Untersuchungen zur Wirksamkeit und Spezifität eines neuen PDGFb-Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Antagonisten [PDGFbeta-Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Antagonisten] in vitro und in einem Modell der mesangioproliferativen Glomerulonephritis:
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| adam_text | Inhalt
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen
Seite
I. EINLEITUNG 1
1.1. Das Mesangium 1
1.1.1. PDGF und seine Rolle im Mesangium 1
1.2. Mesangioproliferative Erkrankungen 3
1.2.1. Therapeutische Interventionen im PDGF-System 4
1.3. Dieanti-Thy 1.1-Nephritis 5
1.4. Der PDGF-Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Inhibitor SU9518 6
1.5. Ziel und Fragestellung 8
II. MATERIAL UND METHODEN 9
11.1. Materialien 9
11.1.1. Chemikalien 9
11.1.2. Geräte und Verbrauchsmaterial 9
11.1.3. Wachstumsfaktoren 9
11.2. Methoden 9
11.2.1. In vrtro-Proliferationsversuch 9
11.2.1.1. Prinzip der Darstellung der Zellproliferation 10
mittels BrdU-ELISA
11.2.1.2. Zellkulturverfahren 10
11.2.1.3. Messung der BrdU-Inkorporation 11
11.3. Tierversuch 11
11.3.1. Herkunft und Haltung der Tiere 11
11.3.2. Induktion des Krankheitsmodells 12
11.3.3. Behandlung der Tiere 12
11.3.4. Nierenbiopsien 13
11.4. Verarbeitung des Urins und der Biopsate 14
11.5. Bestimmung der Albuminurie 15
11.6. PAS-Färbung von Paraffinschnitten 17
11.7. Immunhistochemie 18
H.7.1. Detektion von a-smooth-muscle-Akt n und Typ IV-Kollagen 18
11.7.2. Immunhistochemischer Nachweis von BrdU 19
11.7.3. Doppelfärbung BrdU/a-smoort-musc/e-Aktin 20
11.8. Lichtmikroskopische Untersuchung der Glomeruli 21
11.9. Statistik 22
III. ERGEBNISSE 23
111.1. SU9518 inhibiert selektiv die Tyrosin-Kinase-Funktion der 23
PDGFß-Rezeptor-Kette
111.2. In viVo-Intervention mit SU9518 im anti-Thy 1.1 -Modell der 25
mesangioproliferativen Glomerulonephritis in der Ratte
-I-
Seite
III.2.1. Der Phänotyp der Versuchstiere ist von den Interventionen 25
unbeeinflusst
Hl.2.2. SU9518 hat keinen signifikanten Einfluss auf die Albuminurie 25
III.2.3. SU9518 hat keine signifikanten Auswirkungen auf 26
Mesangiolyse und Mikroaneurysmen
Hl.2.4. Behandlung mit SU9518 bewirkt keine signifikante Reduktion 27
der glomerulären a-smootf -musc/e-Aktin-Expression
III.2.5. Behandlung mit SU9518 bewirkt keine signifikante Reduktion 28
der glomerulären Typ IV-Kollagen-Expression
Hl.2.6. SU9518 hat keinen signifikanten Effekt auf die glomeruläre 29
Zellproliferation in vivo
IM.2.7. Anhang: Abbildungen Histologie und Immunhistologie 33
IV. DISKUSSION 36
IV. 1. Sugen 9518 in vitro und in vivo 36
IV.2. Ausblick 43
V. ZUSAMMENFASSUNG 45
VI. LITERATURVERZEICHNIS 46
VII. DANKSAGUNG 56
VIII. CURRICULUM VITAE 57
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Inhalt
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen
Seite
I. EINLEITUNG 1
1.1. Das Mesangium 1
1.1.1. PDGF und seine Rolle im Mesangium 1
1.2. Mesangioproliferative Erkrankungen 3
1.2.1. Therapeutische Interventionen im PDGF-System 4
1.3. Dieanti-Thy 1.1-Nephritis 5
1.4. Der PDGF-Rezeptor-Tyrosin-Kinase-Inhibitor SU9518 6
1.5. Ziel und Fragestellung 8
II. MATERIAL UND METHODEN 9
11.1. Materialien 9
11.1.1. Chemikalien 9
11.1.2. Geräte und Verbrauchsmaterial 9
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11.2. Methoden 9
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11.2.1.3. Messung der BrdU-Inkorporation 11
11.3. Tierversuch 11
11.3.1. Herkunft und Haltung der Tiere 11
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11.3.3. Behandlung der Tiere 12
11.3.4. Nierenbiopsien 13
11.4. Verarbeitung des Urins und der Biopsate 14
11.5. Bestimmung der Albuminurie 15
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11.7. Immunhistochemie 18
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11.7.2. Immunhistochemischer Nachweis von BrdU 19
11.7.3. Doppelfärbung BrdU/a-smoort-musc/e-Aktin 20
11.8. Lichtmikroskopische Untersuchung der Glomeruli 21
11.9. Statistik 22
III. ERGEBNISSE 23
111.1. SU9518 inhibiert selektiv die Tyrosin-Kinase-Funktion der 23
PDGFß-Rezeptor-Kette
111.2. In viVo-Intervention mit SU9518 im anti-Thy 1.1 -Modell der 25
mesangioproliferativen Glomerulonephritis in der Ratte
-I-
Seite
III.2.1. Der Phänotyp der Versuchstiere ist von den Interventionen 25
unbeeinflusst
Hl.2.2. SU9518 hat keinen signifikanten Einfluss auf die Albuminurie 25
III.2.3. SU9518 hat keine signifikanten Auswirkungen auf 26
Mesangiolyse und Mikroaneurysmen
Hl.2.4. Behandlung mit SU9518 bewirkt keine signifikante Reduktion 27
der glomerulären a-smootf -musc/e-Aktin-Expression
III.2.5. Behandlung mit SU9518 bewirkt keine signifikante Reduktion 28
der glomerulären Typ IV-Kollagen-Expression
Hl.2.6. SU9518 hat keinen signifikanten Effekt auf die glomeruläre 29
Zellproliferation in vivo
IM.2.7. Anhang: Abbildungen Histologie und Immunhistologie 33
IV. DISKUSSION 36
IV. 1. Sugen 9518 in vitro und in vivo 36
IV.2. Ausblick 43
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