Zell- und Gewebekultur: von den Grundlagen zur Laborbank
Gespeichert in:
| Späterer Titel: | Gstraunthaler, Gerhard Zell- und Gewebekultur |
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| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Heidelberg
Spektrum ; Akad. Verl.
2008
|
| Ausgabe: | 6. Aufl. [voll. überarb. u. erw.] |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XV, 406 S. Ill., graph. Darst. 24 cm |
| ISBN: | 9783827417763 |
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Inhaltsverzeichnis
Vorwort.
V
Einleitung . XIII
I
Allgemeine Grundlagen der Zeil- und Gewebekultur .
ι
1 Das Zellkulturlabor Räumliche und apparative Voraussetzungen. 3
1.1 Der Reinigungsbereich. 3
1.2 Der Vorbereitungs-und Verarbeitungsbereich. 4
1.3 Der Sterilbereich. 5
2 Steriltechnik - Kontaminationen . 16
2.1 Der Sterilbereich. 18
2.2 Laborreinigung. 18
2.3 Hygiene. 19
2.4 „Aseptische" Arbeitstechnik . 19
2.5 Sterilisationsverfahren. 23
2.6 Antibiotika (Verwendung von Antibiotika in der Zellkultur). 35
2.7 Mycoplasmen. 37
2.8 Kreuzkontaminationen . 50
3 Sicherheit in der Zellkultur . 52
3.1 Sicherheitsvorschriften und Entsorgung. 52
3.2 Generelle Probleme. 57
4 Literatur. 58
II
Die Zelle und ihre Umgebung .
01
5 Zellbiologische Grundlagen der Zeil- und Gewebekultur. 63
6 Kulturgefäße und ihre Behandlung. 64
6.1 Züchtung von Zellen auf Glas. 65
6.2 Züchtung von Zellen auf Plastikmaterial. 67
6.3 Züchtung von Zellen auf anderen Materialien . 71
6.4 Spezielle Kulturgefäße. 71
6.5 Reinigung und Vorbehandlung von Glaswaren. 75
6.6 Vorbehandlung von Kulturgefäßen mit Polylysin oder mit Komponenten der
extrazellulären Matrix zur Modifizierung der Oberflächeneigenschaften . 78
7 Zellkulturmedien. 84
7.1 Zusammensetzung der Medien . 88
7.2 Kurze Beschreibung der gebräuchlichsten Kulturmedien. 99
7.3 Herstellung gebrauchsfertiger Medien. 103
VIII Inhaltsverzeichnis
8 Serumfreie Zellkultur. 107
8.1 Grundmedien. 110
8.2 Zusätze zu serumfreien Medien. 110
8.3 Übergang von serumhaltigen zu serumfreien Medien . 111
8.4 Serumfreie und proteinfreie Kulturmedien. 113
8.5 Zusammenfassung: Allgemeine Grundsätze in der Herstellung
und Verwendung von Zellkulturmedien. 114
9 Physiologische Zellkulturparameter. 115
9.1 Osmolarität. 116
9.2 Temperatur. 116
9.3 Oxygenierung. 116
9.4 pH-Wert und Pufferung. 117
10 Reinstwasser für Zeil-und Gewebekulturen. 120
10.1 Verfahren der Aufbereitung, Vorbehandlung. 121
10.2 Reinstwasseraufbereitungssysteme. 122
10.3 Lagerung von Reinstwasser. 124
10.4 Wasser für Reinigungszwecke. 124
11 Literatur . 124
III
Routinemethoden zur allgemeinen Handhabung
kultivierter Zellen. 127
12 Mediumwechsel und Fütterungszyklen . 129
12.1 Mediumwechsel bei Monolayerkulturen. 129
12.2 Mediumwechsel bei Suspensionskulturen. 132
13 Subkultivierung/Passagieren . 133
13.1 Subkultivierung von Monolayerkulturen. 133
13.2 Subkultivierung von Suspensionskulturen. 140
14 Bestimmung allgemeiner Wachstumsparameter. 141
14.1 Mikroskopische Betrachtung der Kulturen. 141
14.2 Bestimmung der Zellzahl (und Zellmasse). 142
14.3 Bestimmung allgemeiner Stoffwechselparameter. 153
14.4 Vitalitätstests. 153
15 Einfrieren, Lagerung und Versand von Zellen . 159
15.1 Einfrieren von Zellen. 160
15.2 Lagerung der Zellen. 163
15.3 Auftauen von Zellen. 163
15.4 Versand von Zellen . 165
15.5 Probleme mit Zellen. 165
16 Qualitätskontrolle und
Cell
Banking. 166
16.1 Qualitätskontrolle. 166
Inhaltsverzeichnis
IX
16.2
Cell
Banking. 168
17 Standardisierung in der Zellkultur
(Good
Gell
Culture Practice)
. 169
18 Literatur . 170
IV
Spezielle Methoden und Anwendungen. 173
19 Allgemeine Aspekte der Primärkultur. 175
19.1 Anlegen einer Primärkultur . 175
19.2 Seneszenz und Zellalterung. 177
19.3 Apoptose in der Zellkultur. 180
19.4 Transformation und Immortalisierung. 181
19.5 Literatur. 185
20 Spezielle Primärkulturen. 187
20.1 Kultivierung von Herzmuskelzellen des Hühnchens . 187
20.2 Kultivierung von Herzmuskelzellen aus
neonatalen
Rattenherzen. 188
20.3 Primärkulturen aus frischen Hautproben (Biopsien)
menschlichen Ursprungs . 190
20.4 Isolierung von Lymphocyten aus Vollblut mittels
Dichtegradientenzentrifugation . 191
20.5 Primärkulturen aus Mäusecerebellum (Kleinhirn) . 192
20.6 Primärkulturen von Hepatocyten. 194
20.7 Isolierung und Primärkultur von Endothelzellen . 198
20.8 Gewinnung einer Zellkultur aus soliden Humantumoren. 201
20.9 Gewinnung von Keratinocyten. 203
20.10 Literatur. 206
21 Kultivierung spezieller Zelllinien. 207
21.1 Mammaliazelllinien . 207
21.2 Kaltblütige Vertebraten . 220
21.3 Invertebraten. 221
21.4 Insektenzellen für die biotechnologische Produktion rekombinanter Proteine
(Sf9-Zellen aus Spodoptera frugiperda). 223
21.5 Literatur. 226
22 Spezielle zellbiologische Methoden in der Zellkultur. 228
22.1 Transfektion. 228
22.2 Klonieren. 236
22.3 Zellfusion, Hybridomatechnik. 239
22.4 Zellsynchronisation. 249
22.5 Cytometrie/Cell
Sorting
. 253
22.6 Versuche zur
/AJ-wTro-Toxizität
. 261
22.7 Migrationsassays. 275
22.8 Chromosomenpräparation. 282
22.9 Literatur. 283
Inhaltsverzeichnis
XI
35.4 Zeitschriften. 387
35.5 Internet-Informationen zur Cytometrie. 388
35.6 Institutionen und Firmen, die Zellkulturkurse anbieten. 388
35.7 Wissenschaftliche Gesellschaften für Zellkultur. 388
35.8 Übersichtswerke zur Beschaffung von Geräten, Labormaterial und Reagenzien 389
36 Lieferfirmen und Hersteller . 389
Index. 398 |
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Inhaltsverzeichnis
Vorwort.
V
Einleitung . XIII
I
Allgemeine Grundlagen der Zeil- und Gewebekultur .
ι
1 Das Zellkulturlabor Räumliche und apparative Voraussetzungen. 3
1.1 Der Reinigungsbereich. 3
1.2 Der Vorbereitungs-und Verarbeitungsbereich. 4
1.3 Der Sterilbereich. 5
2 Steriltechnik - Kontaminationen . 16
2.1 Der Sterilbereich. 18
2.2 Laborreinigung. 18
2.3 Hygiene. 19
2.4 „Aseptische" Arbeitstechnik . 19
2.5 Sterilisationsverfahren. 23
2.6 Antibiotika (Verwendung von Antibiotika in der Zellkultur). 35
2.7 Mycoplasmen. 37
2.8 Kreuzkontaminationen . 50
3 Sicherheit in der Zellkultur . 52
3.1 Sicherheitsvorschriften und Entsorgung. 52
3.2 Generelle Probleme. 57
4 Literatur. 58
II
Die Zelle und ihre Umgebung .
01
5 Zellbiologische Grundlagen der Zeil- und Gewebekultur. 63
6 Kulturgefäße und ihre Behandlung. 64
6.1 Züchtung von Zellen auf Glas. 65
6.2 Züchtung von Zellen auf Plastikmaterial. 67
6.3 Züchtung von Zellen auf anderen Materialien . 71
6.4 Spezielle Kulturgefäße. 71
6.5 Reinigung und Vorbehandlung von Glaswaren. 75
6.6 Vorbehandlung von Kulturgefäßen mit Polylysin oder mit Komponenten der
extrazellulären Matrix zur Modifizierung der Oberflächeneigenschaften . 78
7 Zellkulturmedien. 84
7.1 Zusammensetzung der Medien . 88
7.2 Kurze Beschreibung der gebräuchlichsten Kulturmedien. 99
7.3 Herstellung gebrauchsfertiger Medien. 103
VIII Inhaltsverzeichnis
8 Serumfreie Zellkultur. 107
8.1 Grundmedien. 110
8.2 Zusätze zu serumfreien Medien. 110
8.3 Übergang von serumhaltigen zu serumfreien Medien . 111
8.4 Serumfreie und proteinfreie Kulturmedien. 113
8.5 Zusammenfassung: Allgemeine Grundsätze in der Herstellung
und Verwendung von Zellkulturmedien. 114
9 Physiologische Zellkulturparameter. 115
9.1 Osmolarität. 116
9.2 Temperatur. 116
9.3 Oxygenierung. 116
9.4 pH-Wert und Pufferung. 117
10 Reinstwasser für Zeil-und Gewebekulturen. 120
10.1 Verfahren der Aufbereitung, Vorbehandlung. 121
10.2 Reinstwasseraufbereitungssysteme. 122
10.3 Lagerung von Reinstwasser. 124
10.4 Wasser für Reinigungszwecke. 124
11 Literatur . 124
III
Routinemethoden zur allgemeinen Handhabung
kultivierter Zellen. 127
12 Mediumwechsel und Fütterungszyklen . 129
12.1 Mediumwechsel bei Monolayerkulturen. 129
12.2 Mediumwechsel bei Suspensionskulturen. 132
13 Subkultivierung/Passagieren . 133
13.1 Subkultivierung von Monolayerkulturen. 133
13.2 Subkultivierung von Suspensionskulturen. 140
14 Bestimmung allgemeiner Wachstumsparameter. 141
14.1 Mikroskopische Betrachtung der Kulturen. 141
14.2 Bestimmung der Zellzahl (und Zellmasse). 142
14.3 Bestimmung allgemeiner Stoffwechselparameter. 153
14.4 Vitalitätstests. 153
15 Einfrieren, Lagerung und Versand von Zellen . 159
15.1 Einfrieren von Zellen. 160
15.2 Lagerung der Zellen. 163
15.3 Auftauen von Zellen. 163
15.4 Versand von Zellen . 165
15.5 Probleme mit Zellen. 165
16 Qualitätskontrolle und
Cell
Banking. 166
16.1 Qualitätskontrolle. 166
Inhaltsverzeichnis
IX
16.2
Cell
Banking. 168
17 Standardisierung in der Zellkultur
(Good
Gell
Culture Practice)
. 169
18 Literatur . 170
IV
Spezielle Methoden und Anwendungen. 173
19 Allgemeine Aspekte der Primärkultur. 175
19.1 Anlegen einer Primärkultur . 175
19.2 Seneszenz und Zellalterung. 177
19.3 Apoptose in der Zellkultur. 180
19.4 Transformation und Immortalisierung. 181
19.5 Literatur. 185
20 Spezielle Primärkulturen. 187
20.1 Kultivierung von Herzmuskelzellen des Hühnchens . 187
20.2 Kultivierung von Herzmuskelzellen aus
neonatalen
Rattenherzen. 188
20.3 Primärkulturen aus frischen Hautproben (Biopsien)
menschlichen Ursprungs . 190
20.4 Isolierung von Lymphocyten aus Vollblut mittels
Dichtegradientenzentrifugation . 191
20.5 Primärkulturen aus Mäusecerebellum (Kleinhirn) . 192
20.6 Primärkulturen von Hepatocyten. 194
20.7 Isolierung und Primärkultur von Endothelzellen . 198
20.8 Gewinnung einer Zellkultur aus soliden Humantumoren. 201
20.9 Gewinnung von Keratinocyten. 203
20.10 Literatur. 206
21 Kultivierung spezieller Zelllinien. 207
21.1 Mammaliazelllinien . 207
21.2 Kaltblütige Vertebraten . 220
21.3 Invertebraten. 221
21.4 Insektenzellen für die biotechnologische Produktion rekombinanter Proteine
(Sf9-Zellen aus Spodoptera frugiperda). 223
21.5 Literatur. 226
22 Spezielle zellbiologische Methoden in der Zellkultur. 228
22.1 Transfektion. 228
22.2 Klonieren. 236
22.3 Zellfusion, Hybridomatechnik. 239
22.4 Zellsynchronisation. 249
22.5 Cytometrie/Cell
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. 253
22.6 Versuche zur
/AJ-wTro-Toxizität
. 261
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22.8 Chromosomenpräparation. 282
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XI
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