Charakterisierung eines nicht selektiven Kationenkanals in Epithelzellen des Pansens von Schafen: Bedeutung für die Osmoregulation der Pansenflüssigkeit
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch & Buch Verl.
2006
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Veterinärmedizin
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 143 S. graph. Darst. 210 mm x 148 mm |
| ISBN: | 9783866641754 3866641753 |
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG.......................................................................................................1
2 LITERATUR........................................................................................................4
2.1 Natriumtransport über das Pansenepithel....................................................4
2.2 Natriumtransport über die apikale Membran................................................5
2.2.1 Elektroneutraler Natriumtransport (NHE)..............................................6
2.2.2 Natrium-Glukose-Cotransporter............................................................7
2.2.3 Elektrogener Natriumtransport..............................................................8
2.2.4 Unterschiede zum klassischen epithelialen Natriumtransport...............9
2.2.5 Nicht selektiver Kationenkanal............................................................11
2.3 Wirkungsmechanismen von Kalium...........................................................12
2.3.1 Wirkung von Kalium auf die Potentialdifferenz....................................12
2.3.2 Wirkung von Kalium auf den Magnesiumtransport..............................13
2.3.3 Wirkung von Kalium auf den Natriumtransport....................................14
2.3.4 Wechselwirkungen von Kalium, Magnesium und Natrium..................15
2.4 Wirkung von cAMP auf den Natriumtransport und den Isc am
Pansenepithel.............................................................................................17
2.4.1 Wirkung von cAMP auf den elektrogenen Transport weiterer
Ionen über das Pansenepithel.............................................................19
2.5 Zusammenfassung für die eigene Fragestellung........................................21
3 MATERIAL UND METHODEN..........................................................................22
3.1 Methodenübersicht.....................................................................................22
3.2 Material......................................................................................................22
3.2.1 Versuchsgewebe.................................................................................22
3.3 Methoden...................................................................................................23
3.3.1 In vitro Kultivierung primärer Pansenzelten.........................................23
3.3.2 Immunzytochemiscner Nachweis von Zellen epithelialen Ursprungs.. 26
3.3.3 Etektrophysiotogische Messungen......................................................26
3.3.3.1 Patch-Clamp Technik......................................................................26
3.3.3.2 Messprinzip.....................................................................................28
3.3.3.3 Patch-Clamp-Konfigurationen..........................................................28
3.3.4 Der Patch-Clamp Messaufbau............................................................30
3.3.4.1 Der Messplatz..................................................................................30
3.3.4.2 Elektronik und Aufnahme der Messdaten........................................32
3.3.4.3 Herstellung der Glaspipetten und Messelektroden..........................33
3.3.5 Vorzeichenkonvention.........................................................................34
3.3.6 Analyse der Patch-Clamp-Daten.........................................................35
3.3.6.1 Strom-Spannungs-Kurven...............................................................35
3.3.6.2 Pulsprotokolle..................................................................................36
3.3.7 Praktische Durchführung eines Patch-Clamp-Experiments.................37
3.3.8 Zusammensetzung der Pipetten- und Perfusionslösungen.................39
3.3.9 Statistische Analyse............................................................................40
ERGEBNISSE...................................................................................................42
4.1 fmmunzytochemische Charakterisierung der aus dem Pansenepithel
isolierten Zellen..............................................................................................42
4.2 Allgemeine Identifizierung und Trennung der lonenströme........................43
4.3 Identifizierung der lonenströme über die Membran....................................44
4.3.1 Einfluss von extrazellulärem Chlorid...................................................47
4.3.2 Einfluss von intrazellulärem Kalium.....................................................50
4.3.3 Einfluss von intrazellulärem Cäsium...................................................51
4.3.3.1 Cäsiumleitfähigkeit..........................................................................52
4.3.3.2 Einfluss von Cäsium auf die Kaliumleitfähigkeit...............................52
4.3.4 Einfluss von intrazellulärem Chlorid....................................................54
4.3.5 Einfluss von extrazellulärem Natrium..................................................55
4.3.6 Zusammenfassung..............................................................................58
4.4 Effekt von cAMP.........................................................................................59
4.4.1 Einfluss von extrazellulärem Natrium..................................................61
4.4.2 Einfluss von extrazellulärem Calcium und Magnesium.......................64
4.4.3 Einfluss von extrazellularem Magnesium............................................66
4.4.4 Einfluss von intrazellulärem Magnesium.............................................67
4.5 cGMP.........................................................................................................70
4.6 Effekte von PGE2, Forskolin und Theophyllin.............................................71
4.6.1 Prostaglandin E2 (PGE2).....................................................................71
4.6.2 Forskolin..............................................................................................77
4.6.3 Theophyllin..........................................................................................79
4.6.4 Zusammenfassung..............................................................................80
4.7 Einzelkanalmessungen..............................................................................81
4.8 Einsatz von Kanalblockem.........................................................................89
4.8.1 Amilorid...............................................................................................89
4.8.2 Verapamil............................................................................................90
! DISKUSSION....................................................................................................92
5.1. Material und Methoden...............................................................................93
5.1.1 Lösungen............................................................................................93
5.1.2 Liquid Junction Potentials....................................................................94
5.1.3 Die Whole-Cell-Konfiguration..............................................................95
5.1.4 Die Inside-Out-Konfiguration...............................................................96
5.1.5 Die Outside-Out-Konfiguration............................................................96
5.2 Identifizierung der lonenströme über die Membran....................................97
5.2.1 Chlorid.................................................................................................97
5.2.2 Cäsium................................................................................................99
5.2.3 Kalium...............................................................................................100
5.2.4 Natrium..............................................................................................101
5.2.5 Selektivität des NSCC.......................................................................102
5.3 Effekte von cAMP.....................................................................................105
5.4 Effekte von PGE2, Forskolin und Theophyllin...........................................108
5.5 SkjnaKransduktion und Mikrodomäne......................................................109
5.5.1 Direkter Effekt von cAMP auf den NSCC..........................................114
5.6 EinzeBcanaluntersuchungen.....................................................................114
5.7 Schlussfolgerungen..................................................................................116
5.7.1 Mögliche physiologische Bedeutung und Entwicklung eines
Zellmodells........................................................................................117
5.7.2 Molekularbiologische Charakterisierung...........................................120
6 ZUSAMMENFASSUNG / SUMMARY.............................................................122
7 LITERATURVERZEICHNIS............................................................................126
8 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS.......................................................................138
Í 9 ANHANG.........................................................................................................139
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG.1
2 LITERATUR.4
2.1 Natriumtransport über das Pansenepithel.4
2.2 Natriumtransport über die apikale Membran.5
2.2.1 Elektroneutraler Natriumtransport (NHE).6
2.2.2 Natrium-Glukose-Cotransporter.7
2.2.3 Elektrogener Natriumtransport.8
2.2.4 Unterschiede zum klassischen epithelialen Natriumtransport.9
2.2.5 Nicht selektiver Kationenkanal.11
2.3 Wirkungsmechanismen von Kalium.12
2.3.1 Wirkung von Kalium auf die Potentialdifferenz.12
2.3.2 Wirkung von Kalium auf den Magnesiumtransport.13
2.3.3 Wirkung von Kalium auf den Natriumtransport.14
2.3.4 Wechselwirkungen von Kalium, Magnesium und Natrium.15
2.4 Wirkung von cAMP auf den Natriumtransport und den Isc am
Pansenepithel.17
2.4.1 Wirkung von cAMP auf den elektrogenen Transport weiterer
Ionen über das Pansenepithel.19
2.5 Zusammenfassung für die eigene Fragestellung.21
3 MATERIAL UND METHODEN.22
3.1 Methodenübersicht.22
3.2 Material.22
3.2.1 Versuchsgewebe.22
3.3 Methoden.23
3.3.1 In vitro Kultivierung primärer Pansenzelten.23
3.3.2 Immunzytochemiscner Nachweis von Zellen epithelialen Ursprungs. 26
3.3.3 Etektrophysiotogische Messungen.26
3.3.3.1 Patch-Clamp Technik.26
3.3.3.2 Messprinzip.28
3.3.3.3 Patch-Clamp-Konfigurationen.28
3.3.4 Der Patch-Clamp Messaufbau.30
3.3.4.1 Der Messplatz.30
3.3.4.2 Elektronik und Aufnahme der Messdaten.32
3.3.4.3 Herstellung der Glaspipetten und Messelektroden.33
3.3.5 Vorzeichenkonvention.34
3.3.6 Analyse der Patch-Clamp-Daten.35
3.3.6.1 Strom-Spannungs-Kurven.35
3.3.6.2 Pulsprotokolle.36
3.3.7 Praktische Durchführung eines Patch-Clamp-Experiments.37
3.3.8 Zusammensetzung der Pipetten- und Perfusionslösungen.39
3.3.9 Statistische Analyse.40
\ ERGEBNISSE.42
4.1 fmmunzytochemische Charakterisierung der aus dem Pansenepithel
isolierten Zellen.42
4.2 Allgemeine Identifizierung und Trennung der lonenströme.43
4.3 Identifizierung der lonenströme über die Membran.44
4.3.1 Einfluss von extrazellulärem Chlorid.47
4.3.2 Einfluss von intrazellulärem Kalium.50
4.3.3 Einfluss von intrazellulärem Cäsium.51
4.3.3.1 Cäsiumleitfähigkeit.52
4.3.3.2 Einfluss von Cäsium auf die Kaliumleitfähigkeit.52
4.3.4 Einfluss von intrazellulärem Chlorid.54
4.3.5 Einfluss von extrazellulärem Natrium.55
4.3.6 Zusammenfassung.58
4.4 Effekt von cAMP.59
4.4.1 Einfluss von extrazellulärem Natrium.61
4.4.2 Einfluss von extrazellulärem Calcium und Magnesium.64
4.4.3 Einfluss von extrazellularem Magnesium.66
4.4.4 Einfluss von intrazellulärem Magnesium.67
4.5 cGMP.70
4.6 Effekte von PGE2, Forskolin und Theophyllin.71
4.6.1 Prostaglandin E2 (PGE2).71
4.6.2 Forskolin.77
4.6.3 Theophyllin.79
4.6.4 Zusammenfassung.80
4.7 Einzelkanalmessungen.81
4.8 Einsatz von Kanalblockem.89
4.8.1 Amilorid.89
4.8.2 Verapamil.90
! DISKUSSION.92
5.1. Material und Methoden.93
5.1.1 Lösungen.93
5.1.2 Liquid Junction Potentials.94
5.1.3 Die Whole-Cell-Konfiguration.95
5.1.4 Die Inside-Out-Konfiguration.96
5.1.5 Die Outside-Out-Konfiguration.96
5.2 Identifizierung der lonenströme über die Membran.97
5.2.1 Chlorid.97
5.2.2 Cäsium.99
5.2.3 Kalium.100
5.2.4 Natrium.101
5.2.5 Selektivität des NSCC.102
5.3 Effekte von cAMP.105
5.4 Effekte von PGE2, Forskolin und Theophyllin.108
5.5 SkjnaKransduktion und Mikrodomäne.109
5.5.1 Direkter Effekt von cAMP auf den NSCC.114
5.6 EinzeBcanaluntersuchungen.114
5.7 Schlussfolgerungen.116
5.7.1 Mögliche physiologische Bedeutung und Entwicklung eines
Zellmodells.117
5.7.2 Molekularbiologische Charakterisierung.120
6 ZUSAMMENFASSUNG / SUMMARY.122
7 LITERATURVERZEICHNIS.126
8 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS.138
Í 9 ANHANG.139 |
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