Die MHC Klasse II abhängige Präsentation von zwitterionischen Polysacchariden erfordert den sauren pH der Endolysosome:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Antigenpräsentation durch MHC Klasse Il-Moleküle 2
1.2 Immunantworten von Polysacchariden 4
1.3 Streptococcus pneumoniae 5
1.4 S. pneumoniae Serotyp 1 ZPS 5
1.5 Immunantworten von ZPS 6
1.6 Fragestellung 8
2 Material und Methoden 9
2.1 Geräte, Materialien 9
2.2 Lösungsmittel, Salzlösungen, Zusätze 10
2.3 Aufreinigung der kapsulären Bestandteile von S. pneumoniae
Serotyp 1 10
2.3.1 Basen-Behandlung 11
2.3.2 Ultrafiltration 11
2.3.3 Aufreinigung von Sp1 mittels Gel-Filtrationschromatographie 11
2.3.4 Lagerung des aufgereinigten Sp1 12
2.3.5 Analyse des aufgereinigten Sp1 12
2.3.5.1 Phenol/Schwefelsäure Test 12
2.3.5.2 Ouchterlony-Doppelimmundiffusion-Test 13
2.3.5.3 Bicinchoninsäure-Test 13
2.3.5.4 Limulus Amöbozyten Lysat-Test 14
2.4 Größenbestimmung der aufgereinigten Sp1 -Fraktionen 15
2.5 Sp1-Markierung 15
2.5.1 Oxidation von Sp1 15
2.5.2 Gel-Chromatographie zur Entsalzen des oxidierten Sp1 16
2.5.3 Markierung von oxidiertem Sp1 16
2.5.4 Markierung von Ovalbumin 17
2.5.5 Qualitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 17
2.5.6 Quantitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 und
Ovalbumin 18
2.5.7 Quantitativer Nachweis der Fluoreszenz-Markierung von
Sp1 18
2.5.8 Protonen-NMR-Analysen von biotinyliertem Sp1 19
2.5.9 Abszessinduktion durch biotinyliertes Sp1 20
2.6 Immunhistochemie 20
2.7 Zellkulturen 21
2.8 Isolierung von murinen Makrophagen 22
2.9 Durchflusszytometrie 22
2.10 Fluoreszenz-Mikroskopie 25
3 Ergebnisse 26
3.1 Aufreinigung von Sp1 26
3.2 Biologisch-chemische Analyse des aufgereinigten 27
Sp1
3.3 Molekulargewicht des aufgereinigten Sp1 29
3.4 Markierung von Sp1 30
3.5 Qualitativer Nachweis der Markierung von Sp1 31
3.6 Quantitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 32
V
3.7 Quantitativer Nachweis der Fluoreszenz-Markierung von
Sp1 34
3.8 NMR-Protonenspektroskopie von biotinyliertem Sp1 34
3.9 Abszess-Induktion durch biotinyliertes Sp1 35
3.10 MHC Klasse II positive Zellen in Abszessen 35
3.11 Bindung von Sp1 an APZ 36
3.12 Internalisierung von Sp1 durch APZ 38
3.13 Sp1 in endosomalen/lysosomalen Kompartimenten 41
3.14 Retrograder Transport von Sp1 zur Zelloberfläche 43
3.15 Bindung von Sp1 an der MHC Klasse II Peptid-Bindungsstelle 46
4 Diskussion 49
4.1 Aufreinigung 49
4.2 Markierung von Sp1 49
4.3 Bindung von Sp1 an APZ 51
4.4 Internalisierung von Sp1 durch APZ 51
4.5 Endosomale Prozessierung und retrograder Transport zur
Zelloberfläche 53
5 Zusammenfassung 57
6 Literaturverzeichnis 58
7 Lebenslauf 64
VI
|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Antigenpräsentation durch MHC Klasse Il-Moleküle 2
1.2 Immunantworten von Polysacchariden 4
1.3 Streptococcus pneumoniae 5
1.4 S. pneumoniae Serotyp 1 ZPS 5
1.5 Immunantworten von ZPS 6
1.6 Fragestellung 8
2 Material und Methoden 9
2.1 Geräte, Materialien 9
2.2 Lösungsmittel, Salzlösungen, Zusätze 10
2.3 Aufreinigung der kapsulären Bestandteile von S. pneumoniae
Serotyp 1 10
2.3.1 Basen-Behandlung 11
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2.3.3 Aufreinigung von Sp1 mittels Gel-Filtrationschromatographie 11
2.3.4 Lagerung des aufgereinigten Sp1 12
2.3.5 Analyse des aufgereinigten Sp1 12
2.3.5.1 Phenol/Schwefelsäure Test 12
2.3.5.2 Ouchterlony-Doppelimmundiffusion-Test 13
2.3.5.3 Bicinchoninsäure-Test 13
2.3.5.4 Limulus Amöbozyten Lysat-Test 14
2.4 Größenbestimmung der aufgereinigten Sp1 -Fraktionen 15
2.5 Sp1-Markierung 15
2.5.1 Oxidation von Sp1 15
2.5.2 Gel-Chromatographie zur Entsalzen des oxidierten Sp1 16
2.5.3 Markierung von oxidiertem Sp1 16
2.5.4 Markierung von Ovalbumin 17
2.5.5 Qualitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 17
2.5.6 Quantitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 und
Ovalbumin 18
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2.5.9 Abszessinduktion durch biotinyliertes Sp1 20
2.6 Immunhistochemie 20
2.7 Zellkulturen 21
2.8 Isolierung von murinen Makrophagen 22
2.9 Durchflusszytometrie 22
2.10 Fluoreszenz-Mikroskopie 25
3 Ergebnisse 26
3.1 Aufreinigung von Sp1 26
3.2 Biologisch-chemische Analyse des aufgereinigten 27
Sp1
3.3 Molekulargewicht des aufgereinigten Sp1 29
3.4 Markierung von Sp1 30
3.5 Qualitativer Nachweis der Markierung von Sp1 31
3.6 Quantitativer Nachweis der Biotinylierung von Sp1 32
V
3.7 Quantitativer Nachweis der Fluoreszenz-Markierung von
Sp1 34
3.8 NMR-Protonenspektroskopie von biotinyliertem Sp1 34
3.9 Abszess-Induktion durch biotinyliertes Sp1 35
3.10 MHC Klasse II positive Zellen in Abszessen 35
3.11 Bindung von Sp1 an APZ 36
3.12 Internalisierung von Sp1 durch APZ 38
3.13 Sp1 in endosomalen/lysosomalen Kompartimenten 41
3.14 Retrograder Transport von Sp1 zur Zelloberfläche 43
3.15 Bindung von Sp1 an der MHC Klasse II Peptid-Bindungsstelle 46
4 Diskussion 49
4.1 Aufreinigung 49
4.2 Markierung von Sp1 49
4.3 Bindung von Sp1 an APZ 51
4.4 Internalisierung von Sp1 durch APZ 51
4.5 Endosomale Prozessierung und retrograder Transport zur
Zelloberfläche 53
5 Zusammenfassung 57
6 Literaturverzeichnis 58
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