Über die Rolle der Tyrosinkinasen FAK und Pyk2 bei Ischämie und Reperfusion in der Niere:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Das akute Nierenversagen 1
1.1.1 Das ischämische akute Nierenversagen 2
1.1.2 Pathophysiologie des ischämischen akuten Nierenversagens 5
1.1.3 Mechanismen der Regeneration 7
1.2 Signaltransduktion durch Tyrosinkinasen 9
1.2.1 Focal Adhesion Kinase (FAK) 11
1.2.2 Proline-rich Tyrosine Kinase 2 (Pyk2) 17
1.3 Rolle von FAK und Pyk2 bei Ischämie und Reperfusion 19
1.4 Zielsetzung der Arbeit 21
2. Material und Methoden 22
2.1 Tierversuche und Tierhaltung 22
2.2 Zellkultur 24
2.2.1 Lösungen und Medien 24
2.2.2 Steriltechnik 26
2.2.3 MDCK-Zellen 26
2.2.4 MTAL-Zellen 26
2.2.5 IMCD3-Zellen 27
2.2.6 Zellkultivierung 27
2.3 SDS-PAGE und Western Blot Analyse 29
2.3.1 Lösungen und Puffer 29
2.3.2 Probenaufbereitung 31
2.3.3 Methodik 32
2.4 Immunfluoreszenz 36
2.4.1 Lösungen und Zellaussaat 36
2.4.2 Methodik 36
2.5 Immunhistologie 37
2.5.1 Lösungen 37
2.5.2 Methodik 38
2.6 Präsentation der Daten und statistische Auswertung 39
Inhaltsverzeichnis
3, Ergebnisse 40
3.1 Intrarenale Verteilung von FAKund Pyk2 und deren Phosphorylierung 40
3.1.1 Gesamtmenge 40
3.1.2 Phosphorylierungsgrad 41
3.1.3 Immunhistologische Darstellung der FAK in Rattennieren 42
3.2 FAK nach Ischämie und Reperfusion in vivo 46
3.2.1 Cortex 46
3.2.2 Außenmark 47
3.2.3 Innenmark 48
3.2.4 Immunhistologische Darstellung 49
3.3 Pyk2 nach Ischämie und Reperfusion in vivo 52
3.3.1 Cortex 52
3.3.2 Außenmark 53
3.3.3 Innenmark 53
3.4 FAK und Pyk2 bei ATP-Depletion und -Repletion in vitro 54
3.4.1 MDCK-Zellen 55
3.4.2 MTAL-Zellen 56
3.4.3 FAK in MDCK-Zellen bei lang dauernder ATP-Repletion 56
3.4.4 Immunfluoreszenzmikroskopische Darstellung der FAK in MDCK-Zellen 57
3.5 Auswirkung erhöhter Osmolalität auf die Phosphorylierung von FAK und Pyk2 64
3.5.1 MDCK-Zellen 64
3.5.2 IMCD3-Zellen 66
3.6 FAK und Pyk2 unter diuretischen Bedingungen 67
4. Diskussion 69
4.1 Intrarenale Verteilung von FAK und Pyk2 69
4.2 Phosphorylierung von FAK und Pyk2 bei Ischämie und Reperfusion in vivo 72
4.2.1 FAK 72
4.2.2 Pyk2 76
4.3 Phosphorylierung von FAK und Pyk2 nach ATP-Depletion und -Repletion in vitro 78
4.4 Auflösung und Reorganisation der fokalen Adhäsionskontakte nach ATP-Depletion
und-Repletion 80
4.5 Einfluss veränderter Osmolalität auf die Phosphorylierung von FAK und Pyk2 83
Inhaltsverzeichnis
4.6 Auswirkungen diuretischer Bedingungen auf die Phosphorylierung von FAK.
undPyk2 85
5. Zusammenfassung 88
6. Literaturverzeichnis 92
7. Anhang 119
7.1 Tabellarische Auflistung verwendeter Materialien 119
7.2 Abkürzungen - Glossar 124
7.3 Abbildungsverzeichnis 128
7.4 Tabellenverzeichnis 131
Lebenslauf 133
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Das akute Nierenversagen 1
1.1.1 Das ischämische akute Nierenversagen 2
1.1.2 Pathophysiologie des ischämischen akuten Nierenversagens 5
1.1.3 Mechanismen der Regeneration 7
1.2 Signaltransduktion durch Tyrosinkinasen 9
1.2.1 Focal Adhesion Kinase (FAK) 11
1.2.2 Proline-rich Tyrosine Kinase 2 (Pyk2) 17
1.3 Rolle von FAK und Pyk2 bei Ischämie und Reperfusion 19
1.4 Zielsetzung der Arbeit 21
2. Material und Methoden 22
2.1 Tierversuche und Tierhaltung 22
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2.2.1 Lösungen und Medien 24
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2.3 SDS-PAGE und Western Blot Analyse 29
2.3.1 Lösungen und Puffer 29
2.3.2 Probenaufbereitung 31
2.3.3 Methodik 32
2.4 Immunfluoreszenz 36
2.4.1 Lösungen und Zellaussaat 36
2.4.2 Methodik 36
2.5 Immunhistologie 37
2.5.1 Lösungen 37
2.5.2 Methodik 38
2.6 Präsentation der Daten und statistische Auswertung 39
Inhaltsverzeichnis
3, Ergebnisse 40
3.1 Intrarenale Verteilung von FAKund Pyk2 und deren Phosphorylierung 40
3.1.1 Gesamtmenge 40
3.1.2 Phosphorylierungsgrad 41
3.1.3 Immunhistologische Darstellung der FAK in Rattennieren 42
3.2 FAK nach Ischämie und Reperfusion in vivo 46
3.2.1 Cortex 46
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3.2.4 Immunhistologische Darstellung 49
3.3 Pyk2 nach Ischämie und Reperfusion in vivo 52
3.3.1 Cortex 52
3.3.2 Außenmark 53
3.3.3 Innenmark 53
3.4 FAK und Pyk2 bei ATP-Depletion und -Repletion in vitro 54
3.4.1 MDCK-Zellen 55
3.4.2 MTAL-Zellen 56
3.4.3 FAK in MDCK-Zellen bei lang dauernder ATP-Repletion 56
3.4.4 Immunfluoreszenzmikroskopische Darstellung der FAK in MDCK-Zellen 57
3.5 Auswirkung erhöhter Osmolalität auf die Phosphorylierung von FAK und Pyk2 64
3.5.1 MDCK-Zellen 64
3.5.2 IMCD3-Zellen 66
3.6 FAK und Pyk2 unter diuretischen Bedingungen 67
4. Diskussion 69
4.1 Intrarenale Verteilung von FAK und Pyk2 69
4.2 Phosphorylierung von FAK und Pyk2 bei Ischämie und Reperfusion in vivo 72
4.2.1 FAK 72
4.2.2 Pyk2 76
4.3 Phosphorylierung von FAK und Pyk2 nach ATP-Depletion und -Repletion in vitro 78
4.4 Auflösung und Reorganisation der fokalen Adhäsionskontakte nach ATP-Depletion
und-Repletion 80
4.5 Einfluss veränderter Osmolalität auf die Phosphorylierung von FAK und Pyk2 83
Inhaltsverzeichnis
4.6 Auswirkungen diuretischer Bedingungen auf die Phosphorylierung von FAK.
undPyk2 85
5. Zusammenfassung 88
6. Literaturverzeichnis 92
7. Anhang 119
7.1 Tabellarische Auflistung verwendeter Materialien 119
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