Analyse des Pathogenitätsfaktors CagA von verschiedenen klinischen Helicobacter pylori Isolaten:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Erklärung zum Promotionsverfahren II
Abkürzungsverzeichnis V
1 Einleitung 1
1.1 Allgemeines 1
1.2 Infektblogie und Epidemiologie 2
1.3 Pathogenität 5
1.4 Diagnostik und Therapie 17
2 Zielsetzung und allgemeine Vorgehensweise 22
3 Vorarbeiten 23
4 Material und Methoden 24
4.1 Helicobacter pylori 24
4.1.1 Helicobacter pylori-SXämme 24
4.1.2 Kultivierung 24
4.2 Molekularbiologische Verfahren 24
4.2.1 Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren 24
4.2.2 Klonierung und Transformation 24
4.2.3 Polymerase-Ketten-Reaktionen und PCR-Bedingungen 25
4.2.4 Oligonukleotide 25
4.2.5 Screening der Stämme auf cagA und andere Pathogenitätsfaktoren.. 25
4.2.6 Nachweis der Expression von CagA 26
4.2.7 PCR zur Sequenzierung von cagA 26
4.2.8 Sequenzierung 30
4.3 Infektionsversuche 33
4.3.1 IL-8-Bildung von AGS-Zellen nach Infektion mit Hp 33
4.3.2 Hummingbird-Phänotyp 34
4.4 Computerprogramme und Datenbanken 34
4.5 Pufferund Reagenzien 35
5 Ergebnisse 36
5.1 Screening 36
5.2 Sequenzierung 38
5.3 Aufbau der hypervariablen carboxyterminalen Region von CagA 40
5.4 Phosphorylierungsmotive von CagA 42
5.5 IL-8-lnduktion durch Hp 45
5.6 Hummingbird Phänotyp 46
5.7 Korrelation von babA2 und Hummingbird-Phänotyp 47
5.8 Korrelation von IL-8-lnduktion und Hummingbird-Phänotyp 47
III
5.9 Korrelation der Repeat-Sequenzen und der Y-972 Motive zum
Hummingbird-Phänotyp 48
5.10 Korrelation der Repeat-Sequenzen und der Y-972 Motive zu den
verschiedenen Hp-assoziierten Krankheitsbildern 49
6 Diskussion 50
6.1 Helicobacter pytor/-Stämme 50
6.2 Screening 51
6.3 Sequenzierung und Analyse des Aufbaus der hypervariablen
carboxyterminalen Region von CagA 57
6.4 Repeat-Sequenzen und Phosphorylierungmotive von CagA 59
6.5 Neue Phosphorylierungsmotive von CagA 65
6.6 IL-8-lnduktion durch Hp 66
6.7 Korrelation von IL-8-lnduktion und Hummingbird-Phänotyp 69
6.8 Korrelation von CagA-Varianten zu den verschiedenen Hp-assoziierten
Krankheitsbildem 71
7 Zusammenfassung 75
Anhang 78
Danksagung 79
Abbildungsverzeichnis 80
Tabellenverzeichnis 80
Literaturverzeichnis 81
IV
|
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Inhaltsverzeichnis
Erklärung zum Promotionsverfahren II
Abkürzungsverzeichnis V
1 Einleitung 1
1.1 Allgemeines 1
1.2 Infektblogie und Epidemiologie 2
1.3 Pathogenität 5
1.4 Diagnostik und Therapie 17
2 Zielsetzung und allgemeine Vorgehensweise 22
3 Vorarbeiten 23
4 Material und Methoden 24
4.1 Helicobacter pylori 24
4.1.1 Helicobacter pylori-SXämme 24
4.1.2 Kultivierung 24
4.2 Molekularbiologische Verfahren 24
4.2.1 Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren 24
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4.3.1 IL-8-Bildung von AGS-Zellen nach Infektion mit Hp 33
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4.5 Pufferund Reagenzien 35
5 Ergebnisse 36
5.1 Screening 36
5.2 Sequenzierung 38
5.3 Aufbau der hypervariablen carboxyterminalen Region von CagA 40
5.4 Phosphorylierungsmotive von CagA 42
5.5 IL-8-lnduktion durch Hp 45
5.6 Hummingbird Phänotyp 46
5.7 Korrelation von babA2 und Hummingbird-Phänotyp 47
5.8 Korrelation von IL-8-lnduktion und Hummingbird-Phänotyp 47
III
5.9 Korrelation der Repeat-Sequenzen und der Y-972 Motive zum
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5.10 Korrelation der Repeat-Sequenzen und der Y-972 Motive zu den
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6 Diskussion 50
6.1 Helicobacter pytor/-Stämme 50
6.2 Screening 51
6.3 Sequenzierung und Analyse des Aufbaus der hypervariablen
carboxyterminalen Region von CagA 57
6.4 Repeat-Sequenzen und Phosphorylierungmotive von CagA 59
6.5 Neue Phosphorylierungsmotive von CagA 65
6.6 IL-8-lnduktion durch Hp 66
6.7 Korrelation von IL-8-lnduktion und Hummingbird-Phänotyp 69
6.8 Korrelation von CagA-Varianten zu den verschiedenen Hp-assoziierten
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