39
1
Verzeichnisse
2.7.3 Quantifizierungen der Zustände des synaptischen Bandes in Stäbchen-
Terminalien bei Proteinumsatz-Experimenten 39
2.9 Lösungen 40
2.10 Reagenzien und Hersteller 42
2.11 Hilfsmittel, Geräte und Hersteller 45
2.12 Verwendete Primär-Antikörper 46
2.13 Verwendete Sekundär-Antikörper 48
3 Ergebnisse 49
3.1 Analyse des Phänotyps der Piccolo-ÄEx16-Maus 49
3.2 Die Analyse des Phänotyps der Bassoon-mutanten Maus 57
3.2.1 Fortschreitendes Auswachsen der Horizontalzell-Fortsätze und der
Bipolarzell-Dendriten 58
3.2.2 Ektopische Synapsen in der Bassoon-mutanten Maus 61
3.2.3 Die Rolle der Horizontalzellen bei der Bildung ektopischer Synapsen in der
Bassoon-mutanten Maus 65
3.3 Die Analyse des Phänotyps der CAST-Knodcouf-Maus 73
3.3.1 Fortschreitendes Auswachsen der Horizontalzell-Fortsätze und der
Bipolarzell-Dendriten 74
3.3.2 Ektopische Synapsen in der CAST-Knoc/couNMaus 76
3.3.3 Synaptische Veränderungen in der Retina der CAST-Knoc/couf-Maus im
Vergleich zur Bassoon-mutanten Maus 80
3.3.4 Die OPL der CAST-K/ioc/coirf-Maus ist verändert und signifikant
reduziert 89
3.4 Proteinumsatz der Bandsynapse 94
3.4.1 Quantifizierung von Stäbchen-Terminalien in EGTA und lonophor-
behandelten Retinae 95
3.4.2 Die zustandsabhängigen Veränderungen der Bandsynapsen-Proteine... 97
4 Diskussion 103
4.1 Die Bandsynapse exprimiert die kurze Isoform von Piccolo 104
4.2 Plastizität in der Bassoon-mutanten Maus 106
4.2.1 Fortschreitendes Auswachsen der Horizontal-und Bipolarzellen 107
4.2.2 Funktioneller Aspekt der fortschreitenden Ausbildung ektopischer
Synapsen 108
4.2.3 Die ektopischen Synapsen entstehen durch Neubildung und Retraktion 109
2
Verzeichnisse
4.2.4 Auswachsen von Typ 4 OFF-Zapfen-Bipolarzellen in die ONL 109
4.3 Der Phänotyp der CAST-Knoc/touMviaus im Vergleich zur Bassoon-mutanten
Maus 111
4.3.1 Reduzierte Photorezeptor-synaptische Transmission und Bildungs¬
mechanismus der ektopischen Synapsen in der CASJ-Knockout-Maus 111
4.3.2 Die Bandsynapsen-Struktur der CAST-Knockout-Maus ist größtenteils
erhalten -ein Unterschied zur Bassoon-Mutante 111
4.3.3 Die Sonderstellung von RIM1 113
4.4 Proteinumsatz der Bandsynapse 114
4.5 Weitere Unterschiede zwischen der konventionellen und der Bandsynapse 117
5 Zusammenfassung 119
5 Summary 121
6 Literaturverzeichnis 123
7 Danksagung 133
8 Lebenslauf 134
3
|
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Verzeichnisse
Verzeichnisse
Inhaltsverzeichnis
Verzeichnisse 1
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1.1 Die konventionelle chemische Synapse 10
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1.3 Die Bandsynapse 20
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2.1 Versuchstiere 29
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2.7 Quantifizierungen 38
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2.7.2 Messung der OPL bei wildtypischen und CAST-Knoc/cotrt-Mäusen 39
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Verzeichnisse
2.7.3 Quantifizierungen der Zustände des synaptischen Bandes in Stäbchen-
Terminalien bei Proteinumsatz-Experimenten 39
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3 Ergebnisse 49
3.1 Analyse des Phänotyps der Piccolo-ÄEx16-Maus 49
3.2 Die Analyse des Phänotyps der Bassoon-mutanten Maus 57
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4 Diskussion 103
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