Chromosomale Imbalancen differenzierter Schilddrüsenkarzinome im Kindes- und Jugendalter:
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2007
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adam_text | Inhalteverzeichnis
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 2
2.1 Maligne Endokrine Tumoren im Kindes- und Jugendalter 3
2.1.2 Neoplasien der Schilddrüse 3
2.1.3 Differenzierte Schilddrüsenkarzinome (DTC) 4
2.2 Therapiestudie GPOH-MET-97 8
2.3 Komparative Genomische Hybridisierung (CGH) und ihre Bedeutung 9
3 Zielstellung der Arbeit 12
4 Material 13
4.1 Untersuchungsmaterial 13
4.2 Reagenzien für die Kultivierung von Lymphozyten und die 14
Chromosomenpräparation
4.3 Reagenzien für die Entparaffinierung und Färbung von Paraffinschnitten 14
4.4 Reagenzien für die DNA-Extraktion 15
4.5 Reagenzien für die Kernextraktion 16
4.6 Reagenzien für die Konzentrationsbestimmung mit der Tüpfelplatte 16
4.7 Reagenzien für die Polymerasekettenreaktion (PCR) 17
4.7.1 Reagenzien für die DOP-PCR 17
4.7.2 Reagenzien für die Markierungs-PCR 17
4.8 Verwendete Antikörper, Nukleotide und Zentromersonden 18
4.9 Reagenzien für die Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 18
4.10 Medien, Lösungen, Puffer und Sonstiges 19
4.11 Geräte 20
IM
5 Methoden 21
5.1 Herstellung zytogenetischer Präparate 21
5.1.1 Kultivierung von Lymphozyten 21
5.1.2 Chromosomenpräparation aus kultivierten Lymphozyten 21
5.1.3 Hämalaun-Eosin-Färbung nach Mayer 23
5.1.4 DNA-Extraktion aus dem Tumorgewebe 23
5.1.5 DNA-Extraktion aus Blut 24
5.1.6 Kernextraktion aus Paraffinschnitten 24
5.2 Bestimmung der DNA-Menge mittels Photometer und Tüpfelplatte 25
5.3 Polymerasekettenreaktion (PCR) 26
5.3.1 DOP-PCR (Degenerate Oligonucleotide Primer-PCR) 27
5.3.2 Markierungs-PCR 30
5.4 Komparative Genomische Hybridisierung (CGH) 31
5.4.1 Vorbehandlung der Chromosomenpräparate 31
5.4.2 Vorbereitung der DNA-Sonden 32
5.4.3 In situ Hybridisierung 32
5.4.4 Detektion der DNA-Sonden 33
5.4.5 Mikroskopie und Auswertung 34
5.4.6 Methodische Besonderheiten 35
5.5 Interphase Fluoreszenz in situ Hybridisierung (Interphase-FISH) 36
5.6 Statistische Auswertung 37
6 Ergebnisse 38
6.1 Auswertungsstrategie der CGH-Analyse 38
6.2 Chromosomale Imbalancen follikulärer Schilddrüsenkarzinome (FTC) 40
6.3 Chromosomale Imbalancen und klinische Merkmale der Patienten mit 41
FTC
6.4 Chromosomale Imbalancen papillärer Schilddrüsenkarzinome (PTC) 44
6.5 Relevante klinische Merkmale der Patienten mit PTC 45
6.6 Zusammenhang zwischen Tumorvolumen, Diagnosealter und Anzahl 48
der Aberrationen der PTC
6.7 Chromosomale Imbalancen in Tumoren unterschiedlicher Ausdehnung 48
IV
6.8 Zuordnung chromosomaler Imbalancen zu Krankheitsstadien 50
6.9 Chromosomale Imbalancen in Beziehung zu radiotherapeutischer 54
Vorbehandlung, aktuellem Krankheitszustand und Auftreten von
Metastasen
6.10 Verifizierung der CGH-Ergebnisse mittels der Interphase-FISH-Analyse 57
6.11 Gemeinsame und unterschiedliche chromosomale Imbalancen von 59
FTC und PTC
7 Diskussion 61
7.1 Methodische Aspekte der Komparativen Genomischen 61
Hybridisierung (CGH)
7.2 Follikuläre Schilddrüsenkarzinome (FTC) 64
7.3 Papilläre Schilddrüsenkarzinome (PTC) 69
7.4 Vergleich der chromosomalen Imbalancen der Tumorentitäten 76
FTC und PTC
8 Schlussfolgerungen 78
9 Literaturverzeichnis 80
10 Anhang
Danksagung 90
Lebenslauf 92
Ehrenwörtliche Erklärung 93
V
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Inhalteverzeichnis
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 2
2.1 Maligne Endokrine Tumoren im Kindes- und Jugendalter 3
2.1.2 Neoplasien der Schilddrüse 3
2.1.3 Differenzierte Schilddrüsenkarzinome (DTC) 4
2.2 Therapiestudie GPOH-MET-97 8
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3 Zielstellung der Arbeit 12
4 Material 13
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4.2 Reagenzien für die Kultivierung von Lymphozyten und die 14
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4.8 Verwendete Antikörper, Nukleotide und Zentromersonden 18
4.9 Reagenzien für die Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 18
4.10 Medien, Lösungen, Puffer und Sonstiges 19
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5 Methoden 21
5.1 Herstellung zytogenetischer Präparate 21
5.1.1 Kultivierung von Lymphozyten 21
5.1.2 Chromosomenpräparation aus kultivierten Lymphozyten 21
5.1.3 Hämalaun-Eosin-Färbung nach Mayer 23
5.1.4 DNA-Extraktion aus dem Tumorgewebe 23
5.1.5 DNA-Extraktion aus Blut 24
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5.2 Bestimmung der DNA-Menge mittels Photometer und Tüpfelplatte 25
5.3 Polymerasekettenreaktion (PCR) 26
5.3.1 DOP-PCR (Degenerate Oligonucleotide Primer-PCR) 27
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5.4 Komparative Genomische Hybridisierung (CGH) 31
5.4.1 Vorbehandlung der Chromosomenpräparate 31
5.4.2 Vorbereitung der DNA-Sonden 32
5.4.3 In situ Hybridisierung 32
5.4.4 Detektion der DNA-Sonden 33
5.4.5 Mikroskopie und Auswertung 34
5.4.6 Methodische Besonderheiten 35
5.5 Interphase Fluoreszenz in situ Hybridisierung (Interphase-FISH) 36
5.6 Statistische Auswertung 37
6 Ergebnisse 38
6.1 Auswertungsstrategie der CGH-Analyse 38
6.2 Chromosomale Imbalancen follikulärer Schilddrüsenkarzinome (FTC) 40
6.3 Chromosomale Imbalancen und klinische Merkmale der Patienten mit 41
FTC
6.4 Chromosomale Imbalancen papillärer Schilddrüsenkarzinome (PTC) 44
6.5 Relevante klinische Merkmale der Patienten mit PTC 45
6.6 Zusammenhang zwischen Tumorvolumen, Diagnosealter und Anzahl 48
der Aberrationen der PTC
6.7 Chromosomale Imbalancen in Tumoren unterschiedlicher Ausdehnung 48
IV
6.8 Zuordnung chromosomaler Imbalancen zu Krankheitsstadien 50
6.9 Chromosomale Imbalancen in Beziehung zu radiotherapeutischer 54
Vorbehandlung, aktuellem Krankheitszustand und Auftreten von
Metastasen
6.10 Verifizierung der CGH-Ergebnisse mittels der Interphase-FISH-Analyse 57
6.11 Gemeinsame und unterschiedliche chromosomale Imbalancen von 59
FTC und PTC
7 Diskussion 61
7.1 Methodische Aspekte der Komparativen Genomischen 61
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7.2 Follikuläre Schilddrüsenkarzinome (FTC) 64
7.3 Papilläre Schilddrüsenkarzinome (PTC) 69
7.4 Vergleich der chromosomalen Imbalancen der Tumorentitäten 76
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