Differentielle Expression der Wachstumsfaktoren VEGF und Heregulin und ihrer Rezeptoren in Bronchialkarzinomzellinien:
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Inhaltsverzeichnis
Seite
I. Einleitung
1.1. Das Bronchialkarzinom 5
1.1.1. Epidemiologie, Ätiologie, Einteilung und Therapie des 5
Bronchialkarzinoms
1.1.2. Wachstumsfaktoren, auto- und parakrine Stimulation und 7
Angiogenese
1.1.3. Aulokrine und parakrine Wachstumsmodelle bei Bronchial- ]0
karzinomen
1.2. Die Wachstumsfaktoren VEGF und Heregulin und ihre Rezeptoren 11
1.2.1. Vascular endothelial growth factor (VEGF) 11
1.2.1. Heregulin 14
II. Aufgabenstellung 17
III. Material und Methoden 18
II 1.1. Material 18
111.1.1. Reagenzien und Chemikalien 18
111.1.2. Rekombinante Proteine 19
111.1.3. Nukleinsäuren, Nukleotide, Vektoren, Plasmide, Primer 19
111.1.4. Enzyme 21
111.1.5. Kits 21
111.1.6. Zellkulturmaterial 21
111.1.7. Pufferlösungen 22
111.1.8. Wissenschaftliche Software 22
1
2_
III.2. Methoden 22
111.2.1 Zellkulturtechnik und Stimulationsversuche 22
111.2.1.1. Zellkulturmedien 22
111.2.1.2. Zellinien 22
111.2.1.3. Kultivierung von nicht-kleinzelligen und kleinzelligen 23
Bronchialkarzinomzellinien
IH.2.1.4. Stimulation verschiedener Zellinien mit 23
unterschiedlichen Heregulin-Konzentrationen
III.2.1.5. Zellzahlbestimmung mit Trypan-Blau Färbung und 24
Coulter Counter
III.2.2. mRNA-Expressionsanalysen 24
III.2.2.1. RNA-Extraktion aus Zellen mit „RNAzol 24
HI.2.2.2. Reverse Transkription (Synthese von cDNA) 25
HI.2.2.3. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 26
IV. Ergebnisse
IV.l. mRNA-Expression von Heregulin, VEGF, EGF-R (erbBl), erbB2, 29
erbB3,, fltl, KDR (flt2) und flt4 bei kleinzelligen und nicht-
kleinzelligen Bronchial-karzinomzellinien
IV.!.1. mRNA-Expression von VEGF in Bronchialkarzinomzellinien 30
IV.l.2. mRNA-Expression von fltl in Bronchialkarzinomzellinien 31
IV.1.3. mRNA-Expression von KDR(flt2) in Bronchialkarzinomzellinien 32
IV.1.4. mRNA-Expression von flt4 in Bronchialkarzinomzellinien 33
IV. 1.5. mRNA-Expression von Heregulin in Bronchialkarzinomzellinien 34
IV. 1.6. mRNA-Expression von EGF-R(erbBl) in 35
Bronchialkarzinomzellinien
IV.1.7. mRNA-Expression von erbB2 in Bronchialkarzinomzellinien 36
IV. 1.8. mRNA-Expression von erbB3 in Bronchialkarzinomzellinien 37
2
__^_____ 3__
IV. 1.9 Zusammenfassung der mRNA-Expressionsanalysen 38
IV. Einfluß von Heregulin auf die Wachslumkinetik von nicht- 40
2 kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
IV.2.1. Wachstumskinetik der Mammakarzinomzellinie MDA-MB-231 41
IV.2.2. Stimulation derMammakarzinomzellinie MDA-MB-231 mit 42
Heregulin
IV.2.3. Stimulation der nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinie 43
LCLC-103H mit Heregulin
IV.2.4. Stimulation der nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinie 44
EPLC-U1752 mit Heregulin
IV.2.S. Zusammenfassung der Ergebnisse der Stimulationsversuche 45
V Diskussion 46
V.l. Die Expression von VEGF und den Rezeptoren fltl, KDR(flt2) und 46
flt4 bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien und nicht-
kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2. Die Expression von Heregulin und den Rezeptoren EGF-R(erbBl), 47
erbB2 und erbB3 bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien und
nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2.1. Heregulin und die Rezeptoren EGF-R(erbBl), erbB2 und erbB3 49
bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2.2. Heregulin und die Rezeptoren EGF-R(erbBl), erbB2 und erbB3 49
bei nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.3 Einfluß von Heregulin auf die Wachstumskinetik von nicht- 51
kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.3.1. Der Einfluß von Heregulin auf das Wachstumsverhalten der 52
Mammakarzinomzellinie MDA-MB-231
V.3.2. Der Einfluß von Heregulin auf das Wachstumsverhalten der 53
nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien LCLC-103H und
EPLC-U1752
3
4
VI. Literaturverzeichnis 55
VII. Danksagung 65
VIII. Verzeichnis der akademischen Lehrer 65
4
|
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L_
Inhaltsverzeichnis
Seite
I. Einleitung
1.1. Das Bronchialkarzinom 5
1.1.1. Epidemiologie, Ätiologie, Einteilung und Therapie des 5
Bronchialkarzinoms
1.1.2. Wachstumsfaktoren, auto- und parakrine Stimulation und 7
Angiogenese
1.1.3. Aulokrine und parakrine Wachstumsmodelle bei Bronchial- ]0
karzinomen
1.2. Die Wachstumsfaktoren VEGF und Heregulin und ihre Rezeptoren 11
1.2.1. Vascular endothelial growth factor (VEGF) 11
1.2.1. Heregulin 14
II. Aufgabenstellung 17
III. Material und Methoden 18
II 1.1. Material 18
111.1.1. Reagenzien und Chemikalien 18
111.1.2. Rekombinante Proteine 19
111.1.3. Nukleinsäuren, Nukleotide, Vektoren, Plasmide, Primer 19
111.1.4. Enzyme 21
111.1.5. Kits 21
111.1.6. Zellkulturmaterial 21
111.1.7. Pufferlösungen 22
111.1.8. Wissenschaftliche Software 22
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III.2. Methoden 22
111.2.1 Zellkulturtechnik und Stimulationsversuche 22
111.2.1.1. Zellkulturmedien 22
111.2.1.2. Zellinien 22
111.2.1.3. Kultivierung von nicht-kleinzelligen und kleinzelligen 23
Bronchialkarzinomzellinien
IH.2.1.4. Stimulation verschiedener Zellinien mit 23
unterschiedlichen Heregulin-Konzentrationen
III.2.1.5. Zellzahlbestimmung mit Trypan-Blau Färbung und 24
Coulter Counter
III.2.2. mRNA-Expressionsanalysen 24
III.2.2.1. RNA-Extraktion aus Zellen mit „RNAzol" 24
HI.2.2.2. Reverse Transkription (Synthese von cDNA) 25
HI.2.2.3. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 26
IV. Ergebnisse
IV.l. mRNA-Expression von Heregulin, VEGF, EGF-R (erbBl), erbB2, 29
erbB3,, fltl, KDR (flt2) und flt4 bei kleinzelligen und nicht-
kleinzelligen Bronchial-karzinomzellinien
IV.!.1. mRNA-Expression von VEGF in Bronchialkarzinomzellinien 30
IV.l.2. mRNA-Expression von fltl in Bronchialkarzinomzellinien 31
IV.1.3. mRNA-Expression von KDR(flt2) in Bronchialkarzinomzellinien 32
IV.1.4. mRNA-Expression von flt4 in Bronchialkarzinomzellinien 33
IV. 1.5. mRNA-Expression von Heregulin in Bronchialkarzinomzellinien 34
IV. 1.6. mRNA-Expression von EGF-R(erbBl) in 35
Bronchialkarzinomzellinien
IV.1.7. mRNA-Expression von erbB2 in Bronchialkarzinomzellinien 36
IV. 1.8. mRNA-Expression von erbB3 in Bronchialkarzinomzellinien 37
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IV. 1.9 Zusammenfassung der mRNA-Expressionsanalysen 38
IV. Einfluß von Heregulin auf die Wachslumkinetik von nicht- 40
2 kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
IV.2.1. Wachstumskinetik der Mammakarzinomzellinie MDA-MB-231 41
IV.2.2. Stimulation derMammakarzinomzellinie MDA-MB-231 mit 42
Heregulin
IV.2.3. Stimulation der nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinie 43
LCLC-103H mit Heregulin
IV.2.4. Stimulation der nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinie 44
EPLC-U1752 mit Heregulin
IV.2.S. Zusammenfassung der Ergebnisse der Stimulationsversuche 45
V Diskussion 46
V.l. Die Expression von VEGF und den Rezeptoren fltl, KDR(flt2) und 46
flt4 bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien und nicht-
kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2. Die Expression von Heregulin und den Rezeptoren EGF-R(erbBl), 47
erbB2 und erbB3 bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien und
nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2.1. Heregulin und die Rezeptoren EGF-R(erbBl), erbB2 und erbB3 49
bei kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.2.2. Heregulin und die Rezeptoren EGF-R(erbBl), erbB2 und erbB3 49
bei nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.3 Einfluß von Heregulin auf die Wachstumskinetik von nicht- 51
kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien
V.3.1. Der Einfluß von Heregulin auf das Wachstumsverhalten der 52
Mammakarzinomzellinie MDA-MB-231
V.3.2. Der Einfluß von Heregulin auf das Wachstumsverhalten der 53
nicht-kleinzelligen Bronchialkarzinomzellinien LCLC-103H und
EPLC-U1752
3
4
VI. Literaturverzeichnis 55
VII. Danksagung 65
VIII. Verzeichnis der akademischen Lehrer 65
4 |
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