Induktion der Expression des extrahepatischen Akute-Phase Proteins Pentraxin 3 durch Zytokine der Interleukin 6 Familie in humanen vaskulären glatten Muskelzellen:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung: S.1
1.1. Klassische Risikofaktoren der Atherosklerose S.l
1.2. Atherosklerose als chronisch entzündliche Erkrankung S.l
1.2.1. CRP S.3
1.2.2. Immunologische Regulationsmechanismen und Trigger der Atherogenese S.4
1.2.2.1. Atherogene Lipoproteine enzymatisch degradiertes LDL (E LDL) S.4
1.2.2.2. Hypertension S.5
1.2.2.3. Diabetes Mellitus S.5
1.2.2.4. Adipositas S.6
1.2.2.5. Infektionen und Interleukine S.6
1.2.2.5.1. Nachweis von IL 6 in atherosklerotischen PIaques S.7
1.3. Klassische Akute Phase Reaktion in der Pathogenese der Atherosklerose S.8
1.3.1. Zytokine der IL 6 Familie S.9
1.3.2. Die funktionelle Einheit von gpl30 und IL 6/sIL 6R Komplex mit der
intrazellulären Signalkaskade S.9
1.3.3. Membranständiger und löslicher IL 6R S.ll
1.3.4. Wirkung der IL 6 Familie Zytokine via Transsignaling an VSMC S.12
1.3.5. Hyper IL 6 (H IL 6), das Designer Zytokin S.13
1.3.6. virales IL 6 (vIL 6) S.13
1.4. Extrahepatische Akute Phase Proteine der Pentraxin Familie S.14
1.4.1. Die neue Gruppe der langen Pentraxine mit Pentraxin 3 (PTX3) S.I6
1.5. Fragestellung S.18
2. Material S.19
2.1. Geräte und Software S.19
2.2. Verbrauchsmaterialien S.20
2.3. Zytokine S.20
2.4. Primer und Probes S.21
2.5. Reagenzien S.2I
3. Methoden S.22
3.1. Zellkultur S.22
3.1.1. Isolierung von humanen primären vaskulären glatten Muskelzellen S.22
3.1.2. Kultivierung von VSMC S.22
3.1.3. Spezifisches Medium für humane VSMC S.23
3.1.4. Mediumwechsel bei VSMC S.23
3.1.5. Propagierung von VSMC S.23
3.2. Untersuchung der Wirkung von Zytokinen der IL 6 Familie auf VSMC S.24
3.2.1. Verwendete Zytokine der IL 6 Familie S.25
3.3. RNA Isolierung S.26
3.4. Qualitätskontrolle und Quantifizierung der RNA Konzentration mittels
Photometer S.27
3.5. RT PCR S.27
3.5.1. Primer und Probes S.28
3.5.2. Master Mix S.29
3.5.3. Auswertung der RT PCR S.30
3.6. Agarose Gelelektrophorese S.30
3.7. Densitometrische Quantifizierung der RT PCR Produkte S.31
3.8. relative Quantifizierung mittels RT PCR S.32
3.8.1. Erstellen der Standartkurven für PTX3 und CPB S.32
3.8.2. Berechnung der PTX3 mRNA Induktion S.34
4. Ergebnisse S.35
4.1. Zytokine der IL 6 Familie induzieren die Expression von extrahepatischen
Akute Phase Proteinen in glatten Gefäßmuskelzellen S.35
4.1.1. Selektivität der PTX3 Expression in VSMC S.37
4.1.2. Nachweis und pathophysiologische Bedeutung spontan PTX3 exprimierender
VSMC S.39
4.1.3. Kinetik der PTX3 Expression durch IL 6 aktivierte humane VSMC S.41
4.2. Abhängigkeit der PTX3 Expression von der Konzentration der eingesetzten
Interleukin 6 Familie Zytokine in VSMC S.44
4.2.1. Dosis Wirkung Beziehung der PTX3 Expression in VSMC bei Stimulation
mit dem IL 6/sIL 6R Komplex S.44
4.2.2. Die Abhängigkeit der PTX3 Expression in VSMC von der H IL 6
Konzentration S.46
4.2.3. vIL 6 Konzentration abhängige Pentraxin 3 Induktion in VSMC S.50
4.3. Zeitabhängigkeit der Interleukin 6 Familie Zytokin abhängigen PTX3
Expression in VSMC S.54
4.3.1. Verlauf der PTX3 Induktion in VSMC bei Stimulation mit IL 6/sIL 6R
Komplex S.54
4.3.2. Abhängigkeit der PTX3 mRNA Expression in VSMC von der Inkubationszeit
bei Stimulation mit H IL 6 S.58
4.3.3. Abhängigkeit der 2 Expressionsmaxima in VSMC von der H IL 6
Konzentration S.61
4.3.4. relative Quantifizierung der H IL 6 induzierten PTX3 mRNA Expression in
Abhängigkeit von der Zeit S.64
4.3.5. Abhängigkeit der vIL 6 induzierten PTX3 Expression in VSMC von der
Inkubationszeit S.65
4.4. PTX3 mRNA Expression in anderen mesenchymalen Zelllinien am Beispiel der
humanen Chondrozyten S.69
5. Diskussion S.71
5.1. Vaskuläre Expression von PTX3 durch Interleukin 6 Familie Zytokine S.71
5.1.1. Pathophysiologische Relevanz der IL 6/sIL 6R Komplex Konzentration S.72
5.1.2. PTX3 Induktion in VSMC durch den sIL 6R S.73
5.2. Grundlegende Unterschiede der Interleukin 6 Familie Zytokine in der PTX3
Induktion in VSMC S.73
5.3. Unterschiede in der Regulation mesenchymaler Zellen durch vIL 6 S.74
5.4. Doppelgipflige Expressionsmaxima unter extrem langer Exposition mit
H IL 6 in VSMC S.75
5.5. Transsignaling als generelles neues biologisches Prinzip S.76
5.6. Potential und Bedeutung der spontanen PTX3 Expression in VSMC S.77
5.7. Unterschiede in der Interleukin 6 Zytokin Familie abhängigen PTX3 Induktion in
mesenchymalen Zellen am Beispiel von humanen Chondrozyten S.78
5.8. Ausblick und klinische Implikationen S.79
6. Zusammenfassung S.80
7. Literaturverzeichnis S.82
8. Lebenslauf S.90
9. Danksagung S.92
|
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Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung: S.1
1.1. Klassische Risikofaktoren der Atherosklerose S.l
1.2. Atherosklerose als chronisch entzündliche Erkrankung S.l
1.2.1. CRP S.3
1.2.2. Immunologische Regulationsmechanismen und Trigger der Atherogenese S.4
1.2.2.1. Atherogene Lipoproteine enzymatisch degradiertes LDL (E LDL) S.4
1.2.2.2. Hypertension S.5
1.2.2.3. Diabetes Mellitus S.5
1.2.2.4. Adipositas S.6
1.2.2.5. Infektionen und Interleukine S.6
1.2.2.5.1. Nachweis von IL 6 in atherosklerotischen PIaques S.7
1.3. Klassische Akute Phase Reaktion in der Pathogenese der Atherosklerose S.8
1.3.1. Zytokine der IL 6 Familie S.9
1.3.2. Die funktionelle Einheit von gpl30 und IL 6/sIL 6R Komplex mit der
intrazellulären Signalkaskade S.9
1.3.3. Membranständiger und löslicher IL 6R S.ll
1.3.4. Wirkung der IL 6 Familie Zytokine via Transsignaling an VSMC S.12
1.3.5. Hyper IL 6 (H IL 6), das Designer Zytokin S.13
1.3.6. virales IL 6 (vIL 6) S.13
1.4. Extrahepatische Akute Phase Proteine der Pentraxin Familie S.14
1.4.1. Die neue Gruppe der langen Pentraxine mit Pentraxin 3 (PTX3) S.I6
1.5. Fragestellung S.18
2. Material S.19
2.1. Geräte und Software S.19
2.2. Verbrauchsmaterialien S.20
2.3. Zytokine S.20
2.4. Primer und Probes S.21
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3.1. Zellkultur S.22
3.1.1. Isolierung von humanen primären vaskulären glatten Muskelzellen S.22
3.1.2. Kultivierung von VSMC S.22
3.1.3. Spezifisches Medium für humane VSMC S.23
3.1.4. Mediumwechsel bei VSMC S.23
3.1.5. Propagierung von VSMC S.23
3.2. Untersuchung der Wirkung von Zytokinen der IL 6 Familie auf VSMC S.24
3.2.1. Verwendete Zytokine der IL 6 Familie S.25
3.3. RNA Isolierung S.26
3.4. Qualitätskontrolle und Quantifizierung der RNA Konzentration mittels
Photometer S.27
3.5. RT PCR S.27
3.5.1. Primer und Probes S.28
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3.5.3. Auswertung der RT PCR S.30
3.6. Agarose Gelelektrophorese S.30
3.7. Densitometrische Quantifizierung der RT PCR Produkte S.31
3.8. relative Quantifizierung mittels RT PCR S.32
3.8.1. Erstellen der Standartkurven für PTX3 und CPB S.32
3.8.2. Berechnung der PTX3 mRNA Induktion S.34
4. Ergebnisse S.35
4.1. Zytokine der IL 6 Familie induzieren die Expression von extrahepatischen
Akute Phase Proteinen in glatten Gefäßmuskelzellen S.35
4.1.1. Selektivität der PTX3 Expression in VSMC S.37
4.1.2. Nachweis und pathophysiologische Bedeutung spontan PTX3 exprimierender
VSMC S.39
4.1.3. Kinetik der PTX3 Expression durch IL 6 aktivierte humane VSMC S.41
4.2. Abhängigkeit der PTX3 Expression von der Konzentration der eingesetzten
Interleukin 6 Familie Zytokine in VSMC S.44
4.2.1. Dosis Wirkung Beziehung der PTX3 Expression in VSMC bei Stimulation
mit dem IL 6/sIL 6R Komplex S.44
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4.2.3. vIL 6 Konzentration abhängige Pentraxin 3 Induktion in VSMC S.50
4.3. Zeitabhängigkeit der Interleukin 6 Familie Zytokin abhängigen PTX3
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4.3.1. Verlauf der PTX3 Induktion in VSMC bei Stimulation mit IL 6/sIL 6R
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4.3.3. Abhängigkeit der 2 Expressionsmaxima in VSMC von der H IL 6
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4.3.4. relative Quantifizierung der H IL 6 induzierten PTX3 mRNA Expression in
Abhängigkeit von der Zeit S.64
4.3.5. Abhängigkeit der vIL 6 induzierten PTX3 Expression in VSMC von der
Inkubationszeit S.65
4.4. PTX3 mRNA Expression in anderen mesenchymalen Zelllinien am Beispiel der
humanen Chondrozyten S.69
5. Diskussion S.71
5.1. Vaskuläre Expression von PTX3 durch Interleukin 6 Familie Zytokine S.71
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H IL 6 in VSMC S.75
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5.7. Unterschiede in der Interleukin 6 Zytokin Familie abhängigen PTX3 Induktion in
mesenchymalen Zellen am Beispiel von humanen Chondrozyten S.78
5.8. Ausblick und klinische Implikationen S.79
6. Zusammenfassung S.80
7. Literaturverzeichnis S.82
8. Lebenslauf S.90
9. Danksagung S.92 |
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| title_full | Induktion der Expression des extrahepatischen Akute-Phase Proteins Pentraxin 3 durch Zytokine der Interleukin 6 Familie in humanen vaskulären glatten Muskelzellen vorgelegt von Christian Kleber |
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