Immunhistochemischer Nachweis von Stickstoffmonoxidmetaboliten und Sauerstoffradikalen während der embryonalen Differenzierung der Cochlea von Mäusen:
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2007
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 Einführung 1
1.2 Das Innenohr 2
1.2.1 Anatomie des Innenohrs 2
1.2.2 Das Mausmodell 3
1.2.3 Entwicklung der humanen Cochlea 5
1.2.4 Entwicklung der Cochlea bei der Maus 6
1.3 Stickstoffmonoxid (NO) 12
1.3.1 Allgemeines/Historisches über NO 12
1.3.2 Stickstoffmonoxid-Sythasen (NOS) 13
1.3.2 a)NOS II 13
1.3.2 b) Konstitutive NOS-Formen 14
1.3.3 Indirekte Rolle von NO während der Signaltransduktion via sGC 14
1.3.4 Direkte Wirkungen von NO 15
1.3.4 a) Nitrierung 15
1.3.4 b) Nitrosilierung 16
1.3.5 Physiologische Rollen von Stickstoffmonoxid im Innenohr 16
1.4 8-Hydroxiguanosin (8-OG) 17
1.4.1 Oxidativer Stress 17
1.4.2 8-Hydroxiguanosin 18
1.4.3 Physiologische Rollen reaktiver Sauerstoffspezies 18
1.5 Fragestellung 19
2 MATERIAL UND METHODEN 21
2.1 Versuchstiere 21
2.2 Vorbehandlung der Proben 22
2.2.1 Fixierung nach Bouin 22
2.2.2 Paraffineinbettung von Hand 22
2.2.2 a) Entwässerung 22
2.2.2 b) Einbettung 23
2.4 Vorbereitungen für Färbungen 23
2.4.1 Erstellung der Schnittreihen 23
2.4.2 Entparaffinierung und Rehydratation 23
2.5 Hämatoxilin-Eosin-Färbung 24
2.5.1 Methode 24
2.5.2 Durchführung der Hämatoxilin-Eosin-Färbung 24
2.6 Immunhistochemische Färbung 25
2.6.1 Methode 25
2.6.2 Verwendete Antikörper 27
2.6.3 Durchführung der immunhistochemischen Färbung 28
2.6.4 Weitere Aufarbeitung 30
2.7 Auswertung 30
2.7.1 Lichtmikroskopische Auswertung 30
2.7.2 Statistische Auswertung 31
3 ERGEBNISSE 33
3.0 Anfärbungen 33
3.0.1 Anfärbung mit Anti-Nitrotyrosin 33
3.0.2 Anfärbung mit Anti-8-Hydroxiguanosin 34
3.1 E 14,5 36
3.1.1 E 14,5: Anti-Nitrotyrosin 36
3.1.2 E 14,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 38
3.2 E 16,5 40
3.2.1 E 16,5: Anti-Nitrotyrosin 40
3.2.2 E 16,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 42
3.3 E 18,5 44
3.3.1 E 18,5: Anti-Nitrotyrosin 44
3.3.2 E 18,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 46
3.4 E 20,5 48
3.4.1 E 20,5: Anti-Nitrotyrosin 48
3.4.2 E 20,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 50
3.5 P 3 52
3.5.1 P 3: Anti-Nitrotyrosin 52
3.5.2 P 3: Anti-8-Hydroxiguanosin 54
4 DISKUSSION 57
4.1 Peroxinitrit und NO 58
4.2 8-OG und Oxidativer Stress 60
4.3 Gefundene Anfärbungen 61
4.3.1 Anfärbung der Reissner-Membran 61
4.3.2 Anfärbung der Stria vascularis 62
4.3.3 Anfärbung des Spiralligaments 62
4.3.4 Anfärbung der Haarzellen 63
4.3.5 Anfärbung des Spiralganglions 64
4.3.6 Anfärbung der Deiter- und Stützzellen 64
4.4 Ergebnis der Arbeit 65
4.5 Problematik 66
4.5.1 Problematik des Mausmodells 66
4.5.2 Problematik der Methode 66
4.6 Ausblick 67
5 ZUSAMMENFASSUNG 69
6 LITERATURVERZEICHNIS 71
7 ANHANG 85
Statistische Auswertung - Werte und Boxplots 85
A Anti-Nitrotyrosin 85
B Anti-8-Hydroxiguanosin 89
8 ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS 93
9 LEBENSLAUF 95
8 ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS
Seite
Abb. 1.1: Schematische Darstellung des Innenohrs * 1
Abb. 1.2.1: Das Corti-Organ 3
Abb. 1.2.4A: Embryo der Maus (E 14,5) 6
Abb. 1.2.4B: Schematische Darstellung des Ductus cochlearis ° 10
Tab. 1: Gegenüberstellung der in dieser Arbeit begutachteten Strukturen ... 11
Abb. 1.3.4: Bildung von NO2 aus NO 16
Abb. 1.4.2: 8-Hydroxi-2 -deoxi-Guanosin 18
Abb. 2.1: Schema zur Darstellung der Streptavidin-Biotin-Methode 25
Tab. 2: Verzeichnis der verwendeten Substanzen 31
Abb. 3.0.1: Anfärbung der DC, OHC und IHC; Anti-Nitrotyrosin 33
Abb. 3.0.2: Anfärbung der DC, OHC und IHC; Anti-8-Hydroxiguanosin 35
Abb. 3.1: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 14,5 35
Abb. 3.1.1A: Übersicht der Cochlea im Stadium E 14,5; Anti-Nitrotyrosin 37
Abb. 3.1.1B: Vergrößerung der mittleren Windung, E 14,5; Anti-Nitrotyrosin 37
Abb. 3.1.2A: Übersichtsaufnahme E 14,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 39
Abb. 3.1.2B: Vergrößerung der mittleren Windung E 14,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 39
Abb. 3.2: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 16,5 39
Abb. 3.2.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 16,5; Anti-Nitrotyrosin 41
Abb. 3.2.2A: Obersichtsaufnahme E 16,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 43
Abb. 3.2.2B: Vergrößerung der mittleren Windung, E 16,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 43
Abb. 3.3: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 18,5 43
Abb. 3.3.1A: Obersichtsaufnahme E 18,5; Anti-Nitrotyrosin 45
Abb. 3.3.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 18,5; Anti-Nitrotyrosin 45
Abb. 3.3.2A: Obersicht E 18,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 47
Abb. 3.3.2B: Vergrößerung der mittleren Windung E 18,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 47
Abb. 3.4: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 20,5 47
Abb. 3.4.1A: Obersicht E 20,5; Anti-Nitrotyrosin 49
Abb. 3.4.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 20,5; Anti-Nitrotyrosin 49
Abb. 3.4.2A: Obersicht E 20,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 51
Abb. 3.4.2B: Vergrößerung E 20,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 51
Abb. 3.5: HE-Schnitt eines postnatalen Tiers im Stadium P 3 51
Abb. 3.5.1A: Obersicht P 3; Anti-Nitrotyrosin 53
Abb. 3.5.1B: Vergrößerung der mittleren Windung P 3, Anti-Nitrotyrosin 53
Abb. 3.5.2A: Obersicht P 3; Anti-8-Hydroxiguanosin 55
Abb. 3.5.2.B: Vergrößerung der mittleren Windung P 3; Anti-8-Hydroxiguanosin 55
Tab. 3A: Semiquantitative Auswertung von Anti-Nitrotyrosin 55
Tab. 3B: Semiquantitative Auswertung von Anti-8-Hydroxiguanosin 55
modifiziert nach Microsoft ® Encarta « Enzyklopädie 2004
modifiziert nach Naumann et al.: ORL in Klinik und Praxis, Band I Ohr. Thieme Stuttgart, 1994
c modifiziert nach A.H. Gitter Anatomie der Cochlea. Department of Medical Engineering, Jena University of Applied Sciences.
www.ftvjena.de/~gitter/tut_hoer.html
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 Einführung 1
1.2 Das Innenohr 2
1.2.1 Anatomie des Innenohrs 2
1.2.2 Das Mausmodell 3
1.2.3 Entwicklung der humanen Cochlea 5
1.2.4 Entwicklung der Cochlea bei der Maus 6
1.3 Stickstoffmonoxid (NO) 12
1.3.1 Allgemeines/Historisches über NO 12
1.3.2 Stickstoffmonoxid-Sythasen (NOS) 13
1.3.2 a)NOS II 13
1.3.2 b) Konstitutive NOS-Formen 14
1.3.3 Indirekte Rolle von NO während der Signaltransduktion via sGC 14
1.3.4 Direkte Wirkungen von NO 15
1.3.4 a) Nitrierung 15
1.3.4 b) Nitrosilierung 16
1.3.5 Physiologische Rollen von Stickstoffmonoxid im Innenohr 16
1.4 8-Hydroxiguanosin (8-OG) 17
1.4.1 Oxidativer Stress 17
1.4.2 8-Hydroxiguanosin 18
1.4.3 Physiologische Rollen reaktiver Sauerstoffspezies 18
1.5 Fragestellung 19
2 MATERIAL UND METHODEN 21
2.1 Versuchstiere 21
2.2 Vorbehandlung der Proben 22
2.2.1 Fixierung nach Bouin 22
2.2.2 Paraffineinbettung von Hand 22
2.2.2 a) Entwässerung 22
2.2.2 b) Einbettung 23
2.4 Vorbereitungen für Färbungen 23
2.4.1 Erstellung der Schnittreihen 23
2.4.2 Entparaffinierung und Rehydratation 23
2.5 Hämatoxilin-Eosin-Färbung 24
2.5.1 Methode 24
2.5.2 Durchführung der Hämatoxilin-Eosin-Färbung 24
2.6 Immunhistochemische Färbung 25
2.6.1 Methode 25
2.6.2 Verwendete Antikörper 27
2.6.3 Durchführung der immunhistochemischen Färbung 28
2.6.4 Weitere Aufarbeitung 30
2.7 Auswertung 30
2.7.1 Lichtmikroskopische Auswertung 30
2.7.2 Statistische Auswertung 31
3 ERGEBNISSE 33
3.0 Anfärbungen 33
3.0.1 Anfärbung mit Anti-Nitrotyrosin 33
3.0.2 Anfärbung mit Anti-8-Hydroxiguanosin 34
3.1 E 14,5 36
3.1.1 E 14,5: Anti-Nitrotyrosin 36
3.1.2 E 14,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 38
3.2 E 16,5 40
3.2.1 E 16,5: Anti-Nitrotyrosin 40
3.2.2 E 16,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 42
3.3 E 18,5 44
3.3.1 E 18,5: Anti-Nitrotyrosin 44
3.3.2 E 18,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 46
3.4 E 20,5 48
3.4.1 E 20,5: Anti-Nitrotyrosin 48
3.4.2 E 20,5: Anti-8-Hydroxiguanosin 50
3.5 P 3 52
3.5.1 P 3: Anti-Nitrotyrosin 52
3.5.2 P 3: Anti-8-Hydroxiguanosin 54
4 DISKUSSION 57
4.1 Peroxinitrit und NO 58
4.2 8-OG und Oxidativer Stress 60
4.3 Gefundene Anfärbungen 61
4.3.1 Anfärbung der Reissner-Membran 61
4.3.2 Anfärbung der Stria vascularis 62
4.3.3 Anfärbung des Spiralligaments 62
4.3.4 Anfärbung der Haarzellen 63
4.3.5 Anfärbung des Spiralganglions 64
4.3.6 Anfärbung der Deiter- und Stützzellen 64
4.4 Ergebnis der Arbeit 65
4.5 Problematik 66
4.5.1 Problematik des Mausmodells 66
4.5.2 Problematik der Methode 66
4.6 Ausblick 67
5 ZUSAMMENFASSUNG 69
6 LITERATURVERZEICHNIS 71
7 ANHANG 85
Statistische Auswertung - Werte und Boxplots 85
A Anti-Nitrotyrosin 85
B Anti-8-Hydroxiguanosin 89
8 ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS 93
9 LEBENSLAUF 95
8 ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS
Seite
Abb. 1.1: Schematische Darstellung des Innenohrs * 1
Abb. 1.2.1: Das Corti-Organ" 3
Abb. 1.2.4A: Embryo der Maus (E 14,5) 6
Abb. 1.2.4B: Schematische Darstellung des Ductus cochlearis ° 10
Tab. 1: Gegenüberstellung der in dieser Arbeit begutachteten Strukturen . 11
Abb. 1.3.4: Bildung von NO2 aus NO 16
Abb. 1.4.2: 8-Hydroxi-2'-deoxi-Guanosin 18
Abb. 2.1: Schema zur Darstellung der Streptavidin-Biotin-Methode 25
Tab. 2: Verzeichnis der verwendeten Substanzen 31
Abb. 3.0.1: Anfärbung der DC, OHC und IHC; Anti-Nitrotyrosin 33
Abb. 3.0.2: Anfärbung der DC, OHC und IHC; Anti-8-Hydroxiguanosin 35
Abb. 3.1: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 14,5 35
Abb. 3.1.1A: Übersicht der Cochlea im Stadium E 14,5; Anti-Nitrotyrosin 37
Abb. 3.1.1B: Vergrößerung der mittleren Windung, E 14,5; Anti-Nitrotyrosin 37
Abb. 3.1.2A: Übersichtsaufnahme E 14,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 39
Abb. 3.1.2B: Vergrößerung der mittleren Windung E 14,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 39
Abb. 3.2: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 16,5 39
Abb. 3.2.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 16,5; Anti-Nitrotyrosin 41
Abb. 3.2.2A: Obersichtsaufnahme E 16,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 43
Abb. 3.2.2B: Vergrößerung der mittleren Windung, E 16,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 43
Abb. 3.3: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 18,5 43
Abb. 3.3.1A: Obersichtsaufnahme E 18,5; Anti-Nitrotyrosin 45
Abb. 3.3.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 18,5; Anti-Nitrotyrosin 45
Abb. 3.3.2A: Obersicht E 18,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 47
Abb. 3.3.2B: Vergrößerung der mittleren Windung E 18,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 47
Abb. 3.4: HE-Schnitt eines Embryos im Stadium E 20,5 47
Abb. 3.4.1A: Obersicht E 20,5; Anti-Nitrotyrosin 49
Abb. 3.4.1B: Vergrößerung der mittleren Windung E 20,5; Anti-Nitrotyrosin 49
Abb. 3.4.2A: Obersicht E 20,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 51
Abb. 3.4.2B: Vergrößerung E 20,5; Anti-8-Hydroxiguanosin 51
Abb. 3.5: HE-Schnitt eines postnatalen Tiers im Stadium P 3 51
Abb. 3.5.1A: Obersicht P 3; Anti-Nitrotyrosin 53
Abb. 3.5.1B: Vergrößerung der mittleren Windung P 3, Anti-Nitrotyrosin 53
Abb. 3.5.2A: Obersicht P 3; Anti-8-Hydroxiguanosin 55
Abb. 3.5.2.B: Vergrößerung der mittleren Windung P 3; Anti-8-Hydroxiguanosin 55
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Tab. 3B: Semiquantitative Auswertung von Anti-8-Hydroxiguanosin 55
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| spelling | Hüwel, Julia 1980- Verfasser (DE-588)134067983 aut Immunhistochemischer Nachweis von Stickstoffmonoxidmetaboliten und Sauerstoffradikalen während der embryonalen Differenzierung der Cochlea von Mäusen vorgelegt von Julia Hüvel 2007 95 S. Ill., graph. Darst. 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Köln, Univ., Diss., 2007 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=016430182&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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