Genetische Markierung von humanen mesenchymalen Stammzellen mittels enhanced green fluorescent protein:
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2008
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 4
1.1 Grundlagen und bisherige Forschung 4
1.1.1 Stammzellcn 4
1.1.2 Humane mcscnchymale Stammzellcn 5
1.1.3 hMSC und Tissue Engineering in der Therapie von Knochendefekten 7
1.1.4 Genetische Markierung von Zellen 10
1.2 Aufgabenstellung 14
1.2.1 Herstellung eines Lcntiviralcn Expressionssystems 14
1.2.2 Lcntiviralc Transduktion von humanen mcsenchymalcn Stammzcllen mit
cGFP 14
1.2.3 Besiedclung von Spongiosa-Leitschicnen mit cGFP markierten humanen
mesenchymalcn Stammzellcn 14
2 Material und Methoden 15
2.1 Methoden 15
2.1.1 Herstellung des lcntiviralen Expressionskonstruktcs 15
2.1.2 Virusherstellung 21
2.1.3 Transduktion der hMSC 28
2.1.4 Bcsicdelung der Knochenleitschienen 30
2.2 Material 33
2.2.1 Laborgeräte 33
2.2.2 Labor-Hilfsmittel 34
2.2.3 Materialien und Vcrbrauchsmaterialien 34
2.2.4 Substanzen allgemein 34
2.2.5 Substanzen Klonicrung 34
2.2.6 Substanzen Zcllkultur 36
3 Ergebnisse 38
3.1 Ergebnis der Klonierung 38
3.2 Ergebnis der Virusherstellung 40
33 Bestimmung der Virustiter 43
3.4 Ergebnisse zum lcntiviralen Gentransfer in hMSCs 43
3.5 Ergebnis der Leitschienenbesiedelung 47
4 Diskussion 48
4.1 Stammzellmarker und Stammzellmarkierung 48
4.2 Diskussion der verwendeten Zellen 56
4.3 Diskussion der verwendeten Leitschiene 57
4.4 Diskussion der Ergebnisse 59
5 Zusammenfassung 60
6 Anhang 61
6.1 Zusammensetzung der Puffer 61
6.2 Zusammensetzung der Nährmedien 62
7 Literaturverzeichnis 63
Danksa£ung................................. *.........* ......*.**«.......» *»...»»..»».» »« »».»*»71
Lebenslauf 72
3
|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 4
1.1 Grundlagen und bisherige Forschung 4
1.1.1 Stammzellcn 4
1.1.2 Humane mcscnchymale Stammzellcn 5
1.1.3 hMSC und Tissue Engineering in der Therapie von Knochendefekten 7
1.1.4 Genetische Markierung von Zellen 10
1.2 Aufgabenstellung 14
1.2.1 Herstellung eines Lcntiviralcn Expressionssystems 14
1.2.2 Lcntiviralc Transduktion von humanen mcsenchymalcn Stammzcllen mit
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3.2 Ergebnis der Virusherstellung 40
33 Bestimmung der Virustiter 43
3.4 Ergebnisse zum lcntiviralen Gentransfer in hMSCs 43
3.5 Ergebnis der Leitschienenbesiedelung 47
4 Diskussion 48
4.1 Stammzellmarker und Stammzellmarkierung 48
4.2 Diskussion der verwendeten Zellen 56
4.3 Diskussion der verwendeten Leitschiene 57
4.4 Diskussion der Ergebnisse 59
5 Zusammenfassung 60
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6.1 Zusammensetzung der Puffer 61
6.2 Zusammensetzung der Nährmedien 62
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