Mit TRPV4 interagierende Proteine:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
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| Beschreibung: | Freiburg (Breisgau), Univ., Diss., 2006 |
| Beschreibung: | II, 55 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm |
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|---|---|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Die autosomal dominante polyzystische Nierenerkrankung (ADPKD) 1
1.1.1 Epidemiologie, Symptome, Therapie 1
1.1.2 Bekannte genetische und molekulare Hintergründe 2
1.2 Die Familie der TRP Ionenkanäle 3
1.2.1 Überblick über den TRPV4 Kanal 6
1.3 Die Regulation von lonenkanälen 8
1.4 Der Yeast 2 Hybrid Screen 9
1.5 Zielsetzung der Doktorarbeit 10
2 Materialien und Methoden 11
2.1 DNA Subklonierungen 11
2.1.1 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) 11
2.1.2 Phenolextraktion des PCR Produkts 12
2.1.3 Ligation 12
2.1.4 Transformation von rekombinanter DNA in Escherichia coli 13
2.1.5 Minikultur und Minipräparation 13
2.1.6 Maxikultur und Maxipräparation: 14
2.1.7 Konzentrationsbestimmung von DNA 15
2.1.8 Restriktionsverdau und Gelelektrophorese 15
2.1.9 Sequenzierung von DNA 16
2.2 Zellkultur und Subkultivierung 16
2.2.1 Die Kultivierung von Hek 293T Zellen 16
2.2.2 Die Kultivierung von Heia Zellen 17
2.3 Transfektion 17
2.3.1 Die Transfektion von Hek 293T Zellen 17
2.3.2 Die Transfektion von Heia Zellen 17
2.4 Ernten von Zellen 17
2.5 Koimmunpräzipitation 18
2.6 Ubiquitination Assay 18
2.7 SDS Polyacrylamid Gelelektrophorese (SDS PAGE) 19
2.8 Immunoblot (Western Blot) 20
2.9 Immunfluoreszenz 20
2.10 Verwendete Antikörper und Kügelchen 22
2.11 Verwendete Tags 22
3 Ergebnisse 23
3.1 Interaktionen von TRPV4 23
3.1.1 Interaktion mit Beclin 1 23
3.1.2 Interaktion mit OS 9 25
Inhaltsverzeichnis
II
3.1.3 Interaktion mit Vps39 / Vam6 27
3.1.4 Interaktion mitAnkrd11 27
3.2 Die Ubiquitinierung des N Terminus von TRPV4 28
3.3 Koexpression von Beclin 1 führt zur Abnahme von TRPV4 31
4 Diskussion 34
4.1 Die Suche nach Interaktionspartnern von TRPV4 34
4.2 Die Interaktion von TRPV4 und OS 9 und deren mögliche Auswirkungen..34
4.3 Die Folgen der Interaktion von Beclin 1 und TRPV4 37
4.4 Mögliche Regulation des TRPV4 Kanals 40
5 Zusammenfassung 42
6 Literaturverzeichnis 43
7 Danksagung 51
8 Anhang 52
8.1 Abbildungs und Tabellenverzeichnis 52
8.2 Abkürzungsverzeichnis 53
8.3 Verwendete Geräte und Materialien 54
8.4 Lebenslauf 55
Inhaltsverzeichnis
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Die autosomal dominante polyzystische Nierenerkrankung (ADPKD) 1
1.1.1 Epidemiologie, Symptome, Therapie 1
1.1.2 Bekannte genetische und molekulare Hintergründe 2
1.2 Die Familie der TRP Ionenkanäle 3
1.2.1 Überblick über den TRPV4 Kanal 6
1.3 Die Regulation von lonenkanälen 8
1.4 Der Yeast 2 Hybrid Screen 9
1.5 Zielsetzung der Doktorarbeit 10
2 Materialien und Methoden 11
2.1 DNA Subklonierungen 11
2.1.1 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) 11
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2.1.6 Maxikultur und Maxipräparation: 14
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2.1.9 Sequenzierung von DNA 16
2.2 Zellkultur und Subkultivierung 16
2.2.1 Die Kultivierung von Hek 293T Zellen 16
2.2.2 Die Kultivierung von Heia Zellen 17
2.3 Transfektion 17
2.3.1 Die Transfektion von Hek 293T Zellen 17
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2.4 Ernten von Zellen 17
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2.10 Verwendete Antikörper und Kügelchen 22
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3 Ergebnisse 23
3.1 Interaktionen von TRPV4 23
3.1.1 Interaktion mit Beclin 1 23
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Inhaltsverzeichnis
II
3.1.3 Interaktion mit Vps39 / Vam6 27
3.1.4 Interaktion mitAnkrd11 27
3.2 Die Ubiquitinierung des N Terminus von TRPV4 28
3.3 Koexpression von Beclin 1 führt zur Abnahme von TRPV4 31
4 Diskussion 34
4.1 Die Suche nach Interaktionspartnern von TRPV4 34
4.2 Die Interaktion von TRPV4 und OS 9 und deren mögliche Auswirkungen.34
4.3 Die Folgen der Interaktion von Beclin 1 und TRPV4 37
4.4 Mögliche Regulation des TRPV4 Kanals 40
5 Zusammenfassung 42
6 Literaturverzeichnis 43
7 Danksagung 51
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8.1 Abbildungs und Tabellenverzeichnis 52
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