Identifizierung und funktionelle Charakterisierung von SGK1 als neues Zielgen der Wnt-Signaltransduktion:
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2008
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| adam_text | Titel: Identifizierung und funktionelle Charakterisierung von SGK1 als neues Zielgen der Wnt-Signaltransduk
Autor: Dehner, Manuel
Jahr: 2008
INHALTSVERZEICHNIS
1 Inhaltsverzeichnis
1 INHALTSVERZEICHNIS 3
2 SUMMARY 6
3 ZUSAMMENFASSUNG . 7
4 EINLEITUNG 8
4.1 Der Wnt-Signaltransduktionsweg 8
4.1.1 Klassischer Wnt-Signalweg 8
4.1.2 Rolle des klassischen Wnt-Signalweges in der kolorektalen Karzinogenese 11
4.1.3 Nicht kanonische Wnt-Signalkaskaden 12
4.1.4 Der Wnt-Signalweg in anderen Spezies 12
4.2 SGK1 - Serum und Glucocorticoid induzierbare Kinase 1 13
4.2.1 Proteinkinasen und ihre Regulation 13
4.2.2 Funktion und Regulation von SGK 14
4.3 Die Transkriptionsfaktoren Forkhead Box O (FoxO) 16
4.3.1 Die Fox-Familie 16
4.3.2 Die Gruppe der FoxO-Proteine 17
4.3.3 Regulation von FoxO-Transkriptionsfaktoren 18
4.3.4 Aktivierung von Zielgenen durch FoxO3a 21
5 ZIELSETZUNG 22
6 ERGEBNISSE 23
6.1 Identifikation von SGK1 als neues Zielgen des Wnt-Signalweges 23
6.1.1 Regulation der Expression von SGK 1 durch den Wnt-Signalweg 23
6.1.2 Regulation des SGK 1-Promotors durch den Wnt-Signalweg 28
6.2 Regulation von Transkriptionsfaktoren der FoxO-Familie durch den Wnt-Signalweg 32
6.2.1 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Lokalisation von FoxO3a 32
6.2.2 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die transkriptioneile Aktivität von FoxO3a 36
6.2.3 Regulation der transkriptioneilen Aktivität von FoxO3a durch den Wnt-Signalweg in
HEK293T und LS174T 40
3
INHALTSVERZEICHNIS
6.3 Regulation der Fox03a Aktivität durch den Wnt-Signalweg über SGK1 42
6.4 Analyse der Spezifität von Regulatoren des Wnt-Signalweges in Bezug auf die Regulation der
transkriptionellen Aktivität von FoxO3a 47
6.5 Veränderung der Apoptoserate durch den Wnt-Signalweg 49
6.5.1 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Transkription der FoxO3a-Zielgene Bcl2-interacting
mediator(BIM)undp27KIP1 49
6.5.2 Inhibierung der FoxO3a-induzierten Apoptose durch den Wnt-Signalweg 51
7 DISKUSSION 53
7.1 Neues Zielgen des Wnt-Signalweges: SGK1 53
7.2 Direkte oder indirekte Regulation von SGK1 durch den Wnt-Signalweg 54
7.3 Regulation von Fox03a durch den Wnt-Signalweg über SGK1 55
7.4 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Fox03a-induzierte Apoptose 58
7.5 SGK1 und Tumorigenese 59
7.5.1 Möglicher Einfluss auf die Tumorigenese von SGK1 durch die Regulation von epithelialen
Natriumkanälen (ENaC) 59
7.5.2 Veränderungen des Expressionsprofils von SGK1 im Verlauf der Tumorigenese 60
7.6 Fox-Proteine und Tumorigenese 61
7.7 Der Wnt-Signalweg und Tumorigenese 63
8 MATERIAL UND METHODEN 65
8.1 Material 65
8.1.1 Puffer und Lösungen 65
8.1.2 Weitere Reagenzien und Enzyme 68
8.1.3 Verbrauchsmaterialien 70
8.1.4 Geräte 70
8.1.5 Oligonukleotide 71
8.1.5.1 Oligonukleotide zur Analyse der Expression von Genen 71
8.1.5.2 Oligonukleotide für Klonierungen 71
8.1.5.3 Oligonukleotide für Sequenzierungen 73
8.1.5.4 Small interfering RNA Oligonukleotide 73
8.1.6 Organismen 74
8.1.7 Antikörper 74
4
INHALTSVERZEICHNIS
8.1.8 Vektoren 75
8.2 Methoden 80
8.2.1 Anzucht von Bakterien 80
8.2.2 Herstellung kompetenter Bakterien 80
8.2.3 Transformation von Bakterien 81
8.2.4 Plasmidisolierung aus Bakterien 81
8.2.5 Extraktion von DNA aus TAE-Agarosegelen 81
8.2.6 DNA-Reinigung und Fällung 82
8.2.7 Bestimmung der DNA- bzw. RNA-Konzentration 82
8.2.8 Sequenzierung von DNA-Fragmenten 82
8.2.9 Kultur und Transfektion von Säugerzellen 83
8.2.10 Zählen von Zellen und Anlegen von Dauerkulturen 83
8.2.11 Transiente Transfektion 83
8.2.12 Reporterassays 84
8.2.13 SDS-PAGE und Western Blot Analyse 84
8.2.14 RNA-Isolierung 85
8.2.15 Reverse Transkriptase-PCR (RT-PCR) 85
8.2.16 Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) für Klonierungen 86
8.2.17 Kolonie-PCR 87
8.2.18 DNA-Microarrays und Analyse der Expression von Genen 87
8.2.19 Quantitative Echtzeit-PCR (real time RT-PCR) 88
8.2.20 Immunfluoreszenzfärbung von Zellen 89
8.2.21 Apoptose Messung, TUNEL 89
9 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 91
9.1 Abkürzungen 91
9.2 Aminosäuren 93
9.3 Dimensionen 93
9.4 Einheiten 94
10 ANHANG 95
10.1 Ergebnisse der DNA-Microarray Analyse im HCT116 (RNAi)-System 95
10.2 Ergebnisse der DNA-Microarray Analyse im DLDl-dnTCF4 (-/+dox)-System 96
11 LITERATURVERZEICHNIS 102
5
|
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Titel: Identifizierung und funktionelle Charakterisierung von SGK1 als neues Zielgen der Wnt-Signaltransduk
Autor: Dehner, Manuel
Jahr: 2008
INHALTSVERZEICHNIS
1 Inhaltsverzeichnis
1 INHALTSVERZEICHNIS 3
2 SUMMARY 6
3 ZUSAMMENFASSUNG . 7
4 EINLEITUNG 8
4.1 Der Wnt-Signaltransduktionsweg 8
4.1.1 Klassischer Wnt-Signalweg 8
4.1.2 Rolle des klassischen Wnt-Signalweges in der kolorektalen Karzinogenese 11
4.1.3 Nicht kanonische Wnt-Signalkaskaden 12
4.1.4 Der Wnt-Signalweg in anderen Spezies 12
4.2 SGK1 - Serum und Glucocorticoid induzierbare Kinase 1 13
4.2.1 Proteinkinasen und ihre Regulation 13
4.2.2 Funktion und Regulation von SGK 14
4.3 Die Transkriptionsfaktoren Forkhead Box O (FoxO) 16
4.3.1 Die Fox-Familie 16
4.3.2 Die Gruppe der FoxO-Proteine 17
4.3.3 Regulation von FoxO-Transkriptionsfaktoren 18
4.3.4 Aktivierung von Zielgenen durch FoxO3a 21
5 ZIELSETZUNG 22
6 ERGEBNISSE 23
6.1 Identifikation von SGK1 als neues Zielgen des Wnt-Signalweges 23
6.1.1 Regulation der Expression von SGK 1 durch den Wnt-Signalweg 23
6.1.2 Regulation des SGK 1-Promotors durch den Wnt-Signalweg 28
6.2 Regulation von Transkriptionsfaktoren der FoxO-Familie durch den Wnt-Signalweg 32
6.2.1 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Lokalisation von FoxO3a 32
6.2.2 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die transkriptioneile Aktivität von FoxO3a 36
6.2.3 Regulation der transkriptioneilen Aktivität von FoxO3a durch den Wnt-Signalweg in
HEK293T und LS174T 40
3
INHALTSVERZEICHNIS
6.3 Regulation der Fox03a Aktivität durch den Wnt-Signalweg über SGK1 42
6.4 Analyse der Spezifität von Regulatoren des Wnt-Signalweges in Bezug auf die Regulation der
transkriptionellen Aktivität von FoxO3a 47
6.5 Veränderung der Apoptoserate durch den Wnt-Signalweg 49
6.5.1 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Transkription der FoxO3a-Zielgene Bcl2-interacting
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6.5.2 Inhibierung der FoxO3a-induzierten Apoptose durch den Wnt-Signalweg 51
7 DISKUSSION 53
7.1 Neues Zielgen des Wnt-Signalweges: SGK1 53
7.2 Direkte oder indirekte Regulation von SGK1 durch den Wnt-Signalweg 54
7.3 Regulation von Fox03a durch den Wnt-Signalweg über SGK1 55
7.4 Einfluss des Wnt-Signalweges auf die Fox03a-induzierte Apoptose 58
7.5 SGK1 und Tumorigenese 59
7.5.1 Möglicher Einfluss auf die Tumorigenese von SGK1 durch die Regulation von epithelialen
Natriumkanälen (ENaC) 59
7.5.2 Veränderungen des Expressionsprofils von SGK1 im Verlauf der Tumorigenese 60
7.6 Fox-Proteine und Tumorigenese 61
7.7 Der Wnt-Signalweg und Tumorigenese 63
8 MATERIAL UND METHODEN 65
8.1 Material 65
8.1.1 Puffer und Lösungen 65
8.1.2 Weitere Reagenzien und Enzyme 68
8.1.3 Verbrauchsmaterialien 70
8.1.4 Geräte 70
8.1.5 Oligonukleotide 71
8.1.5.1 Oligonukleotide zur Analyse der Expression von Genen 71
8.1.5.2 Oligonukleotide für Klonierungen 71
8.1.5.3 Oligonukleotide für Sequenzierungen 73
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8.1.7 Antikörper 74
4
INHALTSVERZEICHNIS
8.1.8 Vektoren 75
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8.2.1 Anzucht von Bakterien 80
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8.2.6 DNA-Reinigung und Fällung 82
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8.2.21 Apoptose Messung, TUNEL 89
9 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 91
9.1 Abkürzungen 91
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| spelling | Dehner, Manuel Verfasser aut Identifizierung und funktionelle Charakterisierung von SGK1 als neues Zielgen der Wnt-Signaltransduktion von Manuel Dehner 2008 113 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2008 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek Signaltransduktion (DE-588)4318717-1 gnd rswk-swf Wnt-Proteine (DE-588)7515809-7 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Wnt-Proteine (DE-588)7515809-7 s Signaltransduktion (DE-588)4318717-1 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-9213 https://open.fau.de/handle/openfau/628 Verlag kostenfrei Volltext http://d-nb.info/989071545/34 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-9213 Verlag kostenfrei Volltext HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=016500573&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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