Dynamik der morphologischen und quantitativen Veränderungen myokardialer Lymph- und Blutkapillaren nach Herztransplantation:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 5
1.1 Herztransplantation 5
1.2 Das lymphatische System 6
1.2.1 Lymphatische Entwicklungsbiologie 6
1.2.2 Das lymphatische System und Herztransplantation 10
1.3 Die myokardialen Blutkapillaren 11
2 FRAGESTELLUNG 13
3 MATERIAL UND METHODEN 14
3.1 Verwendete Chemikalien, Lösungen und Material 14
3.1.1 Verwendete Chemikalien 14
3.1.2 Verwendete Lösungen 16
3.1.3 Weitere Materialien und Geräte 18
3.1.4 Verwendete Antikörper 19
3.1.4.1 Primäre Antikörper 19
3.1.4.2 Sekundäre Antikörper 22
3.1.4.3 Fluorochrome 22
3.2 Experimentelle Eingriffe und Behandlung 23
3.2.1 Patienten 23
3.2.2 Transplantationsverfahren und Immunsuppression 24
3.2.3. Gewebeentnahme 25
3.2.3.1 Rechtsventrikuläre Endomyokardbiopsien 26
3.2.3.2 Linksventrikuläre Endomyokardbiopsien 26
3.2.3.3 Pulmonalklappen 26
3.2.4 Fixierung 27
3.2.5 Einbettung 27
3.3 Immunhistochemie 28
3.3.1 Prinzip der Immunhistochemie 28
3.3.2 ABC-Methode 29
3.3.3 Standard-Protokoll der lichtmikroskopischen Immunhistochemie 30
1
3.3.4 Anwendung der Immunhistochemie mit den Antikörpern Anti-FLK-1,
Anti-FLT-1, Anti-FLT-4, Anti-Eph B4, Anti-LYVE-1 und Anti-PROX-1 30
3.4 Immunfluoreszenz 32
3.4.1 Fluorochrome 33
3.4.2 Standardprotokoll der Immunofluoreszenzhistochemie 33
3.4.2.1 Standardprotokoll der lichtmikroskopischen Immunohistochemie für
eine zweifache Immunfluoreszenzmarkierung 33
3.4.2.2 Für eine dreifache Immunfluoreszenzmarkierung fortsetzend 34
3.4.3 Zweifache Immunfluoreszenzmarkierung 34
3.4.4 Dreifache Immunfluoreszenzmarkierung 35
3.4.5 Verwendete Antikörper 36
3.5 Auswertung und Statistik 37
4 ERGEBNISSE 38
4.1 Ergebnisse der Markierung von Lymphgefäßen 38
4.1.1 Ergebnisse der Flt-4-Markierung 41
4.1.2 Ergebnisse der LYVE-1-Markierung 44
4.1.3 Ergebnisse der PROX-1-Markierung 47
4.1.4 Ergebnisse der dreifachen Fluoreszenzmarkierung für Flt-4, LYVE-1
und PROX-1 50
4.1.5 Ergebnisse der doppelten Fluoreszenzmarkierung für lymphatische
Marker Flt-4, LYVE-1, PROX-1 und venöse Marker Eph B4 52
4.1.6 Ergebnisse der Flt-4, LYVE-1 und PROX-1-Markierung in
pathologischen und gesunden Herzen 54
4.1.7 Zusammenhang zwischen der Dichte der Lymphgefäße und Abstoßung
58
4.2 Ergebnisse der Markierung von Blutgefäßen 59
4.2.1 Ergebnisse der Flt-1-Markierung 60
4.2.2 Ergebnisse der Flk-1-Markierung 62
4.2.3 Ergebnisse der Doppelimmunfluoreszenz für Flt-1 und Flk-1 63
5 DISKUSSION 65
5.1 Veränderungen der Lymphgefäße nach Herztransplantation und ihre
Relation zur Transplantatabstoßung 65
2
5.1.1 Quantitative Veränderungen der Dichte der myokardialen
Lymphgefäße im Verlauf nach Herztransplantation 65
5.1.2 Untersuchung der Dichte der myokardialen Lymphgefäße in Relation
zur Transplantatabstoßung 68
5.2 Phänotypänderung der Lymphgefäße im terminal insuffizienten Myokard. 72
5.3 Veränderungen der myokardialen Blutkapillare nach Herztransplantation. 74
6 ZUSAMMENFASSUNG 77
7 LITERATURVERZEICHNIS 79
3
|
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Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 5
1.1 Herztransplantation 5
1.2 Das lymphatische System 6
1.2.1 Lymphatische Entwicklungsbiologie 6
1.2.2 Das lymphatische System und Herztransplantation 10
1.3 Die myokardialen Blutkapillaren 11
2 FRAGESTELLUNG 13
3 MATERIAL UND METHODEN 14
3.1 Verwendete Chemikalien, Lösungen und Material 14
3.1.1 Verwendete Chemikalien 14
3.1.2 Verwendete Lösungen 16
3.1.3 Weitere Materialien und Geräte 18
3.1.4 Verwendete Antikörper 19
3.1.4.1 Primäre Antikörper 19
3.1.4.2 Sekundäre Antikörper 22
3.1.4.3 Fluorochrome 22
3.2 Experimentelle Eingriffe und Behandlung 23
3.2.1 Patienten 23
3.2.2 Transplantationsverfahren und Immunsuppression 24
3.2.3. Gewebeentnahme 25
3.2.3.1 Rechtsventrikuläre Endomyokardbiopsien 26
3.2.3.2 Linksventrikuläre Endomyokardbiopsien 26
3.2.3.3 Pulmonalklappen 26
3.2.4 Fixierung 27
3.2.5 Einbettung 27
3.3 Immunhistochemie 28
3.3.1 Prinzip der Immunhistochemie 28
3.3.2 ABC-Methode 29
3.3.3 Standard-Protokoll der lichtmikroskopischen Immunhistochemie 30
1
3.3.4 Anwendung der Immunhistochemie mit den Antikörpern Anti-FLK-1,
Anti-FLT-1, Anti-FLT-4, Anti-Eph B4, Anti-LYVE-1 und Anti-PROX-1 30
3.4 Immunfluoreszenz 32
3.4.1 Fluorochrome 33
3.4.2 Standardprotokoll der Immunofluoreszenzhistochemie 33
3.4.2.1 Standardprotokoll der lichtmikroskopischen Immunohistochemie für
eine zweifache Immunfluoreszenzmarkierung 33
3.4.2.2 Für eine dreifache Immunfluoreszenzmarkierung fortsetzend 34
3.4.3 Zweifache Immunfluoreszenzmarkierung 34
3.4.4 Dreifache Immunfluoreszenzmarkierung 35
3.4.5 Verwendete Antikörper 36
3.5 Auswertung und Statistik 37
4 ERGEBNISSE 38
4.1 Ergebnisse der Markierung von Lymphgefäßen 38
4.1.1 Ergebnisse der Flt-4-Markierung 41
4.1.2 Ergebnisse der LYVE-1-Markierung 44
4.1.3 Ergebnisse der PROX-1-Markierung 47
4.1.4 Ergebnisse der dreifachen Fluoreszenzmarkierung für Flt-4, LYVE-1
und PROX-1 50
4.1.5 Ergebnisse der doppelten Fluoreszenzmarkierung für lymphatische
Marker Flt-4, LYVE-1, PROX-1 und venöse Marker Eph B4 52
4.1.6 Ergebnisse der Flt-4, LYVE-1 und PROX-1-Markierung in
pathologischen und gesunden Herzen 54
4.1.7 Zusammenhang zwischen der Dichte der Lymphgefäße und Abstoßung
58
4.2 Ergebnisse der Markierung von Blutgefäßen 59
4.2.1 Ergebnisse der Flt-1-Markierung 60
4.2.2 Ergebnisse der Flk-1-Markierung 62
4.2.3 Ergebnisse der Doppelimmunfluoreszenz für Flt-1 und Flk-1 63
5 DISKUSSION 65
5.1 Veränderungen der Lymphgefäße nach Herztransplantation und ihre
Relation zur Transplantatabstoßung 65
2
5.1.1 Quantitative Veränderungen der Dichte der myokardialen
Lymphgefäße im Verlauf nach Herztransplantation 65
5.1.2 Untersuchung der Dichte der myokardialen Lymphgefäße in Relation
zur Transplantatabstoßung 68
5.2 Phänotypänderung der Lymphgefäße im terminal insuffizienten Myokard. 72
5.3 Veränderungen der myokardialen Blutkapillare nach Herztransplantation. 74
6 ZUSAMMENFASSUNG 77
7 LITERATURVERZEICHNIS 79
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