Differenzielle Genexpression der extrazellulären Matrix bei Aortenerkrankungen: Stellenwert der Matrixmetalloproteinasen (MMP) MMP -1, -2. -3 und -9 jeweils mRNA und immunhistochemische Untersuchungen
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis 3
Abbildungsverzeichnis 5
Tabellenverzeichnis 6
Abkürzungsverzeichnis 7
1 Einleitung 8
1.1 Aortenerkrankungen 8
1.1.1 Aneurysma der Aorta ascendens 8
1.1.2 Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation 10
1.1.3 Aortenklappeninsuffizienz 10
1.1.4 Aortendissektion 11
1.1.5 Aortenisthmusstenose 13
1.2 Regulation der vaskulären Extrazellulärmatrix: remodeling 13
1.3 Matrixmetalloproteinasen (MMP) 14
1.4 Bedeutung der MMP bei Aortenerkrankungen 17
1.5 Ziel der Studie 19
1.6 Ethikvotum 19
2 Material und Methoden 20
2.1 Patienten und Proben 20
2.2 Analyse der mRNA-Expression 24
INHALTSVERZEICHNIS 4
2.2.1 RNA-Präparation 24
2.2.2 Quantitative PCR - LightCycler 25
2.2.3 Datenanalyse 28
2.3 Analyse auf der Proteinebene 29
2.3.1 Immunhistochemie 29
2.3.2 Datenanalyse 34
3 Ergebnisse 35
3.1 RNA-Analyse 35
3.1.1 RNA-Präparation aus Aortengewebeproben 35
3.1.2 Realtime-PCR 35
3.2 Immunhistochemie 43
3.3 Korrelationsanalyse 46
4 Diskussion 47
4.1 Aneurysma der Aorta ascendens 47
4.2 Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation 49
4.3 Aortenklappeninsumzienz 50
4.4 Aortendissektion 51
4.5 Aortenisthmusstenose 53
4.6 Ausblick 56
5 Zusammenfassung 58
Literaturverzeichnis 62
A Anhang 70
Protokolle und Material für die molekularbiologischen Untersuchungen .... 70
Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 74
Lebenslauf 75
Danksagung 76
Abbildungsverzeichnis
1.1 DeBakey Klassifikation 12
1.2 Struktur der Matrixmetalloproteinasen 16
1.3 Aktivitätsregulierung von MMP 17
2.1 Antigennachweis 30
2.2 Immunhistochemie: Färbegrad 0 und 1 34
2.3 Immunhistochemie: Färbegrad 2 und 3 34
3.1 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenaneurysma . 36
3.2 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenstenose mit
poststenostischer Dilatation 37
3.3 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenklappenin¬
suffizienz 38
3.4 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortendissektion . 39
3.5 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenisthmusstenose 40
3.6 Relative Genexpression MMP/18S rRNA nach Genen geordnet 41
3.7 Relative Genexpression MMP/18S rRNA nach Krankheitsgruppen geordnet 42
3.8 Immunhistochemie: Proteinexpression 45
Tabellenverzeichnis
2.1 Patientenpopulation 23
2.2 Annealing Temperatur 26
2.3 Primersequenzen 27
2.4 Programm zur Paraffinfbderung der Gewebeschnitte 31
2.5 Reagenzien für die immunhistochemische Untersuchung 32
3.1 MMP-Abundanz bei Aorta-ascendens-Aneurysma 36
3.2 MMP-Abundanz bei Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation ... 37
3.3 MMP-Abundanz bei Aortenklappeninsuffizienz 37
3.4 MMP-Abundanz bei Aortendissektion 38
3.5 MMP-Abundanz bei Aortenisthmusstenose 39
3.6 Immunhistochemie: Farbintensität 44
3.7 Aorta-ascendens-Aneurysma: Korrelation zwischen Genregulation und
Proteinexpression 46
3.8 Aortenstenose: Korrelation zwischen Genregulation und Proteinexpression 46
3.9 Aortenklappeninsuffizienz: Korrelation zwischen Genregulation und Pro¬
teinexpression 46
3.10 Aortendissektion: Korrelation zwischen Genregulation und Proteinexpres¬
sion 46
3.11 Aortenisthmusstenose: Korrelation zwischen Genregulation und Protein¬
expression 46
A.l Protokoll zur Gewebeschnittfärbung mittels TechMate Instrument .... 73
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis 3
Abbildungsverzeichnis 5
Tabellenverzeichnis 6
Abkürzungsverzeichnis 7
1 Einleitung 8
1.1 Aortenerkrankungen 8
1.1.1 Aneurysma der Aorta ascendens 8
1.1.2 Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation 10
1.1.3 Aortenklappeninsuffizienz 10
1.1.4 Aortendissektion 11
1.1.5 Aortenisthmusstenose 13
1.2 Regulation der vaskulären Extrazellulärmatrix: remodeling 13
1.3 Matrixmetalloproteinasen (MMP) 14
1.4 Bedeutung der MMP bei Aortenerkrankungen 17
1.5 Ziel der Studie 19
1.6 Ethikvotum 19
2 Material und Methoden 20
2.1 Patienten und Proben 20
2.2 Analyse der mRNA-Expression 24
INHALTSVERZEICHNIS 4
2.2.1 RNA-Präparation 24
2.2.2 Quantitative PCR - LightCycler 25
2.2.3 Datenanalyse 28
2.3 Analyse auf der Proteinebene 29
2.3.1 Immunhistochemie 29
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3 Ergebnisse 35
3.1 RNA-Analyse 35
3.1.1 RNA-Präparation aus Aortengewebeproben 35
3.1.2 Realtime-PCR 35
3.2 Immunhistochemie 43
3.3 Korrelationsanalyse 46
4 Diskussion 47
4.1 Aneurysma der Aorta ascendens 47
4.2 Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation 49
4.3 Aortenklappeninsumzienz 50
4.4 Aortendissektion 51
4.5 Aortenisthmusstenose 53
4.6 Ausblick 56
5 Zusammenfassung 58
Literaturverzeichnis 62
A Anhang 70
Protokolle und Material für die molekularbiologischen Untersuchungen . 70
Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 74
Lebenslauf 75
Danksagung 76
Abbildungsverzeichnis
1.1 DeBakey Klassifikation 12
1.2 Struktur der Matrixmetalloproteinasen 16
1.3 Aktivitätsregulierung von MMP 17
2.1 Antigennachweis 30
2.2 Immunhistochemie: Färbegrad 0 und 1 34
2.3 Immunhistochemie: Färbegrad 2 und 3 34
3.1 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenaneurysma . 36
3.2 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenstenose mit
poststenostischer Dilatation 37
3.3 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenklappenin¬
suffizienz 38
3.4 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortendissektion . 39
3.5 Graphische Darstellung der Expression von MMP bei Aortenisthmusstenose 40
3.6 Relative Genexpression MMP/18S rRNA nach Genen geordnet 41
3.7 Relative Genexpression MMP/18S rRNA nach Krankheitsgruppen geordnet 42
3.8 Immunhistochemie: Proteinexpression 45
Tabellenverzeichnis
2.1 Patientenpopulation 23
2.2 Annealing Temperatur 26
2.3 Primersequenzen 27
2.4 Programm zur Paraffinfbderung der Gewebeschnitte 31
2.5 Reagenzien für die immunhistochemische Untersuchung 32
3.1 MMP-Abundanz bei Aorta-ascendens-Aneurysma 36
3.2 MMP-Abundanz bei Aortenstenose mit poststenotischer Dilatation . 37
3.3 MMP-Abundanz bei Aortenklappeninsuffizienz 37
3.4 MMP-Abundanz bei Aortendissektion 38
3.5 MMP-Abundanz bei Aortenisthmusstenose 39
3.6 Immunhistochemie: Farbintensität 44
3.7 Aorta-ascendens-Aneurysma: Korrelation zwischen Genregulation und
Proteinexpression 46
3.8 Aortenstenose: Korrelation zwischen Genregulation und Proteinexpression 46
3.9 Aortenklappeninsuffizienz: Korrelation zwischen Genregulation und Pro¬
teinexpression 46
3.10 Aortendissektion: Korrelation zwischen Genregulation und Proteinexpres¬
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