Expandierung und Charakterisierung virusspezifischer humaner zytotoxischer T-Zellen unter dem Einfluss dendritischer Zellen:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis Seite 3
Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 6
2 Einleitung 9
2.1 Prinzipien und Einsatz adoptiver zellulärer Immuntherapie 9
2.2 Dendritische Zellen und ihre Aufgabe in der Immunantwort 10
2.2.1 Herkunft und Entwicklung humaner dendritischer Zellen 10
2.2.2 Antigen-Aufnahme und -Prozessierung durch dendritische Zelle.... 12
2.2.3 Aktvierung einiger TLRs 16
2.2.4 Reifung und Migration von dendritischen Zellen 20
2.3 Überblick über die antivirale Immunantwort 22
2.3.1 Interaktionen zwischen T-Zellen und DCs und die Aktivierung
derT-Effektorzelle 22
2.3.2 Differenzierung von CDS^-T-Zellen 26
2.3.3 Einfluss von Zytokinen auf das CTL-System 27
2.3.3.1 IL-12 28
2.3.3.2 IL-18 29
2.3.3.3 TGF-B1 30
3 Zielsetzung 31
4 Material und Methoden 32
4.1 Material 32
4.1.1 Medien, Puffer und Seren 32
4.1.2 Antikörper 36
4.1.3 HLA-A2 bindende Peptide 38
4.1.4 Beads 39
4.1.5 Zytokine 39
4.1.6 Zellkulturflaschen, -platten, -röhrchen 39
4.1.7 Geräte 40
4.2 Methoden 40
4.2.1 Isolierung mononukleärer Zellen und Monocyten aus
Leukozyten-Apheresaten 40
4.2.2 Einfrieren- und auftauen von Zellen 42
4.2.3 Zellkultur 42
4.2.4 Mikroskopie 43
Inhaltsverzeichnis Seite 4
4.2.5 Herstellung des Lysats zur Beladung von Dendritischen Zellen 43
4.2.6 Trypanblaufärbung 44
4.2.7 Zählen von lebenden Zellen 44
4.2.8 Herstellung eines EBV Überstandes 44
4.2.9 Anlegen einer EBV Transformation 45
4.2.10 Bestrahlen der LCLs für die CTL Kultur 45
4.2.11 Enzyme-Iinked Immunosorbent Assay (ELISA) 45
4.2.12 Pentamer Färbung 47
4.2.13 Analyse der Differenzierungsstufe der spezifischen CD8pos-T-
Zellen 48
4.2.14 Zellartbestimmung in der CTL-Kultur 49
4.2.15 Reifungs-FACS Analyse für dendritische Zellen 49
4.2.16 Perforin-Messung 49
4.2.17 Reifung- und Peptid Beladung von dendritischen Zellen 49
4.2.19 Generierung von Peptid spezifischen CTLs 50
4.2.20 Zytotoxizitäts-Test 50
4.2.21 Statistik 52
5 Ergebnisse 53
5.1 Einfluss Lysat-beladener DCs auf polyklonale CTL-Kulturen 53
5.1.1 Generierung EBV-spezifischer CTLs durch autologe
EBV-transformierte LCLs 53
5.1.2 DC-Behandlung für den Einsatz im CTL-System 56
5.1.2.1 Beeinflusst EDTA die Viabilität der geernteten DCs? 56
5.1.2.2 Auswirkung des Waschvorgangs auf die gesamte DC-
Ausbeute 59
5.1.2.3 Erfolgt eine vollständige Ausreifung der DCs, nachdem
der Reifungsstimuli ausgewaschen wurde? 61
5.1.2.4 Vergleich der IL-12 Expression von DCs unter
verschiedenen Bedingungen 62
5.1.3 CTL-Generierung mit Lysat-beladenen autologen DCs im
Vergleich zu autologen LCLs 65
5.1.4 Einfluss unterschiedlich gereifter und Lysat beladener- oder
unbeladener DCs auf die Generierung von CTLs 75
5.2 Einführung eines Peptidsystems zur Generierung von CTLs 82
5.2.1 Grundaufbau des Peptidsystems 82
Inhaltsverzeichnis Seite 5
5.2.2 Einfluss R848-TLR-gereifter DCs im Vergleich zu Zytokin-
Cocktail-gereiften DCs auf die CTLs 83
5.2.3 Einfluss anderer TLR-gereifter DCs auf die generierten CTLs 91
5.3 Einfluss von Zytokinen auf die expandierten Peptid-spezifischen CTLs 94
5.3.1 Einfluss von IL-12 auf die CTL-Kultur 94
5.3.2 Einwirkung von TGF-B1 auf die Peptid-spezifischen CTLs 107
5.3.3 Einfluss von IL-18 auf Peptid-spezifische CTLs 114
6 Diskussion 125
6.1 Einsatz dendritischer Zellen in deradoptiven Immuntherapie 125
6.2 Einfluss unterschiedlich gereifter DCs auf die Generierung von CTLs 127
6.3 Auswirkung der Kokultivierung von Zytokinen in der CTL-Kultur 131
6.4 Schlussmodel 136
7 Literaturverzeichnis 139
8 Abkürzungsverzeichnis 154
9 Eigene Veröffentlichungen 156
10 Lebenslauf 157
11 Danksagung 158
12 Nachdruck der eigenen Veröffentlichungen 159
|
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Inhaltsverzeichnis Seite 3
Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 6
2 Einleitung 9
2.1 Prinzipien und Einsatz adoptiver zellulärer Immuntherapie 9
2.2 Dendritische Zellen und ihre Aufgabe in der Immunantwort 10
2.2.1 Herkunft und Entwicklung humaner dendritischer Zellen 10
2.2.2 Antigen-Aufnahme und -Prozessierung durch dendritische Zelle. 12
2.2.3 Aktvierung einiger TLRs 16
2.2.4 Reifung und Migration von dendritischen Zellen 20
2.3 Überblick über die antivirale Immunantwort 22
2.3.1 Interaktionen zwischen T-Zellen und DCs und die Aktivierung
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2.3.2 Differenzierung von CDS^-T-Zellen 26
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4.2.1 Isolierung mononukleärer Zellen und Monocyten aus
Leukozyten-Apheresaten 40
4.2.2 Einfrieren- und auftauen von Zellen 42
4.2.3 Zellkultur 42
4.2.4 Mikroskopie 43
Inhaltsverzeichnis Seite 4
4.2.5 Herstellung des Lysats zur Beladung von Dendritischen Zellen 43
4.2.6 Trypanblaufärbung 44
4.2.7 Zählen von lebenden Zellen 44
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4.2.9 Anlegen einer EBV Transformation 45
4.2.10 Bestrahlen der LCLs für die CTL Kultur 45
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4.2.13 Analyse der Differenzierungsstufe der spezifischen CD8pos-T-
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4.2.14 Zellartbestimmung in der CTL-Kultur 49
4.2.15 Reifungs-FACS Analyse für dendritische Zellen 49
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4.2.19 Generierung von Peptid spezifischen CTLs 50
4.2.20 Zytotoxizitäts-Test 50
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5 Ergebnisse 53
5.1 Einfluss Lysat-beladener DCs auf polyklonale CTL-Kulturen 53
5.1.1 Generierung EBV-spezifischer CTLs durch autologe
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5.1.2 DC-Behandlung für den Einsatz im CTL-System 56
5.1.2.1 Beeinflusst EDTA die Viabilität der geernteten DCs? 56
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5.1.2.4 Vergleich der IL-12 Expression von DCs unter
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unbeladener DCs auf die Generierung von CTLs 75
5.2 Einführung eines Peptidsystems zur Generierung von CTLs 82
5.2.1 Grundaufbau des Peptidsystems 82
Inhaltsverzeichnis Seite 5
5.2.2 Einfluss R848-TLR-gereifter DCs im Vergleich zu Zytokin-
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5.2.3 Einfluss anderer TLR-gereifter DCs auf die generierten CTLs 91
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5.3.1 Einfluss von IL-12 auf die CTL-Kultur 94
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6 Diskussion 125
6.1 Einsatz dendritischer Zellen in deradoptiven Immuntherapie 125
6.2 Einfluss unterschiedlich gereifter DCs auf die Generierung von CTLs 127
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6.4 Schlussmodel 136
7 Literaturverzeichnis 139
8 Abkürzungsverzeichnis 154
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| spelling | Stilper, Andrea Verfasser aut Expandierung und Charakterisierung virusspezifischer humaner zytotoxischer T-Zellen unter dem Einfluss dendritischer Zellen von Andrea Stilper 2008 159 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2008 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek gewährleistet Immuntherapie (DE-588)4026640-0 gnd rswk-swf Dendritische Zelle (DE-588)4313846-9 gnd rswk-swf Knochenmarktransplantation (DE-588)4164288-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Knochenmarktransplantation (DE-588)4164288-0 s Immuntherapie (DE-588)4026640-0 s Dendritische Zelle (DE-588)4313846-9 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-9447 https://open.fau.de/handle/openfau/643 Verlag kostenfrei Volltext https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-9447 Resolvingsystem http://d-nb.info/989353044/34 HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=016538381&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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