Genexpression von Zytokinen im Herzmuskelgewebe von Mäusen mit immunologisch oder viral induzierter Myokarditis:
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|---|---|
| adam_text | I nha I tsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1. Myokarditis und Kardiomyopathie 6
1.2. Inflammatorische Kardiomyopathie 7
1.3. Zytokine 10
1.3.1. Interleukin-2, Interleukin-2 Rezeptor (IL-2, IL-2R) 11
1.3.2. Interleukin-4 (IL-4) 12
1.3.3. Interleukin-6 (IL-6) 13
1.3.4. Tumor-Nekrose-Faktor-a (TNF-a) 13
1.3.5. Interferon-y (IFN-y) 15
1.4. Experimentell induzierte Myokarditis am Mausmodell 16
2. Aufgabenstellung 17
3. Material und Methoden 18
3.1. Untersuchungsmaterial 18
3.1.1. Biopsiegewinnung und Lagerung 18
3.1.2. Immunhistologische Beurteilung der Entzündungsreaktion 18
3.2. Zubehör und Reagenzien 19
3.2.1. Chemikalien und Lösungen 19
3.2.2. Geräte und Materialien 20
3.2.3. Primer und interne Standards 21
3.2.3.1. Primer und interne Standards BALB/c-Mäuse 21
3.2.3.2. Primer und interne Standards SCID-Mäuse 22
3.2.4. Lösung-und Materialbehandlung mit Diethylpyrocarbonat 22
3.3. RNA-Extraktion 23
3.3.1. Extraktion nach der LiCl-Methode 23
3.3.2. RNA-Extraktion nach der Chomzynski- und Sacci-Methode 24
3.4. Photometrische Messung der RNA 25
3.5. Reverse Transkription (RT) der mRNA 26
3.6. Polymerasekettenreaktion (PCR) 27
3.6.1. Semiquantitative (kompetitive) Polymerasekettenreaktion 30
3.7. Gelelektrophorese der PCR-Produkte 32
3.7.1. Gelektrophorese zum RNA-Nachweis 33
3.8. Berechnung der Ausgangs-mRNA 34
3.9. Statistische Auswertung 34
4
4. Ergebnisse 36
4.1. Vorversuche 36
4.1.1. Optimierung der RNA-Isolierung 3 6
4.1.2. RNA-Menge für die Reverse Transkription 36
4.1.3. Polymerasekettenreaktion und Zahl notwendiger Zyklen 3 7
4.1.4. Semiquantitative Polymerasekettenreaktion 38
4.1.4.1. Standardverdünnungen der semiquantitativen PCR bei BALB/c-Mäusen 38
4.2. Charakterisierung der BALB/c-Mäuse und SCID-Mäuse 40
4.3. Qualitativer Nachweis von Zytokinexpression aus Biopsien der
BALB/c-Mäuse 42
4.4. Versuchsergebnisse 42
4.5. Quantifizierung der Genexpression in Myokardbiopsien der BALB/c-Mäuse 44
4.5.1. Expression von GAPDH für die Normalisierung 44
4.5.2. Genexpression von TNF-a im Myokard 47
4.5.3. Genexpression von IL-2 49
4.5.4. Genexpression von IL-6 51
4.5.5. Genexpression von IFN-y 53
4.5.6. Genexpression von IL-4 54
4.6. Korrelation der Expressionsprofile zu Infektionsstatus, Hämodynamik und
Gewicht 55
4.7. SCID-Mäuse 58
5. Diskussion 59
6. Zusammenfassung 71
7. Literaturverzeichnis 73
8. Verzeichnis verwendeter Abkürzungen 85
9. Lebenslauf 87
10. Danksagung 89
5
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I nha I tsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1. Myokarditis und Kardiomyopathie 6
1.2. Inflammatorische Kardiomyopathie 7
1.3. Zytokine 10
1.3.1. Interleukin-2, Interleukin-2 Rezeptor (IL-2, IL-2R) 11
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2. Aufgabenstellung 17
3. Material und Methoden 18
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3.2.1. Chemikalien und Lösungen 19
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3.3.2. RNA-Extraktion nach der Chomzynski- und Sacci-Methode 24
3.4. Photometrische Messung der RNA 25
3.5. Reverse Transkription (RT) der mRNA 26
3.6. Polymerasekettenreaktion (PCR) 27
3.6.1. Semiquantitative (kompetitive) Polymerasekettenreaktion 30
3.7. Gelelektrophorese der PCR-Produkte 32
3.7.1. Gelektrophorese zum RNA-Nachweis 33
3.8. Berechnung der Ausgangs-mRNA 34
3.9. Statistische Auswertung 34
4
4. Ergebnisse 36
4.1. Vorversuche 36
4.1.1. Optimierung der RNA-Isolierung 3 6
4.1.2. RNA-Menge für die Reverse Transkription 36
4.1.3. Polymerasekettenreaktion und Zahl notwendiger Zyklen 3 7
4.1.4. Semiquantitative Polymerasekettenreaktion 38
4.1.4.1. Standardverdünnungen der semiquantitativen PCR bei BALB/c-Mäusen 38
4.2. Charakterisierung der BALB/c-Mäuse und SCID-Mäuse 40
4.3. Qualitativer Nachweis von Zytokinexpression aus Biopsien der
BALB/c-Mäuse 42
4.4. Versuchsergebnisse 42
4.5. Quantifizierung der Genexpression in Myokardbiopsien der BALB/c-Mäuse 44
4.5.1. Expression von GAPDH für die Normalisierung 44
4.5.2. Genexpression von TNF-a im Myokard 47
4.5.3. Genexpression von IL-2 49
4.5.4. Genexpression von IL-6 51
4.5.5. Genexpression von IFN-y 53
4.5.6. Genexpression von IL-4 54
4.6. Korrelation der Expressionsprofile zu Infektionsstatus, Hämodynamik und
Gewicht 55
4.7. SCID-Mäuse 58
5. Diskussion 59
6. Zusammenfassung 71
7. Literaturverzeichnis 73
8. Verzeichnis verwendeter Abkürzungen 85
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