Bedeutung von Efflux bei der Resistenzentwicklung von klinischen Isolaten von Escherichia coli mit "low-level resistance" gegenüber Fluorchinolonen:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Gliederung
Gliederung
Gliederung I
1 Einleitung/Problemstellung 1
1.1 Chinolone: Chemische Struktur und Einteilung 1
1.2 Zielstruktur der Chinolone: DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 5
1.2.1 Aufbau und Aufgabe der DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 5
1.2.2WirkmechanismusderTyp II-Topoisomerasen 6
1.3 Wirkungsmechanismus der Chinolone 6
1.4 Pharmakokinetik und Pharmakodynamik 8
1.5 Unerwünschte Wirkungen und Wechserwirkungen 9
1.6Wirkungsspektnim 11
1.7 Resistenzentwicklung und Resistenzmechanismen bei Escherichia coli 12
1.8 Klinische Bedeutung von E. coli 14
1.9 Klinische Bedeutung der Chinolone 14
2 Fragestellung 16
3 Material und Methoden 17
3.1 Methoden 17
3.1.1 Bakterienstämme 17
3.1.2EmpfindlichkeitstestungmittelsEtest® 17
3.1.3Empfindlichkeitstestung mittels Agardilution 18
3.1.4 Gradientenplatte 19
3.1.5 Toleranz gegenüber organischen Lösungsmitteln [„organic solvent tolerance ,
OST] 21
3.1.6Bestimmung von zellassoziierten Chinolonen 22
3.1.7Primer für PCR und Sequenzierung 24
3.1.8 Amplifikation von gyrA, gyrB, parC undparE mittels PCR und Sequenzierung der
Produkte 25
3.1.9 Auswertung der Sequenzen 26
Gliederung
3.1.10 Datenermittlung und Auswertung 27
3.2 Material 27
3.2.1 Nährmedien 27
3.2.2 Reagenzien und Diagnostika 28
3.2.3 Geräte 29
3.2.4Hilfsmittel 30
4 Ergebnisse 31
4.1 Empfindlichkeitsbestimmung 31
4.1.1 Etest® 31
4.1.2Agardilutionstest 33
4.1.3 Gradientenplatte 36
4.1.4Toleranz gegenüber organischen Lösungsmitteln 38
4.2 Ergebnisse der Sequenzanaryse 40
4.3 Bestimmung von zellassoziierten Chinolonen 43
4.4 Zusammenfassung der Ergebnisse 50
5 Diskussion 52
6 Literatur 60
7 Anhang 66
7.1 Verzeichnis der Abbildungen 66
7.2 Verzeichnis der Tabellen 67
7.3 Verzeichnis der Abkürzungen 68
8 Danksagung 70
9 Lebenslauf 71
7 Anhang
7 Anhang
7.1 Verzeichnis der Abbildungen
Abb. 1: Grundstruktur der Chinolone (nach (24)) 1
Abb. 2: Grundstruktur moderner Fluorchinolone (nach (5)) 2
Abb. 3: Struktur-Wirkungs- und Struktur-Nebenwirkungs-Beziehungen der Chinolone
(modifiziert nach (13)) 3
Abb. 4: Ciprofloxacin-Etest® 18
Abb. 5: Gradientenplatte. Aufgetragen sind verschiedenen klinische Isolate sowie der
ATCC-Kontrollstamm ATCC 25922 (Spur 3) 21
Abb. 6: Position der Primer für die Amplifikation der Fragmente der
Topoisomeraseuntereinheiten gyr/f.gyrß.parC und par£ 25
Abb. 7: Korrelation der MHK-Werte für Ciprofloxacin und Ofloxacin 33
Abb. 8: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure und Ofloxacin (Agardilution)... 36
Abb. 9: Korrelation der MHK-Werte für Ciprofloxacin mit dem Wachstum auf der
Gradientenplatte 38
Abb. 10: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure mit den QE-Werten (Quotient
„Antibiotikum + Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpm ) 46
Abb. 11: Korrelation der MHK-Werte für Ofloxacin (Etest®) mit den QE-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpin ) 47
Abb. 12: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure mit den Qe-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpin , Untergruppe) 49
7 Anhang
Abb. 13: Korrelation der MHK-Werte für Ofloxacin (Etest®) mit den QE-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpin , Untergruppe) 50
7.2 Verzeichnis der Tabellen
Tabelle 1: Einteilung der Fluorchinolone nach Gruppen. Auflistung innerhalb einer Gruppe
nach aufsteigender In-vitro-Aktivität [MHK], nach (39) 4
Tabelle 2: Pipettieransatz pro Probe zur Bestimmung von zellassoziierten Chinolonen mittels
Fhiorometrie 23
Tabelle 3: Für PCR und Sequenzierung verwendete Primer 24
Tabelle 4: MHK-Bestimmung für Ciprofloxacin und Ofloxacin mittels Etest* 32
Tabelle 5: MHK-Bestimmung für Nalidixinsäure und Ofloxacin mittels Agardilution und
Vergleich der MHK-Werte für Ofloxacin aus Agardilution und Etest® 35
Tabelle 6: Wachstum der Keime auf der Gradientenplatte angegeben in cm 37
Tabelle 7: Wachstum der Keime bei Zugabe von Hexan oder Cyclohexan 40
Tabelle 8: Aminosäure(n)austausche in GyrA und ParC (farblich hervorgehoben) mit der
Anzahl der Aminosäurenaustausche und der MHK für Ofloxacin (Agardilution) 42
Tabelle 9: Qe-Werte (Quotient .Antibiotikum + Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpin )
44
Tabelle 10: MHK für Ofloxacin und Nalidixinsäure und QE-Werte (Quotient .Antibiotikum +
Reserpin zu .Antibiotikum ohne Reserpin ) 45
Tabelle 11: MHK für Ofloxacin und Nalidixinsäure und die Qe-Werte für die Stämme mit
genau einem Aminosäurenaustausch in GyrA 48
|
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Gliederung
Gliederung
Gliederung I
1 Einleitung/Problemstellung 1
1.1 Chinolone: Chemische Struktur und Einteilung 1
1.2 Zielstruktur der Chinolone: DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 5
1.2.1 Aufbau und Aufgabe der DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 5
1.2.2WirkmechanismusderTyp II-Topoisomerasen 6
1.3 Wirkungsmechanismus der Chinolone 6
1.4 Pharmakokinetik und Pharmakodynamik 8
1.5 Unerwünschte Wirkungen und Wechserwirkungen 9
1.6Wirkungsspektnim 11
1.7 Resistenzentwicklung und Resistenzmechanismen bei Escherichia coli 12
1.8 Klinische Bedeutung von E. coli 14
1.9 Klinische Bedeutung der Chinolone 14
2 Fragestellung 16
3 Material und Methoden 17
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3.1.1 Bakterienstämme 17
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3.1.5 Toleranz gegenüber organischen Lösungsmitteln [„organic solvent tolerance",
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3.1.7Primer für PCR und Sequenzierung 24
3.1.8 Amplifikation von gyrA, gyrB, parC undparE mittels PCR und Sequenzierung der
Produkte 25
3.1.9 Auswertung der Sequenzen 26
Gliederung
3.1.10 Datenermittlung und Auswertung 27
3.2 Material 27
3.2.1 Nährmedien 27
3.2.2 Reagenzien und Diagnostika 28
3.2.3 Geräte 29
3.2.4Hilfsmittel 30
4 Ergebnisse 31
4.1 Empfindlichkeitsbestimmung 31
4.1.1 Etest® 31
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4.1.3 Gradientenplatte 36
4.1.4Toleranz gegenüber organischen Lösungsmitteln 38
4.2 Ergebnisse der Sequenzanaryse 40
4.3 Bestimmung von zellassoziierten Chinolonen 43
4.4 Zusammenfassung der Ergebnisse 50
5 Diskussion 52
6 Literatur 60
7 Anhang 66
7.1 Verzeichnis der Abbildungen 66
7.2 Verzeichnis der Tabellen 67
7.3 Verzeichnis der Abkürzungen 68
8 Danksagung 70
9 Lebenslauf 71
7 Anhang
7 Anhang
7.1 Verzeichnis der Abbildungen
Abb. 1: Grundstruktur der Chinolone (nach (24)) 1
Abb. 2: Grundstruktur moderner Fluorchinolone (nach (5)) 2
Abb. 3: Struktur-Wirkungs- und Struktur-Nebenwirkungs-Beziehungen der Chinolone
(modifiziert nach (13)) 3
Abb. 4: Ciprofloxacin-Etest® 18
Abb. 5: Gradientenplatte. Aufgetragen sind verschiedenen klinische Isolate sowie der
ATCC-Kontrollstamm ATCC 25922 (Spur 3) 21
Abb. 6: Position der Primer für die Amplifikation der Fragmente der
Topoisomeraseuntereinheiten gyr/f.gyrß.parC und par£ 25
Abb. 7: Korrelation der MHK-Werte für Ciprofloxacin und Ofloxacin 33
Abb. 8: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure und Ofloxacin (Agardilution). 36
Abb. 9: Korrelation der MHK-Werte für Ciprofloxacin mit dem Wachstum auf der
Gradientenplatte 38
Abb. 10: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure mit den QE-Werten (Quotient
„Antibiotikum + Reserpin" zu .Antibiotikum ohne Reserpm") 46
Abb. 11: Korrelation der MHK-Werte für Ofloxacin (Etest®) mit den QE-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin" zu .Antibiotikum ohne Reserpin") 47
Abb. 12: Korrelation der MHK-Werte für Nalidixinsäure mit den Qe-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin" zu .Antibiotikum ohne Reserpin", Untergruppe) 49
7 Anhang
Abb. 13: Korrelation der MHK-Werte für Ofloxacin (Etest®) mit den QE-Werten (Quotient
.Antibiotikum + Reserpin" zu .Antibiotikum ohne Reserpin", Untergruppe) 50
7.2 Verzeichnis der Tabellen
Tabelle 1: Einteilung der Fluorchinolone nach Gruppen. Auflistung innerhalb einer Gruppe
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Tabelle 2: Pipettieransatz pro Probe zur Bestimmung von zellassoziierten Chinolonen mittels
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Tabelle 3: Für PCR und Sequenzierung verwendete Primer 24
Tabelle 4: MHK-Bestimmung für Ciprofloxacin und Ofloxacin mittels Etest* 32
Tabelle 5: MHK-Bestimmung für Nalidixinsäure und Ofloxacin mittels Agardilution und
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| title_full | Bedeutung von Efflux bei der Resistenzentwicklung von klinischen Isolaten von Escherichia coli mit "low-level resistance" gegenüber Fluorchinolonen vorgelegt von Andrea Nickl |
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| topic_facet | Fluorchinolone Resistenz Escherichia coli Hochschulschrift |
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