Charakterisierung von T-Zell-Antworten gegen Leukämie-assoziierte Antigene bei der akuten myeloischen Leukämie:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2007
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS V
1. EINLEITUNG 1
1.1 Akute Myeloische Leukämie (AML) 1
1.1.1 Definition und Einteilung 1
1.1.2 Symptomatik und klinischer Verlauf 2
1.1.3 Epidemiologie und Ätiologie 3
1.1.4 Therapie der AML 3
1.2 Immunologische Grundlagen 7
1.2.1 Der Haupthistokompatibilitätskomplex 7
1.2.2 Antigenerkennung und Aktivierung von T-Lymphozyten 8
1.2.3 Erkennung des Tumors durch das Immunsystem 9
1.3 Identifizierung Leukämie-assoziierter Antigene (LAA) 11
1.4 Immuntherapien bei malignen hämatologischen Erkrankungen 13
1.5 Zielsetzung 14
2. MATERIAL UND METHODEN 16
2.1 Grundausstattungen 16
2.1.1 Allgemeine Laborgeräte 16
2.1.2 Plastikwaren 17
2.1.3 Chemikalien 17
2.1.4 Spezielle Chemikalien 18
2.2 Puffer 19
2.3 Zelllinien, Antikörper und Zytokine 20
2.4 Kulturmedien 21
2.5 Peptide 22
2.6 Patienten 23
2.7 Materialgewinnung und Probenaufbereitung 24
2.7.1 Materialgewinnung 24
2.7.2 Zellisolation und -Archivierung 25
2.8 FACS-Analyse 26
2.9 Zellseparation 27
V
2.10 ELISPOT-Assay 29
2.10.1 IFN-yELISPOT 31
2.10.2 Granzyme B ELISPOT 34
2.11 Zytolyse-Test(51-Chrom-Release-Assay) 36
2.12 Statistik 39
3. ERGEBNISSE 40
3.1 Bestimmung des Oberflächenantigens HLA-A2 mittels
FACS-Analyse 40
3.2 Auswahl der Peptide 41
3.3 Etablierung des ELISPOT-Assays 42
3.3.1 Ermittlung der Peptidkonzentration 43
3.3.2 Nachweis der Spezifität der Immunantwort für HLA-A2 44
3.4 Zelluläre Immunantworten gegen PRAME und G250-Peptide bei
gesunden Probanden 45
3.4.1 Granzyme B ELISPOT 46
3.4.2 IFN-yELISPOT 48
3.5 Zelluläre Immunantworten gegen PRAME und G250-Peptide bei
AML-Patienten 50
3.5.1 Granzyme B ELISPOT 51
3.5.2 IFN-yELISPOT 52
3.6 Spezifische Zelllyse mittels 51 Chrom-Release-Assay 55
3.6.1 Zytotoxizitätsmessung 56
3.6.2 HLA-ABC Blockierungsversuch 57
4. DISKUSSION __^_ 59
4.1 Etablierung des ELISPOT-Assays 59
4.2 Nachweis einer zellulären Immunantwort gegen die Antigene
PRAME und G250 62
4.3 Immuntherapien und Vakzinierungen bei malignen hämatolo-
gischen Erkrankungen 64
5. ZUSAMMENFASSUNG 68
6. LITERATURVERZEICHNIS 70
VI
|
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS V
1. EINLEITUNG 1
1.1 Akute Myeloische Leukämie (AML) 1
1.1.1 Definition und Einteilung 1
1.1.2 Symptomatik und klinischer Verlauf 2
1.1.3 Epidemiologie und Ätiologie 3
1.1.4 Therapie der AML 3
1.2 Immunologische Grundlagen 7
1.2.1 Der Haupthistokompatibilitätskomplex 7
1.2.2 Antigenerkennung und Aktivierung von T-Lymphozyten 8
1.2.3 Erkennung des Tumors durch das Immunsystem 9
1.3 Identifizierung Leukämie-assoziierter Antigene (LAA) 11
1.4 Immuntherapien bei malignen hämatologischen Erkrankungen 13
1.5 Zielsetzung 14
2. MATERIAL UND METHODEN 16
2.1 Grundausstattungen 16
2.1.1 Allgemeine Laborgeräte 16
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2.1.4 Spezielle Chemikalien 18
2.2 Puffer 19
2.3 Zelllinien, Antikörper und Zytokine 20
2.4 Kulturmedien 21
2.5 Peptide 22
2.6 Patienten 23
2.7 Materialgewinnung und Probenaufbereitung 24
2.7.1 Materialgewinnung 24
2.7.2 Zellisolation und -Archivierung 25
2.8 FACS-Analyse 26
2.9 Zellseparation 27
V
2.10 ELISPOT-Assay 29
2.10.1 IFN-yELISPOT 31
2.10.2 Granzyme B ELISPOT 34
2.11 Zytolyse-Test(51-Chrom-Release-Assay) 36
2.12 Statistik 39
3. ERGEBNISSE 40
3.1 Bestimmung des Oberflächenantigens HLA-A2 mittels
FACS-Analyse 40
3.2 Auswahl der Peptide 41
3.3 Etablierung des ELISPOT-Assays 42
3.3.1 Ermittlung der Peptidkonzentration 43
3.3.2 Nachweis der Spezifität der Immunantwort für HLA-A2 44
3.4 Zelluläre Immunantworten gegen PRAME und G250-Peptide bei
gesunden Probanden 45
3.4.1 Granzyme B ELISPOT 46
3.4.2 IFN-yELISPOT 48
3.5 Zelluläre Immunantworten gegen PRAME und G250-Peptide bei
AML-Patienten 50
3.5.1 Granzyme B ELISPOT 51
3.5.2 IFN-yELISPOT 52
3.6 Spezifische Zelllyse mittels 51 Chrom-Release-Assay 55
3.6.1 Zytotoxizitätsmessung 56
3.6.2 HLA-ABC Blockierungsversuch 57
4. DISKUSSION _^_ 59
4.1 Etablierung des ELISPOT-Assays 59
4.2 Nachweis einer zellulären Immunantwort gegen die Antigene
PRAME und G250 62
4.3 Immuntherapien und Vakzinierungen bei malignen hämatolo-
gischen Erkrankungen 64
5. ZUSAMMENFASSUNG 68
6. LITERATURVERZEICHNIS 70
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