Untersuchungen zur photodynamischen Inaktivierung von Bakterien mittels physikalisch-chemisch unterschiedlicher Photosensibilisatoren:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
I. Zusammenfassung 1
II. Einleitung 2
III. Fragestellung 8
IV. Material 9
1. Biologisches Material 9
1.1. Bakterienstämme 9
2. Resistenzmuster der verwendeten Bakterienisolate 10
3. Photosensibilisatoren/Farbstoffe 14
3.1. Photofrin® 14
3.2. Perinaphthenon 16
3.3. Höchst 33342 17
4. Reagenzien und Puffer 17
4.1. Reagenzien 17
4.2. Puffer 17
5. Bakterienkulturmedien 18
6. Technische Geräte 18
V. Methoden 20
1. Bakterienkulturverfahren 20
2. Quantitative Proteinbestimmung 20
3. KBEassay 20
4. Bestimmung der Phototoxizität 20
4.1. Phototoxizitätstest 20
5. Experimente zur Aufnahme des Farbstoffs
5.1. Phototoxizitätstest bei 4°C 21
5.2. Zelluläre Aufnahme des PS 21
6. Fluoreszenzaufnahmen 22
7. Nachweis der Typ I/Il Reaktion bei der Photooxidation 23
7.1. Indirekter Nachweis der Typ I/Il Reaktion mittels Quenchersubstanzen 23
7.2. Direkter Nachweis von Singulett Sauerstoff mittels Lumineszenzmessung 23
VI. Ergebnisse 25
1. Nachweis der Aufnahme unterschiedlicher Photosensibilisatoren bei Bakterien
1.1. Inkubation von Bakterien mit verschiedenen Photosensibilisatoren 25
1.1.1. Inkubation von Bakterien mit Photofrin® 25
1.1.2. Inkubation von Bakterien mit Perinaphthenon 27
1.2. Zelluläre Aufnahme 27
1.2.1. Zelluläre Aufnahme von Photofrin® 27
1.2.2. Zelluläre Aufnahme von Perinaphthenon 29
2. Bestimmung der Phototoxizität von Photofrin® und Perinaphthenon
bei grampositiven und gramnegativen Bakterien 31
2.1. Phototoxizität von Photofrin® gegenüber Bakterien nach Bestrahlung 32
2.2. Phototoxizität von Perinaphthenon gegenüber Bakterien nach Bestrahlung 36
3. Nachweis der Reaktion vom Typ I und/oder Typ Il bei der Photooxidation 42
3.1. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation
mittels Quenchersubstanzen 42
3.1.1. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation mittels
Quenchersubstanzen bei Verwendung von Photofrin® 42
3.1.2. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation mittels
Quenchersubstanzen bei Verwendung von Perinaphthenon 45
3.2. Direkter Nachweis von Singulett Sauerstoff mittels Lumineszenzmessung 48
VII. Diskussion 51
1. Zusammenfassung der Ergebnisse 51
2. Phototoxizität von Photofrin® und Perinapthenon 52
2.1. Phototoxizität bei grampositiven Bakterien 52
2.2. Phototoxizität bei gramnegativen Bakterien 55
3. Reaktionstyp bei der Photooxidation 58
4. Singulett Sauerstoff Lumineszenz 59
5. Ausblick 60
VIII. Abkürzungen 63
IX. Literaturverzeichnis 64
X. Danksagung 68
XI. Lebenslauf 69
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Inhaltsverzeichnis
I. Zusammenfassung 1
II. Einleitung 2
III. Fragestellung 8
IV. Material 9
1. Biologisches Material 9
1.1. Bakterienstämme 9
2. Resistenzmuster der verwendeten Bakterienisolate 10
3. Photosensibilisatoren/Farbstoffe 14
3.1. Photofrin® 14
3.2. Perinaphthenon 16
3.3. Höchst 33342 17
4. Reagenzien und Puffer 17
4.1. Reagenzien 17
4.2. Puffer 17
5. Bakterienkulturmedien 18
6. Technische Geräte 18
V. Methoden 20
1. Bakterienkulturverfahren 20
2. Quantitative Proteinbestimmung 20
3. KBEassay 20
4. Bestimmung der Phototoxizität 20
4.1. Phototoxizitätstest 20
5. Experimente zur Aufnahme des Farbstoffs
5.1. Phototoxizitätstest bei 4°C 21
5.2. Zelluläre Aufnahme des PS 21
6. Fluoreszenzaufnahmen 22
7. Nachweis der Typ I/Il Reaktion bei der Photooxidation 23
7.1. Indirekter Nachweis der Typ I/Il Reaktion mittels Quenchersubstanzen 23
7.2. Direkter Nachweis von Singulett Sauerstoff mittels Lumineszenzmessung 23
VI. Ergebnisse 25
1. Nachweis der Aufnahme unterschiedlicher Photosensibilisatoren bei Bakterien
1.1. Inkubation von Bakterien mit verschiedenen Photosensibilisatoren 25
1.1.1. Inkubation von Bakterien mit Photofrin® 25
1.1.2. Inkubation von Bakterien mit Perinaphthenon 27
1.2. Zelluläre Aufnahme 27
1.2.1. Zelluläre Aufnahme von Photofrin® 27
1.2.2. Zelluläre Aufnahme von Perinaphthenon 29
2. Bestimmung der Phototoxizität von Photofrin® und Perinaphthenon
bei grampositiven und gramnegativen Bakterien 31
2.1. Phototoxizität von Photofrin® gegenüber Bakterien nach Bestrahlung 32
2.2. Phototoxizität von Perinaphthenon gegenüber Bakterien nach Bestrahlung 36
3. Nachweis der Reaktion vom Typ I und/oder Typ Il bei der Photooxidation 42
3.1. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation
mittels Quenchersubstanzen 42
3.1.1. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation mittels
Quenchersubstanzen bei Verwendung von Photofrin® 42
3.1.2. Indirekter Nachweis des Reaktionstyps bei der Photooxidation mittels
Quenchersubstanzen bei Verwendung von Perinaphthenon 45
3.2. Direkter Nachweis von Singulett Sauerstoff mittels Lumineszenzmessung 48
VII. Diskussion 51
1. Zusammenfassung der Ergebnisse 51
2. Phototoxizität von Photofrin® und Perinapthenon 52
2.1. Phototoxizität bei grampositiven Bakterien 52
2.2. Phototoxizität bei gramnegativen Bakterien 55
3. Reaktionstyp bei der Photooxidation 58
4. Singulett Sauerstoff Lumineszenz 59
5. Ausblick 60
VIII. Abkürzungen 63
IX. Literaturverzeichnis 64
X. Danksagung 68
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