Einfluss der Hemmung der membranständigen Natrium-Kalium-ATPase mit Ouabain auf Funktion und Expression Calcium und Natrium regulierender Proteine: Untersuchungen an isolierten Kardiomyozyten der Ratte
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2008
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis 5
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 8
1.1 Wirkmechanismus von Ouabain und sein Einsatz in der
Herzinsuffizienz 8
1.1.1 Ouabain 8
1.1.2 Wirkmechanismus von Ouabain und die beteiligten Natrium und
Calcium regulierenden Proteine 10
1.1.3 Einsatzgebiete von Herzglykosiden 13
1.1.4 Ätiologie und Pathophysiologie der Herzinsuffizienz 13
1.2 Fragestellung der vorliegenden Arbeit 16
2 Material und Methoden 19
2.1 Material 19
2.1.1 Versuchstiere 19
2.1.2 Substanzen und Lösungen 19
2.2 Methoden 22
2.2.1 Isolierung der Kardiomyozyten 22
2.2.2 Messung der Verkürzungs-Frequenz-Beziehung 24
2.2.3 Proteinpräparation 28
2.2.4 Proteinbestimmung 28
2.2.5 Bestimmung der Expression Calcium und Natrium regulierender
Proteine 29
2.2.6 Statistische Auswertung 32
3 Ergebnisse 34
3.1 Funktionelle Untersuchungen zur Verkürzungs-Frequenz-
Beziehung an isolierten Rattenkardiomyozyten 34
3.1.1 Akuter und Langzeiteffekt des Ouabains 34
3.1.2 Inhibition der SERCA 2a 35
3.2 Biochemische Untersuchungen Calcium und Natrium
regulierender Proteine 38
Inhaltsverzeichnis 6
3.2.1 Proteinexpression der alpha 1 Untereinheit der Natrium-Kalium-
ATPase 39
3.2.2 Proteinexpression der beta 1 Untereinheit der Natrium-Kalium-
ATPase 40
3.2.3 Proteinexpression der SERCA 2a 41
3.2.4 Proteinexpression des Phospholambans 42
3.2.5 Proteinexpression des Calsequestrins 43
3.2.6 Proteinexpression des Natrium-Calcium-Austauschers 44
3.2.7 Zusammenfassung 45
4 Diskussion 47
4.1 Das Modell der akuten und der Langzeitbehandlung mit Ouabain
an isolierten Kardiomyozyten 47
4.2 Folgen der akuten und der Langzeitbehandlung mit Ouabain 48
4.3 Bedeutung der Ergebnisse für die chronische
Herzglykosidtherapie beim Menschen 52
5 Zusammenfassung 54
6 Literaturverzeichnis 57
7 Vorabveröffentlichungen 65
8 Lebenslauf 66
Abbildunys- und Tabellenverzeichnis 7
Abbildungs- und Tabellenverzeichnis
Abbildungen
Abbildung 1: Strophanthus gratus 8
Abbildung 2: Struktur des Herzglykosides Ouabain 9
Abbildung 3: Wirkmechanismus von Ouabain 12
Abbildung 4: Natrium-Kalium-ATPase 16
Abbildung 5: Isolierte Rattenkardiomyozyten am Tag 0 und am Tag 2 24
Abbildung 6: Einzelzell-Anlage (Scientific Instruments, Heidelberg) 27
Abbildung 7: Proteinabhängigkeit der beta 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase im Western-Blot 30
Abbildung 8: Originalblot der alpha 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase (Tag 2) 39
Abbildung 9: Originalblot der beta 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase (Tag 2) 40
Abbildung 10: Originalblot der SERCA 2a (Tag 2) 41
Abbildung 11: Originalblot des Phospholambans (Tag 2) 42
Abbildung 12: Originalblot des Calsequestrins (Tag 2) 43
Abbildung 13: Originalblot des Natrium-Calcium-Austauschers (Tag 2) 44
Abbildung 14: Auswertung der Proteinexpression am Tag 2 45
Abbildung 15: Auswertung der Proteinexpression am Tag 4 46
Tabellen
Tabelle 1: Statistische Auswertung der funktioneilen Untersuchungen 37
|
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Inhaltsverzeichnis 5
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 8
1.1 Wirkmechanismus von Ouabain und sein Einsatz in der
Herzinsuffizienz 8
1.1.1 Ouabain 8
1.1.2 Wirkmechanismus von Ouabain und die beteiligten Natrium und
Calcium regulierenden Proteine 10
1.1.3 Einsatzgebiete von Herzglykosiden 13
1.1.4 Ätiologie und Pathophysiologie der Herzinsuffizienz 13
1.2 Fragestellung der vorliegenden Arbeit 16
2 Material und Methoden 19
2.1 Material 19
2.1.1 Versuchstiere 19
2.1.2 Substanzen und Lösungen 19
2.2 Methoden 22
2.2.1 Isolierung der Kardiomyozyten 22
2.2.2 Messung der Verkürzungs-Frequenz-Beziehung 24
2.2.3 Proteinpräparation 28
2.2.4 Proteinbestimmung 28
2.2.5 Bestimmung der Expression Calcium und Natrium regulierender
Proteine 29
2.2.6 Statistische Auswertung 32
3 Ergebnisse 34
3.1 Funktionelle Untersuchungen zur Verkürzungs-Frequenz-
Beziehung an isolierten Rattenkardiomyozyten 34
3.1.1 Akuter und Langzeiteffekt des Ouabains 34
3.1.2 Inhibition der SERCA 2a 35
3.2 Biochemische Untersuchungen Calcium und Natrium
regulierender Proteine 38
Inhaltsverzeichnis 6
3.2.1 Proteinexpression der alpha 1 Untereinheit der Natrium-Kalium-
ATPase 39
3.2.2 Proteinexpression der beta 1 Untereinheit der Natrium-Kalium-
ATPase 40
3.2.3 Proteinexpression der SERCA 2a 41
3.2.4 Proteinexpression des Phospholambans 42
3.2.5 Proteinexpression des Calsequestrins 43
3.2.6 Proteinexpression des Natrium-Calcium-Austauschers 44
3.2.7 Zusammenfassung 45
4 Diskussion 47
4.1 Das Modell der akuten und der Langzeitbehandlung mit Ouabain
an isolierten Kardiomyozyten 47
4.2 Folgen der akuten und der Langzeitbehandlung mit Ouabain 48
4.3 Bedeutung der Ergebnisse für die chronische
Herzglykosidtherapie beim Menschen 52
5 Zusammenfassung 54
6 Literaturverzeichnis 57
7 Vorabveröffentlichungen 65
8 Lebenslauf 66
Abbildunys- und Tabellenverzeichnis 7
Abbildungs- und Tabellenverzeichnis
Abbildungen
Abbildung 1: Strophanthus gratus 8
Abbildung 2: Struktur des Herzglykosides Ouabain 9
Abbildung 3: Wirkmechanismus von Ouabain 12
Abbildung 4: Natrium-Kalium-ATPase 16
Abbildung 5: Isolierte Rattenkardiomyozyten am Tag 0 und am Tag 2 24
Abbildung 6: Einzelzell-Anlage (Scientific Instruments, Heidelberg) 27
Abbildung 7: Proteinabhängigkeit der beta 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase im Western-Blot 30
Abbildung 8: Originalblot der alpha 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase (Tag 2) 39
Abbildung 9: Originalblot der beta 1 Untereinheit der
Natrium-Kalium-ATPase (Tag 2) 40
Abbildung 10: Originalblot der SERCA 2a (Tag 2) 41
Abbildung 11: Originalblot des Phospholambans (Tag 2) 42
Abbildung 12: Originalblot des Calsequestrins (Tag 2) 43
Abbildung 13: Originalblot des Natrium-Calcium-Austauschers (Tag 2) 44
Abbildung 14: Auswertung der Proteinexpression am Tag 2 45
Abbildung 15: Auswertung der Proteinexpression am Tag 4 46
Tabellen
Tabelle 1: Statistische Auswertung der funktioneilen Untersuchungen 37 |
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