Interaktion von Snail mit Beta-Catenin und deren Bedeutung für den Wnt-Signalweg:
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1SUMMARY 1
2 ZUSAMMENFASSUNG 2
3 EINLEITUNG 3
3.1 Der Transkriptionsfaktor Snail 3
3.2 Der Wnt-Signalweg 8
3.3 Die Frodo/Dappcr Protein Familie 11
3.4 Zielsetzung 14
4 ERGEBNISSE 15
4.1 Snail aktiviert die TCF/ß-Catenin abhängige Transkription 15
4.2 Bedeutung der E-Cadherin Repression 16
4.3 Funktionelle Charakterisierung der Domänenstruktur von Snail 17
4.4 Einfluss von Snail auf die Stabilität von ß-Catenin 19
4.5 Interaktion von Snail mit ß-Catenin 20
4.6 Funktionelle Analyse der Interaktion von Snail mit ß-Catenin 22
4.7 Bedeutung von Snail für die Expression von Wnt-Zielgenen 24
4.7.1 Snail erhöht die Expression von Axin2/Conductin 24
4.7.2 Knockdown von Snail reduziert die Expression von Wnt-Zielgenen 26
4.8 Snail beeinflusst die ß-Catenin Lokalisation nicht 27
4.9 Synergie von Snail mit CREB-binding Protein (CBP) 29
4.9 Funktionelle Interaktion von Snail und Dapper2 30
5 DISKUSSION 35
5.1 Mögliche Mechanismen für die Snail-abhängige Aktivierung des Wnt- 35
Signalwegs
5.1.1 Erhöhung der Menge oder Stabilisierung von ß-Catenin 35
5.1.2 Veränderung der ß-Catenin-Lokalisation 37
5.1.3 Verstärkung der Fähigkeit von ß-Catenin zur transkriptioneilen Aktivierung 37
Inhaltsverzeichnis
5.2 Bedeutung von Snail für die Expression von VVnt-Zielgenen 40
5.3 Snail in Entwicklung und Tumorgenese 41
5.4 Funktionelle Interaktion von Snail mit Dapper2 42
5.4.1 Interaktion von Snail und Dapper2 42
5.4.2 Snail aktiviert den Wnt-Signalweg unabhängig von Dapper2 43
5.4.3 Dishevelled2 rekrutiert Snail in vesikuläre Strukturen 44
6 MATERIAL UND METHODEN 46
6.1 Material 46
6.1.1 Puffer und Lösungen 46
6.1.2 Oligonukleotide 50
6.1.2.1 Oligonukleotide zur Analyse der Genexpression 50
6.1.2.2 Oligonukleotide für Expressionsvektoren 51
6.1.2.3 Oligonukleotide zur Sequenzierung 51
6.1.2.3 Small interfering RNA Oligonukleotide 52
6.1.3 Weitere Reagenzien, Enzyme und Verbrauchsmaterial 52
6.1.4 Geräte 53
6.1.5 Organismen 54
6.1.6 Antikörper 54
6.1.7 Vektoren 55
6.2 Methoden 5g
6.2.1 Kultur und Transfektion von Säugerzellen 58
6.2.2 Luziferase Reporterexperimente 59
6.2.3 Zellextrakte, Koimmunpräzipitation und Western Blot 60
6.2.4 Immunfluoreszenzen 60
6.2.5 Yeast Two-Hybrid Screen 61
6.2.6 Vektoren 61
6.2.6.1 Snail Expressionsvektoren 61
6.2.6.2 ß-Catenin Vektoren 62
6.2.6.3 Dapper2 Expressionsvektoren 62
6.2.6.4 Yeast Two-Hybrid Bait Vektoren 63
7 LITERATUR 64
Inhaltsverzeichnis
8 ABKÜKZUNGSVERZEICHNIS 81
8.1 Abkürzungen 81
8.2 Einheiten 82
8.3 Vorsätze für Maßeinheiten 83
9 ANHANG 84
9.1 Vektorenkarten 84
9.1.1 pcDNA-Flag-Snail 84
9.1.2 pcDNA-Flag-Snail 1-151 85
9.1.3 pcDNA-Flag-Snail 152-264 86
9.1.4 pcDNA-Flag-SnailASNAG 87
9.1.5 GAL4-ß-CateninANT 88
9.1.6 GAL4-S33Y-ß-Catenin 89
9.1.7 pEGFP-Dapper2 90
9.1.8 pEGFP-Dapper2-822 91
9.1.9 pEGFP-Dapper2-1470 92
9.1.10 pcDNA3.1(+)/myc-His-Dapper2 93
9.1.11 pcDNA3.1(+)/myc-His-Dapper2-1470 94
9.1.12 pcDNA3.1(+)/myc-His-Dapper2-822 95
9.1.13 pBTM-Notl-Snail 96
9.1.14 pBTM-Notl-Slug 97
9.2 Freys Snail Yeast Two Hybrid Screen 98
93 Preys Slug Yeast Two Hybrid Screen 98
9.4 Expression der Flag-markierten Snailkonstrukte 99
9.5 Lokalisation von pcDNAmyc-822 und pcDNAmyc-1470 100
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1SUMMARY 1
2 ZUSAMMENFASSUNG 2
3 EINLEITUNG 3
3.1 Der Transkriptionsfaktor Snail 3
3.2 Der Wnt-Signalweg 8
3.3 Die Frodo/Dappcr Protein Familie 11
3.4 Zielsetzung 14
4 ERGEBNISSE 15
4.1 Snail aktiviert die TCF/ß-Catenin abhängige Transkription 15
4.2 Bedeutung der E-Cadherin Repression 16
4.3 Funktionelle Charakterisierung der Domänenstruktur von Snail 17
4.4 Einfluss von Snail auf die Stabilität von ß-Catenin 19
4.5 Interaktion von Snail mit ß-Catenin 20
4.6 Funktionelle Analyse der Interaktion von Snail mit ß-Catenin 22
4.7 Bedeutung von Snail für die Expression von Wnt-Zielgenen 24
4.7.1 Snail erhöht die Expression von Axin2/Conductin 24
4.7.2 Knockdown von Snail reduziert die Expression von Wnt-Zielgenen 26
4.8 Snail beeinflusst die ß-Catenin Lokalisation nicht 27
4.9 Synergie von Snail mit CREB-binding Protein (CBP) 29
4.9 Funktionelle Interaktion von Snail und Dapper2 30
5 DISKUSSION 35
5.1 Mögliche Mechanismen für die Snail-abhängige Aktivierung des Wnt- 35
Signalwegs
5.1.1 Erhöhung der Menge oder Stabilisierung von ß-Catenin 35
5.1.2 Veränderung der ß-Catenin-Lokalisation 37
5.1.3 Verstärkung der Fähigkeit von ß-Catenin zur transkriptioneilen Aktivierung 37
Inhaltsverzeichnis
5.2 Bedeutung von Snail für die Expression von VVnt-Zielgenen 40
5.3 Snail in Entwicklung und Tumorgenese 41
5.4 Funktionelle Interaktion von Snail mit Dapper2 42
5.4.1 Interaktion von Snail und Dapper2 42
5.4.2 Snail aktiviert den Wnt-Signalweg unabhängig von Dapper2 43
5.4.3 Dishevelled2 rekrutiert Snail in vesikuläre Strukturen 44
6 MATERIAL UND METHODEN 46
6.1 Material 46
6.1.1 Puffer und Lösungen 46
6.1.2 Oligonukleotide 50
6.1.2.1 Oligonukleotide zur Analyse der Genexpression 50
6.1.2.2 Oligonukleotide für Expressionsvektoren 51
6.1.2.3 Oligonukleotide zur Sequenzierung 51
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6.2.2 Luziferase Reporterexperimente 59
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6.2.4 Immunfluoreszenzen 60
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7 LITERATUR 64
Inhaltsverzeichnis
8 ABKÜKZUNGSVERZEICHNIS 81
8.1 Abkürzungen 81
8.2 Einheiten 82
8.3 Vorsätze für Maßeinheiten 83
9 ANHANG 84
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