Interaktion muriner regulatorischer T-Zellen mit Dendritischen Zellen:
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| adam_text | Titel: Interaktion muriner regulatorischer T-Zellen mit dendritischen Zellen
Autor: Haenig, Jens
Jahr: 2008
-Inhaltsverzeichnis- J
I
1 Einleitung -1 - j
1.1 Das Immunsystem -1 -
1.1.1 Das angeborene Immunsystem -1 -
1.1.2 Dasadaptive Immunsystem. -3-
1.2 Dendritische Zellen -6-
1.2.1 Antigenpräsentation -7-
1.2.2 Myeloische Dendritische Zellen -8 -
1.2.3 Plasmazytoide Dendritische Zellen - 9 -
1.2.4 Reifungsstadien Dendritischer Zellen -10-
1.2.4.1 Unreife Dendritische Zellen -10-
1.2.4.2 Semireife Dendritische Zellen -11 -
1.2.4.3 Vollreife Dendritische Zellen -13-
1.3 Aktivierung der Effektor T-Zellen -13 -
1.3.1 T-Helfer 1 Antwort -17-
1.3.2 T-Helfer 2 Antwort -17-
1.3.3 T-Helfer-17 Antwort -19-
1.4 Toleranz -21 -
1.4.1 Zentrale Toleranz -21 -
1.4.2 Periphere Toleranz -23-
1.4.2.1 Anergie - 24 - j
1.4.2.2 Ignoranz -25- i
1.4.2.3 Immundeviation -25 - ¦
1.4.2.4 Deletion -26-
1.4.2.5 Regulation/Suppression -27-
1.4.3 Autoimmunreaktionen -27 -
1.5 Regulatorische T-Zellen -29-
1.5.1 Th3/Tr1: Adaptive regulatorische T-Zellen -29 -
1-5.2 Natürlich vorkommende regulatorische T-Zellen -31 -
1-5.2.1 Bildung der regulatorischen T-Zellen -32 -
1.5.2.2 Eigenschaften -34 -
1.5.2.3 Dendritische Zellen und regulatorische T-Zellen - 36 -
1-5.2.4 Regulatorische T-Zellen in Allergien und
Autoimmunerkrankungen - 37 -
1.5.2.5 Mechanismen der Regulation -38-
1.5.2.6 Regulatorische T-Zellen in DO11.10 Mäusen -43-
2 Problemstellung - 44 -
2.1 Welche Art von DZ wird für Aktivierung und Proliferation der
regulatorischen T-Zellen benötigt? - 44 -
2.2 Welches sind die Mechanismen der Regulation in vivo? - 45 -
2.1 Welche Funktionen haben regulatorische T-Zellen im Verlauf von
Infektionen? -45-
3 Material und Methoden - 49 -
3.1 Standardlösungen, Puffer und Medien - 49 -
3.2 Spezielle Reagenzien - 51 -
3.2.1 Stimulantien und Zytokine - 51 -
3.2.2 Oligonukleotide -51 -
3.2.3 Antigene -52-
3.3 Antikörper -52 -
3.4 Verwendete Mausstämme -55-
3.5 Zellkulturmethoden - 56 -
3.5.1 Allgemeine Arbeitstechniken mit Zellen -56-
3.5.1.1 Handhabung der Zellen - 56 -
3.5.1.2 Einfrieren und Auftauen von Zellen - 56 -
3.5.1.3 Zellzählung und Vitalitätsbestimmung - 57 -
3.5.1.4 Gewinnung von murinem GM-CSF Kulturüberstand - 57 -
3.5.2 Spezielle Arbeitstechniken mit Zellen - 58 -
3.5.2.1 Knochenmarkspräparation - 58 -
3.5.2.2 Generierung Dendritischer Zellen - 58 -
3.5.2.3 Generierung von plasmazytoiden Dendritischen Zellen... - 59 -
3.5.2.4 Lymphknoten- und Milzpräparation als Quelle für T-Zellen- 59 -
3.5.2.5 Separation von T-Zell Unterarten - 60 -
3.5.2.6 Isolierung der T-Zellen mit Dynal Magnetkugeln - 60 -
3.5.2.7 Isolierung der T-Zellen mit Stemceil Magnetkugeln - 61 -
3.5.2.8 Isolierung der CD25+ T-Zellen - 62 -
3.5.2.9 Zellmarkierung mit Fluoreszenzfarbstoffen - 63 -
3.6 Immunologische Methoden - 64 -
3 611 T-Zell-Proiiferationstest durch 3H-Thymidineinbau - 64 -
.4-
3.6.1.2 Fluoreszenzaktivierte Durchflusszytometrie (FACS) - 65 -
3.6.1.3 Extrazelluläre FACS-Färbung -65-
3.6.1.4 Intrazelluläre FACS-Färbung -66 -
3.6.1.5 Intrazelluläre Färbung gegen Foxp3 - 66 -
3.6.1.6 Apoptose-Färbung -67 -
3.7 Mikroskopische Methoden -68-
3.7.1 Präparation lymphatischer Organe -68-
3.7.2 Immunfluoreszenzfärbung von Gefrierschnitten - 68 -
4 Ergebnisse - 70 -
4.1 Markierung von DZ und CD4+ T-Zellen mit drei unterschiedlichen
Fluoreszenzfarbstoffen - 70 -
4.2 Fluoreszenzmikroskopische Aufnahmen der Milz - 70 -
4.3 Charakterisierung, Isolation und Sortierung von T-Zellen mit MACS-
Magnetkugeln - 73 -
4.4 Fluoreszenzmarkierung der Treg beeinflusst deren suppressive
Eigenschaften nicht - 76 -
4.5 In vitro Kultivierung von TNFa- und LPS-stimulierten DZ resultiert in der
Aktivierung von T^ und Teff -76- ,
4.6 Generierung von pDZ durch in vitro Stimulation mit Flt3-L - 80 - |
4.7 Reifung von plasmazytoiden DZ und myeloischen DZ durch CpG und LPS
über Nacht -82 -
4.8 CD25+ T-Zellen werden durch reife pDZ und mDZ schwächer aktiviert als
CD25 T-Zellen -83-
4.9 Unreife pDZ und mDZ sind nicht in der Lage T-Zellen zu aktivieren - 86 -
4.10 Sich teilende T^ und Teffl die durch pDZ und mDZ stimuliert wurden
behalten ihren Foxp3+ oder Foxp3 Phänotyp - 88 -
4.11 Knochenmarks-DZ zeigen nach Behandlung mit verschiedenen Stimuli
über Nacht einen reifen Phänotyp - 88 -
4.12 Intravenös injizierte T-Zellen wandern in die T-Zell Areale der Milz
zusammen mit zuvor injizierten antigentragenden DZ und interagieren dort
mit diesen -91 -
4.13 Intravenös injizierte T-Zellen und Dendritische Zellen interagieren in der
Milz -92-
4.14 Die durch T^ vermittelte Suppression ist abhängig von deren
Voraktivierung in vivo _ 94 .
-5-
4.15 Treg kontrollieren die maximale T-Zellexpansion und begrenzen die T-
Zellantwort -96~
4.16 Voraktivierte Treg verhindern die Bildung von Zellhaufen und individuellen
Kontakten zwischen DZ und T-Zellen sowie zwischen den T-Zellen
untereinander -98 -
4.17 Tr6g bewirken einen Verlust von kostimulatorischen Oberflächenproteinen
auf LPS- und TNFct- aber nicht auf LPS/CD40-gereiften DZ - 1rj1 -
4.18 Der Verlust der DZ-Oberflächenproteine wird nicht durch Apoptose
verursacht - 1f 4 -
4.19 Lizensierung der DZ durch CD40 verhindert die Suppression der Teff durch
Treg -104-
5 Diskussion -107 *
5.1 Reife DZ werden für die Aktivierung derTreg benötigt -10? -
5.2 Plasmazytoide und myeloische Dendritische Zellen haben vergleichbare
stimulatorische Fähigkeiten gegenüber Treg - 1t 8-
5.3 Treg kontrollieren die Expansion von Teirnach deren Aktivierung - 1ö*9 -
5.4 Die Antigen-Avidität der regulatorischen T-Zellen ist ein wichtiger Faktor,
der zwischen Immunität und Toleranz entscheiden kann -111 -
5.5 Treg vermitteln ihre regulatorischen Fähigkeiten partiell über die DZ. Durch
CD40-Ligation kann dieser Effekt aufgehoben werden -114 -
5.6 Hypothese: Treg erfüllen unterschiedliche Funktionen in Abhängigkeit der
Immunreaktion gegen Selbst- oder Fremdpeptide -117 -
6 Zusammenfassung -120 -
7 Ausblick -122 -
8 Veröffentlichungen -124 -
8.1 Wissenschaftliche Originalveröffentlichungen -124 .
8.2 Posterpräsentationen -124-
8.3 Vorträge -125-
9 Literaturverzeichnis » -.... -.. -126 -
10 Abkürzungsverzeichnis -141 -
11 Lebenslauf • -1*4 -
-6-
|
| adam_txt |
Titel: Interaktion muriner regulatorischer T-Zellen mit dendritischen Zellen
Autor: Haenig, Jens
Jahr: 2008
-Inhaltsverzeichnis- J
I
1 Einleitung -1 - j
1.1 Das Immunsystem -1 -
1.1.1 Das angeborene Immunsystem -1 -
1.1.2 Dasadaptive Immunsystem. -3-
1.2 Dendritische Zellen -6-
1.2.1 Antigenpräsentation -7-
1.2.2 Myeloische Dendritische Zellen -8 -
1.2.3 Plasmazytoide Dendritische Zellen - 9 -
1.2.4 Reifungsstadien Dendritischer Zellen -10-
1.2.4.1 Unreife Dendritische Zellen -10-
1.2.4.2 Semireife Dendritische Zellen -11 -
1.2.4.3 Vollreife Dendritische Zellen -13-
1.3 Aktivierung der Effektor T-Zellen -13 -
1.3.1 T-Helfer 1 Antwort -17-
1.3.2 T-Helfer 2 Antwort -17-
1.3.3 T-Helfer-17 Antwort -19-
1.4 Toleranz -21 -
1.4.1 Zentrale Toleranz -21 -
1.4.2 Periphere Toleranz -23-
1.4.2.1 Anergie - 24 - j
1.4.2.2 Ignoranz -25- i
1.4.2.3 Immundeviation -25 - ¦
1.4.2.4 Deletion -26-
1.4.2.5 Regulation/Suppression -27-
1.4.3 Autoimmunreaktionen -27 -
1.5 Regulatorische T-Zellen -29-
1.5.1 Th3/Tr1: Adaptive regulatorische T-Zellen -29 -
1-5.2 Natürlich vorkommende regulatorische T-Zellen -31 -
1-5.2.1 Bildung der regulatorischen T-Zellen -32 -
1.5.2.2 Eigenschaften -34 -
1.5.2.3 Dendritische Zellen und regulatorische T-Zellen - 36 -
1-5.2.4 Regulatorische T-Zellen in Allergien und
Autoimmunerkrankungen - 37 -
1.5.2.5 Mechanismen der Regulation -38-
1.5.2.6 Regulatorische T-Zellen in DO11.10 Mäusen -43-
2 Problemstellung - 44 -
2.1 Welche Art von DZ wird für Aktivierung und Proliferation der
regulatorischen T-Zellen benötigt? - 44 -
2.2 Welches sind die Mechanismen der Regulation in vivo? - 45 -
2.1 Welche Funktionen haben regulatorische T-Zellen im Verlauf von
Infektionen? -45-
3 Material und Methoden - 49 -
3.1 Standardlösungen, Puffer und Medien - 49 -
3.2 Spezielle Reagenzien - 51 -
3.2.1 Stimulantien und Zytokine - 51 -
3.2.2 Oligonukleotide -51 -
3.2.3 Antigene -52-
3.3 Antikörper -52 -
3.4 Verwendete Mausstämme -55-
3.5 Zellkulturmethoden - 56 -
3.5.1 Allgemeine Arbeitstechniken mit Zellen -56-
3.5.1.1 Handhabung der Zellen - 56 -
3.5.1.2 Einfrieren und Auftauen von Zellen - 56 -
3.5.1.3 Zellzählung und Vitalitätsbestimmung - 57 -
3.5.1.4 Gewinnung von murinem GM-CSF Kulturüberstand - 57 -
3.5.2 Spezielle Arbeitstechniken mit Zellen - 58 -
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3.5.2.2 Generierung Dendritischer Zellen - 58 -
3.5.2.3 Generierung von plasmazytoiden Dendritischen Zellen. - 59 -
3.5.2.4 Lymphknoten- und Milzpräparation als Quelle für T-Zellen- 59 -
3.5.2.5 Separation von T-Zell Unterarten - 60 -
3.5.2.6 Isolierung der T-Zellen mit Dynal Magnetkugeln - 60 -
3.5.2.7 Isolierung der T-Zellen mit Stemceil Magnetkugeln - 61 -
3.5.2.8 Isolierung der CD25+ T-Zellen - 62 -
3.5.2.9 Zellmarkierung mit Fluoreszenzfarbstoffen - 63 -
3.6 Immunologische Methoden - 64 -
3 611 T-Zell-Proiiferationstest durch 3H-Thymidineinbau - 64 -
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3.6.1.2 Fluoreszenzaktivierte Durchflusszytometrie (FACS) - 65 -
3.6.1.3 Extrazelluläre FACS-Färbung -65-
3.6.1.4 Intrazelluläre FACS-Färbung -66 -
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3.6.1.6 Apoptose-Färbung -67 -
3.7 Mikroskopische Methoden -68-
3.7.1 Präparation lymphatischer Organe -68-
3.7.2 Immunfluoreszenzfärbung von Gefrierschnitten - 68 -
4 Ergebnisse - 70 -
4.1 Markierung von DZ und CD4+ T-Zellen mit drei unterschiedlichen
Fluoreszenzfarbstoffen - 70 -
4.2 Fluoreszenzmikroskopische Aufnahmen der Milz - 70 -
4.3 Charakterisierung, Isolation und Sortierung von T-Zellen mit MACS-
Magnetkugeln - 73 -
4.4 Fluoreszenzmarkierung der Treg beeinflusst deren suppressive
Eigenschaften nicht - 76 -
4.5 In vitro Kultivierung von TNFa- und LPS-stimulierten DZ resultiert in der
Aktivierung von T^ und Teff -76- ,
4.6 Generierung von pDZ durch in vitro Stimulation mit Flt3-L - 80 - |
4.7 Reifung von plasmazytoiden DZ und myeloischen DZ durch CpG und LPS
über Nacht -82 -
4.8 CD25+ T-Zellen werden durch reife pDZ und mDZ schwächer aktiviert als
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4.9 Unreife pDZ und mDZ sind nicht in der Lage T-Zellen zu aktivieren - 86 -
4.10 Sich teilende T^ und Teffl die durch pDZ und mDZ stimuliert wurden
behalten ihren Foxp3+ oder Foxp3' Phänotyp - 88 -
4.11 Knochenmarks-DZ zeigen nach Behandlung mit verschiedenen Stimuli
über Nacht einen reifen Phänotyp - 88 -
4.12 Intravenös injizierte T-Zellen wandern in die T-Zell Areale der Milz
zusammen mit zuvor injizierten antigentragenden DZ und interagieren dort
mit diesen -91 -
4.13 Intravenös injizierte T-Zellen und Dendritische Zellen interagieren in der
Milz -92-
4.14 Die durch T^ vermittelte Suppression ist abhängig von deren
Voraktivierung in vivo _ 94 .
-5-
4.15 Treg kontrollieren die maximale T-Zellexpansion und begrenzen die T-
Zellantwort -96~
4.16 Voraktivierte Treg verhindern die Bildung von Zellhaufen und individuellen
Kontakten zwischen DZ und T-Zellen sowie zwischen den T-Zellen
untereinander -98 -
4.17 Tr6g bewirken einen Verlust von kostimulatorischen Oberflächenproteinen
auf LPS- und TNFct- aber nicht auf LPS/CD40-gereiften DZ - 1rj1 -
4.18 Der Verlust der DZ-Oberflächenproteine wird nicht durch Apoptose
verursacht - 1f 4 -
4.19 Lizensierung der DZ durch CD40 verhindert die Suppression der Teff durch
Treg -104-
5 Diskussion -107 *
5.1 Reife DZ werden für die Aktivierung derTreg benötigt -10? -
5.2 Plasmazytoide und myeloische Dendritische Zellen haben vergleichbare
stimulatorische Fähigkeiten gegenüber Treg - 1t 8-
5.3 Treg kontrollieren die Expansion von Teirnach deren Aktivierung - 1ö*9 -
5.4 Die Antigen-Avidität der regulatorischen T-Zellen ist ein wichtiger Faktor,
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5.5 Treg vermitteln ihre regulatorischen Fähigkeiten partiell über die DZ. Durch
CD40-Ligation kann dieser Effekt aufgehoben werden -114 -
5.6 Hypothese: Treg erfüllen unterschiedliche Funktionen in Abhängigkeit der
Immunreaktion gegen Selbst- oder Fremdpeptide -117 -
6 Zusammenfassung -120 -
7 Ausblick -122 -
8 Veröffentlichungen -124 -
8.1 Wissenschaftliche Originalveröffentlichungen -124 .
8.2 Posterpräsentationen -124-
8.3 Vorträge -125-
9 Literaturverzeichnis » -. -. -126 -
10 Abkürzungsverzeichnis -141 -
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