Einfluss einer antiretroviralen Frühtherapie während der akuten HIV-1-Infektion auf den klinischen, virologischen und immunologischen Verlauf der HIV-1-Erkrankung:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen 6
I.Einleitung
1.1 Primary HIV Infection (PHI) oder Akutes HlV-Syndrom 8
1.2 Klinik 12
1.3 Diagnostik 15
1.4 Die Biologie der HIV-1 Expansion in der akuten Infektionsphase 17
1.5 Immunologie der akuten HIV-1 Infektion 21
1.5.1 Antwort der zytotoxischen CDS* T-Lymphozyten (CTL) 21
1.5.2 Immunantwort der CD4+ Zellen 25
1.6 Genetisch prädiktive Faktoren des HIV-1 Erkrankungsverlaufs 28
1.6. HLA-System 29
1.6.2 CCR5A32-Polymorphismus 30
1.6.3 SDF-1 Polymorphismus 31
1.6.4 CCR2-64I-Polymorphismus 32
1.7 Time to hit - early and hard ?! 33
1.7.1 Frühe Therapie?- Internationale Richtlinien im Vergleich. 35
1.7.2 HAART während der akuten HIV-1 Infektion. Welches Regime? 37
1.7.3 Erwarteter Effekt einer antiretroviralen Therapie 38
2. Fragestellung und Zielsetzung 40
3. Material und Methoden
3.1 Material 41
3.2 Methoden 44
3.2.1 Ein-und Ausschlusskriterien 44
3.2.2 Patientengut 45
3.2.3 Blutentnahme 45
3.2.4 HIV-Therapie 45
3.2.5 Gewinnung von mononukleären Blutzellen mittels Dichtegradienten-Zentrifugation 47
3.2.6 Bestimmung von Zellzahl und Viabilität 47
3.2.7 Einfrieren der Zellen 48
3.2.8 Versand 48
3.2.9 Bestimmung relevanter Marker der HIV Infektion 48
3.2.10 HLA-Allel Klasse I und II Bestimmung 49
3.2.11Chemokin- und Zytokinrezeptorpolymorphismen 50
3.2.12 Synthetisierung der HIV-1 Peptide 50
3.2.13 Auftauen der Zellen 51
3.2.14 IFN-yElispOt 51
3.2. f 5 Intracellular cytokine and surface staining (ICS) -Durchflusszytometrie 52
3.2.16 CD107aassay 57
3.1.17 Carboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylester (CFSE)- Proliferationsassay 58
3.1.18 Sequenzierung des gag- Gens bei #7298 59
3.1.19 Statistische Analyse 60
4. Ergebnisse
4.1 Studienkohorte 61
4.1.1 Zusammensetzung der Studienkohorte 61
4.1.2 Antiretrovirale Therapie 65
4.2 Einfluss einer Kurztherapie mit HAART während der akuten HIV-1
Infektion auf den longHudinalen Verlauf der HIV-1 Viruslast 66
4.3 Einfluss einer Kurztherapie mit HAART während der akuten HIV-1
Infektion auf den longitudinalen Verlauf der CD4+ T-Zellzahl 70
4.4 Der Einfluss einer antiretroviralen Therapie auf die Ausbildung einer
IFN-7 Immunantwort der CD8+ T-Lymphozyten 72
4.5 Longitudinale Analyse der CD107a Immunantwort der
CD8+ T Lymphozyten gegen HIV-1 spezifische Peptide in
Abhängigkeit einer antiretroviralen Frühtherapie 80
4.6 Einfluss einer antiretroviralen Therapie auf den longitudinalen
Verlauf der interleukin-2 Immunantwort von CD8+ T-Lymphozyten 84
4.7 Einfluss einer kurzzeitigen antiretroviralen Therapie auf die
Differenzierungs- und Reifungsfähigkeit der IFN-y sezernierenden
HIV-1 spezifischen CD8+ T-Lymphozyten 85
4.8 Longitudinaler Effekt einer antiretroviralen Frühtherapie auf die
Funktion der CD4+ T-Lymphozyten 91
4.9 Effekt einer antiretroviralen Frühtherapie auf den
longitudinalen Verlauf der IL-2 Sekretion von CD4+ T Lymphozyten 93
4.10 Darstelllung der veränderten IFN-y Sekretion und Antwort der
CD4+ T Lymphozyten durch eine antiretrovirale Therapie in der akuten
HIV-1-lnfektion 94
4.11 Veränderungen der Sekretionsfähigkeit der Subpopulation der
IFN-v/IL-2 doppelpositiven CD4+ T-Lymphozyten durch eine
antiretrovirale Frühtherapie 96
4.12 Veränderung der Proliferationsfähigkeit von CD4+ und
CD8+T-Lymphozyten im Zeitverlauf in Abhängigkeit
einer antiretroviralen Therapie 98
4.13 Sonderfall Patient #7298 99
5. Diskussion
5.1 Bewertung der angewandten Methodik und Fehleranalyse 106
5. f. / Bewertung der Studienpopulation 106
5.1.2 Stellenwert des IFN-rBispots 108
5.1.3 Stellenwert der Durchflusszytometrie (ICS) 109
5.1.4 Bewertung des Carboxyfluorescein diacetate
succimmidyl ester (CFSE) Proliferationsassay 110
5.1.5 Stellungnahme zum CD107a assay 110
5.1.6 Stellungnahme zur Polymerase Kettenreaktion (PCR) 111
5.2 Diskussion und Bewertung der Ergebnisse 112
5.2.1 Bewertung der klinischen Ergebnisse -Viruslast und CD4+ Zahl 113
5.2.2 IFN-ySekretion der CD8+ T-Lymphozyten 115
5.2.3 Ergebnisse zur Maturationsfähigkeit der CD8+ TLymphozyten 118
5.2.4 Immunantwort der CD4* T-Lymphozyten 120
5.3 Zusammenfassende Bewertung der Ergebnisse und Ausblick 122
6. Zusammenfassung 126
7. Literatur 128
8. Danksagung 150
9. Lebenslauf 152
|
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Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen 6
I.Einleitung
1.1 "Primary HIV Infection" (PHI) oder "Akutes HlV-Syndrom" 8
1.2 Klinik 12
1.3 Diagnostik 15
1.4 Die Biologie der HIV-1 Expansion in der akuten Infektionsphase 17
1.5 Immunologie der akuten HIV-1 Infektion 21
1.5.1 Antwort der zytotoxischen CDS* T-Lymphozyten (CTL) 21
1.5.2 Immunantwort der CD4+ Zellen 25
1.6 Genetisch prädiktive Faktoren des HIV-1 Erkrankungsverlaufs 28
1.6. HLA-System 29
1.6.2 CCR5A32-Polymorphismus 30
1.6.3 SDF-1 Polymorphismus 31
1.6.4 CCR2-64I-Polymorphismus 32
1.7 "Time to hit - early and hard" ?! 33
1.7.1 Frühe Therapie?- Internationale Richtlinien im Vergleich. 35
1.7.2 HAART während der akuten HIV-1 Infektion. Welches Regime? 37
1.7.3 Erwarteter Effekt einer antiretroviralen Therapie 38
2. Fragestellung und Zielsetzung 40
3. Material und Methoden
3.1 Material 41
3.2 Methoden 44
3.2.1 Ein-und Ausschlusskriterien 44
3.2.2 Patientengut 45
3.2.3 Blutentnahme 45
3.2.4 HIV-Therapie 45
3.2.5 Gewinnung von mononukleären Blutzellen mittels Dichtegradienten-Zentrifugation 47
3.2.6 Bestimmung von Zellzahl und Viabilität 47
3.2.7 Einfrieren der Zellen 48
3.2.8 Versand 48
3.2.9 Bestimmung relevanter Marker der HIV Infektion 48
3.2.10 HLA-Allel Klasse I und II Bestimmung 49
3.2.11Chemokin- und Zytokinrezeptorpolymorphismen 50
3.2.12 Synthetisierung der HIV-1 Peptide 50
3.2.13 Auftauen der Zellen 51
3.2.14 IFN-yElispOt 51
3.2. f 5 Intracellular cytokine and surface staining (ICS) -Durchflusszytometrie 52
3.2.16 CD107aassay 57
3.1.17 Carboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylester (CFSE)- Proliferationsassay 58
3.1.18 Sequenzierung des gag- Gens bei #7298 59
3.1.19 Statistische Analyse 60
4. Ergebnisse
4.1 Studienkohorte 61
4.1.1 Zusammensetzung der Studienkohorte 61
4.1.2 Antiretrovirale Therapie 65
4.2 Einfluss einer Kurztherapie mit HAART während der akuten HIV-1
Infektion auf den longHudinalen Verlauf der HIV-1 Viruslast 66
4.3 Einfluss einer Kurztherapie mit HAART während der akuten HIV-1
Infektion auf den longitudinalen Verlauf der CD4+ T-Zellzahl 70
4.4 Der Einfluss einer antiretroviralen Therapie auf die Ausbildung einer
IFN-7 Immunantwort der CD8+ T-Lymphozyten 72
4.5 Longitudinale Analyse der CD107a Immunantwort der
CD8+ T Lymphozyten gegen HIV-1 spezifische Peptide in
Abhängigkeit einer antiretroviralen Frühtherapie 80
4.6 Einfluss einer antiretroviralen Therapie auf den longitudinalen
Verlauf der interleukin-2 Immunantwort von CD8+ T-Lymphozyten 84
4.7 Einfluss einer kurzzeitigen antiretroviralen Therapie auf die
Differenzierungs- und Reifungsfähigkeit der IFN-y sezernierenden
HIV-1 spezifischen CD8+ T-Lymphozyten 85
4.8 Longitudinaler Effekt einer antiretroviralen Frühtherapie auf die
Funktion der CD4+ T-Lymphozyten 91
4.9 Effekt einer antiretroviralen Frühtherapie auf den
longitudinalen Verlauf der IL-2 Sekretion von CD4+ T Lymphozyten 93
4.10 Darstelllung der veränderten IFN-y Sekretion und Antwort der
CD4+ T Lymphozyten durch eine antiretrovirale Therapie in der akuten
HIV-1-lnfektion 94
4.11 Veränderungen der Sekretionsfähigkeit der Subpopulation der
IFN-v/IL-2 doppelpositiven CD4+ T-Lymphozyten durch eine
antiretrovirale Frühtherapie 96
4.12 Veränderung der Proliferationsfähigkeit von CD4+ und
CD8+T-Lymphozyten im Zeitverlauf in Abhängigkeit
einer antiretroviralen Therapie 98
4.13 Sonderfall Patient #7298 99
5. Diskussion
5.1 Bewertung der angewandten Methodik und Fehleranalyse 106
5. f. / Bewertung der Studienpopulation 106
5.1.2 Stellenwert des IFN-rBispots 108
5.1.3 Stellenwert der Durchflusszytometrie (ICS) 109
5.1.4 Bewertung des Carboxyfluorescein diacetate
succimmidyl ester (CFSE) Proliferationsassay 110
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5.2 Diskussion und Bewertung der Ergebnisse 112
5.2.1 Bewertung der klinischen Ergebnisse -Viruslast und CD4+ Zahl 113
5.2.2 IFN-ySekretion der CD8+ T-Lymphozyten 115
5.2.3 Ergebnisse zur Maturationsfähigkeit der CD8+ TLymphozyten 118
5.2.4 Immunantwort der CD4* T-Lymphozyten 120
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