Zellproliferation, Apoptose und Expression von bcl-2 und bax in der normalen menschlichen Brustdrüse: Untersuchungen zum Einfluss von Laktation, ovariellem Zyklus und oraler Antikonzeption
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|---|---|
| adam_text | Inhalt
1. Einleitung
2. Wissenschaftlicher Hintergrund
2.1 Programmierter Zelltod (PCD) / Apoptose
2.2 Regelmechanismen des Zellersatzes: Die „bcl 2 Familie
2.3 Proliferation und Ki 67
2.4 Apoptose und Proliferation in der ruhenden und laktierenden
Brustdrüse
2.5 Bcl 2 in den zyklusabhängigen Epithelveränderungen der Mamma
2.6 Einfluss oraler Antikonzeptiva und des Stillens auf den
Zellumsatz im Epithel der Brustdrüse
2.7 Klinischer Hintergrund
2.8 Bcl 2 und bax in der Karzinogenese des Brustdrüsenepithels
2.9 Zusammenfassung
3. Fragestellung
4. Material und Methoden
4.1 Material
4.2 Methoden
4.2.1 Präparatfixation
4.2.2 Histologische Aufarbeitung
4.2.3 Histochemische Methoden.
4.2.3.1 Hämatoxylin Eosin Färbung
4.2.3.2 Alcianblau Färbung
4.2.3.3 Massons Trichrom Färbung
4.2.3.4 Periodic Acid Schiff Färbung (PAS)
INHALT
4.2.4 Immunhistochemische Methoden
4.2.4.1 Grundlagen der Immunperoxidasemethode
4.2.4.1.1 Direkte Methode
4.2.4.1.2 Indirekte Methode
4.2.4.1.3 Grundlagen der Avidin Biotin Methode
4.2.4.1.4 Die PAP Methode
4.2.4.1.5 Die APAAP Methode
4.2.4.2 Grundzüge vorbereitender Schritte
4.2.4.2.1 Blockierung endogener Gewebsperoxidasen
4.2.4.2.2 Vorbehandlung mit Mikrowellen
4.2.4.2.3 Präinkubation mit Normalserum
4.2.4.3 Die Primärantikörper
4.2.4.3.1 Bcl 2
4.2.4.3.2 Bax
4.2.4.3.3 Ki 67
4.2.4.3.4 Zytokeratine
4.2.4.3.4.1 CK14
4.2.4.3.4.2 CK19
4.2.4.3.5 Zelltypisierung
4.2.4.3.5.1 CD68
4.2.4.3.6 Grundlagen der Lektinhistochemie
4.2.5 Protokoll der Immunhistochemie
4.2.6 Doppelfärbungen
4.2.7 Enzymatische Methoden TUNEL
4.2.8 Protokoll der Lektinhistochemie
4.2.9 Kontrollen
4.2.10 Mikroskopische und quantitative Auswertung
4.2.10.1 Mikroskopische und quantitative Auswertung Ki 67 positiver
Zellen
Inhalt
4.2.10.2 Mikroskopische und quantitative Auswertung TUNEL positiver
Zellen
4.2.10.3 Mikroskopische und quantitative Auswertung bcl 2 positiver und
bax positiver Zellen
4.2.11 Statistik
4.2.11.1 Statistische Verfahren
4.2.11.2 Statistische Gruppen
5. Ergebnisse
i
5.1 Klinische Daten
5.2 Histologische, histochemische und lectinhistochemische Befunde
5.2.1 Befunde der Hämatoxylin Eosin Färbung
5.2.2 Befunde der Alcianblau Färbung
5.2.3 Befunde deer Lektinhistochemie (HPA und PNA)
5.2.4 Befunde der Massons Trichrom Färbung
5.2.5 Befunde der PAS Färbung
5.3 Befunde der immunhistochemischen und enzymatischen
Verfahren
5.3.1 Differenzierung von Zelltypen (CK14, CK19, CD68)
5.3.2 Ki 67
5.3.3 TUNEL Reaktion
5.3.4 Bcl 2
5.3.5 Bax
5.4 Ergebnisse der statistischen Auswertung
5.4.1 Statistische Auswertung der Proliferationsaktivität
5.4.1.1 Die Proliferationsaktivität im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.1.2 Proliferationsaktivität unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.1.3 Proliferationsaktivität unter Einfluss des Stillens
Inhalt
5.4.1.4 Proliferationsaktivität unter Einfluss des Lebensalters
5.4.1.5 Korrelation der Proliferationsaktivität mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren
5.4.2 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne
5.4.2.1 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne im
Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.2.2 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne unter
Einfluss des Stillens
5.4.2.3 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne unter
Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.2.4 Korrelation TUNEL positiv markierter Zellkerne mit Ergebnissen
der immunhistochemischen Verfahren und des Lebensalters
5.4.2.5 Quantitativ morphologische Auswertung apoptotischer Zellkerne
im Vergleich zu den quantitativen Ergebnissen des TUNEL
Verfahrens
5.4.2.6 Korrelation von morphologisch bestimmten Apoptosevorgängen
mit Ergebnissen immunhistochemischer Verfahren und dem
Lebensalter
5.4.3 Statistische Auswertung der bcl 2 Expresssion
5.4.3.1 Bcl 2 Expression im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.3.2 Bcl 2 Expression unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.3.3 Bcl 2 Expression unter Einfluss des Stillens
5.4.3.4 Korrelation der bcl 2 Expression mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren und dem
Lebensalter
5.4.4 Statistische Auswertung der bax Expression
5.4.4.1 Bax Expression im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.4.2 Bax Expression unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.4.3 Bax Expression unter Einfluss des Stillens
Inhalt
5.4.4.4 Korrelation der bax Expression mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren und dem
Lebensalters
5.4.5 Zusammenfassende Betrachtung der bcl 2 und bax Expression
im Verlauf des ovariellen Zyklus
6. Diskussion
6.1 Diskussion morphologischer Ergebnisse
6.2 Diskussion statistischer Ergebnisse
6.2.1 Diskussion der Proliferationsaktivität
6.2.2 Diskussion des TUNEL Verfahrens und der quantitativen
Auswertung apoptotischer Zellkerne
6.2.3 Diskussion der Expression der Regulationsproteine bcl 2 und bax
7. Zusammenfassung
8. Literaturverzeichnis
9. Anhang
10. Danksagung
11. Lebenslauf
|
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Inhalt
1. Einleitung
2. Wissenschaftlicher Hintergrund
2.1 Programmierter Zelltod (PCD) / Apoptose
2.2 Regelmechanismen des Zellersatzes: Die „bcl 2 Familie"
2.3 Proliferation und Ki 67
2.4 Apoptose und Proliferation in der ruhenden und laktierenden
Brustdrüse
2.5 Bcl 2 in den zyklusabhängigen Epithelveränderungen der Mamma
2.6 Einfluss oraler Antikonzeptiva und des Stillens auf den
Zellumsatz im Epithel der Brustdrüse
2.7 Klinischer Hintergrund
2.8 Bcl 2 und bax in der Karzinogenese des Brustdrüsenepithels
2.9 Zusammenfassung
3. Fragestellung
4. Material und Methoden
4.1 Material
4.2 Methoden
4.2.1 Präparatfixation
4.2.2 Histologische Aufarbeitung
4.2.3 Histochemische Methoden.
4.2.3.1 Hämatoxylin Eosin Färbung
4.2.3.2 Alcianblau Färbung
4.2.3.3 Massons Trichrom Färbung
4.2.3.4 Periodic Acid Schiff Färbung (PAS)
INHALT
4.2.4 Immunhistochemische Methoden
4.2.4.1 Grundlagen der Immunperoxidasemethode
4.2.4.1.1 Direkte Methode
4.2.4.1.2 Indirekte Methode
4.2.4.1.3 Grundlagen der Avidin Biotin Methode
4.2.4.1.4 Die PAP Methode
4.2.4.1.5 Die APAAP Methode
4.2.4.2 Grundzüge vorbereitender Schritte
4.2.4.2.1 Blockierung endogener Gewebsperoxidasen
4.2.4.2.2 Vorbehandlung mit Mikrowellen
4.2.4.2.3 Präinkubation mit Normalserum
4.2.4.3 Die Primärantikörper
4.2.4.3.1 Bcl 2
4.2.4.3.2 Bax
4.2.4.3.3 Ki 67
4.2.4.3.4 Zytokeratine
4.2.4.3.4.1 CK14
4.2.4.3.4.2 CK19
4.2.4.3.5 Zelltypisierung
4.2.4.3.5.1 CD68
4.2.4.3.6 Grundlagen der Lektinhistochemie
4.2.5 Protokoll der Immunhistochemie
4.2.6 Doppelfärbungen
4.2.7 Enzymatische Methoden TUNEL
4.2.8 Protokoll der Lektinhistochemie
4.2.9 Kontrollen
4.2.10 Mikroskopische und quantitative Auswertung
4.2.10.1 Mikroskopische und quantitative Auswertung Ki 67 positiver
Zellen
Inhalt
4.2.10.2 Mikroskopische und quantitative Auswertung TUNEL positiver
Zellen
4.2.10.3 Mikroskopische und quantitative Auswertung bcl 2 positiver und
bax positiver Zellen
4.2.11 Statistik
4.2.11.1 Statistische Verfahren
4.2.11.2 Statistische Gruppen
5. Ergebnisse
i
5.1 Klinische Daten
5.2 Histologische, histochemische und lectinhistochemische Befunde
5.2.1 Befunde der Hämatoxylin Eosin Färbung
5.2.2 Befunde der Alcianblau Färbung
5.2.3 Befunde deer Lektinhistochemie (HPA und PNA)
5.2.4 Befunde der Massons Trichrom Färbung
5.2.5 Befunde der PAS Färbung
5.3 Befunde der immunhistochemischen und enzymatischen
Verfahren
5.3.1 Differenzierung von Zelltypen (CK14, CK19, CD68)
5.3.2 Ki 67
5.3.3 TUNEL Reaktion
5.3.4 Bcl 2
5.3.5 Bax
5.4 Ergebnisse der statistischen Auswertung
5.4.1 Statistische Auswertung der Proliferationsaktivität
5.4.1.1 Die Proliferationsaktivität im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.1.2 Proliferationsaktivität unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.1.3 Proliferationsaktivität unter Einfluss des Stillens
Inhalt
5.4.1.4 Proliferationsaktivität unter Einfluss des Lebensalters
5.4.1.5 Korrelation der Proliferationsaktivität mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren
5.4.2 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne
5.4.2.1 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne im
Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.2.2 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne unter
Einfluss des Stillens
5.4.2.3 Statistische Auswertung TUNEL positiv markierter Zellkerne unter
Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.2.4 Korrelation TUNEL positiv markierter Zellkerne mit Ergebnissen
der immunhistochemischen Verfahren und des Lebensalters
5.4.2.5 Quantitativ morphologische Auswertung apoptotischer Zellkerne
im Vergleich zu den quantitativen Ergebnissen des TUNEL
Verfahrens
5.4.2.6 Korrelation von morphologisch bestimmten Apoptosevorgängen
mit Ergebnissen immunhistochemischer Verfahren und dem
Lebensalter
5.4.3 Statistische Auswertung der bcl 2 Expresssion
5.4.3.1 Bcl 2 Expression im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.3.2 Bcl 2 Expression unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.3.3 Bcl 2 Expression unter Einfluss des Stillens
5.4.3.4 Korrelation der bcl 2 Expression mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren und dem
Lebensalter
5.4.4 Statistische Auswertung der bax Expression
5.4.4.1 Bax Expression im Verlauf des ovariellen Zyklus
5.4.4.2 Bax Expression unter Einfluss oraler Antikonzeptiva
5.4.4.3 Bax Expression unter Einfluss des Stillens
Inhalt
5.4.4.4 Korrelation der bax Expression mit Ergebnissen der
immunhistochemischen und enzymatischen Verfahren und dem
Lebensalters
5.4.5 Zusammenfassende Betrachtung der bcl 2 und bax Expression
im Verlauf des ovariellen Zyklus
6. Diskussion
6.1 Diskussion morphologischer Ergebnisse
6.2 Diskussion statistischer Ergebnisse
6.2.1 Diskussion der Proliferationsaktivität
6.2.2 Diskussion des TUNEL Verfahrens und der quantitativen
Auswertung apoptotischer Zellkerne
6.2.3 Diskussion der Expression der Regulationsproteine bcl 2 und bax
7. Zusammenfassung
8. Literaturverzeichnis
9. Anhang
10. Danksagung
11. Lebenslauf |
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