Liposomaler Gentransfer in retinales Pigmentepithel:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Bibliographische Beschreibung 2
Zusammenfassung 3
Inhaltsverzeichnis 5
1 Einleitung 7
1.1 Molekulare Pathologie 7
1.1.1 Genetische Erkrankungen 7
1.2 Ziele der Gentechnik 9
1.2.1 Therapiestrategien 9
1.3 Gentransfer 11
1.3.1 Anforderungen an ein Carriersystem 11
1.3.2 Biologische Carriersysteme 12
1.3.3 Physikalische Methoden des Gentransfers 12
1.3.4 Physikochemische Gentransfersysteme 13
1.4 DNA für die liposomale Gentherapie 18
1.4.1 Promotoren 19
1.4.2 Reportergene 19
1.4.3 DNA Qualität 20
1.4.4 DNA und Lipofektion 20
2 Zielstellung der Arbeit 25
3 Materialien und Methoden 26
3.1 Materialien 26
3.1.1 Chemikalien 26
3.1.2 Kits 26
3.1.3 Puffer, Medien und Lösungen 27
3.1.4 Geräte 28
3.1.5 Software 29
3.1.6 Biologische Materialien 29
3.2 Methoden 30
3.2.1 Molekularbiologische Methoden 30
3.2.2 Methoden für die Transfektionsversuche 35
3.2.3 Zellkultur 36
3.2.4 Nachweismethoden für Reportergene 38
4 Ergebnisse 40
4.1 Versuche an Mäuse RPE Zellen 40
4.1.1 Überblick 40
4.1.2 Vitalität 40
4.1.3 Aktivität der ß Galaktosidase 45
4.1.4 Fazit über die Versuche mit Mäuse RPEs 50
4.2 Versuche mit humanen RPE Zellen 50
4.2.1 VERSUCH 3 50
4.2.2 VERSUCH 4 51
4.2.3 VERSUCH 5 57
4.2.4 VERSUCH 6 66
4.2.5 VERSUCH 8 72
4.2.6 Fazit über alle Versuche an humanen Zellen 78
4.3 Versuche mit porcinen RPE Zellen 80
5
4.3.1 VERSUCH 6 (Platten PP1 PP4) 80
4.3.2 Vitalität 80
4.3.3 Aktivität der ß Galaktosidase 82
4.3.4 Fazit über die Versuche mit porcinen Zellen 86
5 Diskussion 87
5.1 Lipide und Additive 88
5.2 RPE Zellen 89
5.3 Reifungszeit der Lipopolyplexe 89
5.4 Komplexmedium 89
5.5 Inkubationszeit 89
5.6 Kulturbedingungen nach Transfektion 90
5.7 Messzeitpunkt 90
5.8 Herstellung der Liposomen 90
5.9 DNA Herstellung, Art und Qualität 91
5.10 Ausblick 92
6 Literaturvereichnis 94
7 Anhang 102
7.1 Strukturformeln der verwendeten Lipide 102
7.1.1 DOCSPER 102
7.1.2 DAC Chol 102
7.1.3 DOPE 102
7.2 Replikation und Transkription bei Pro und Eukaryonten 103
7.2.1 Replikation 103
7.2.2 Transkription 103
8 Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 104
6
|
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Inhaltsverzeichnis
Bibliographische Beschreibung 2
Zusammenfassung 3
Inhaltsverzeichnis 5
1 Einleitung 7
1.1 Molekulare Pathologie 7
1.1.1 Genetische Erkrankungen 7
1.2 Ziele der Gentechnik 9
1.2.1 Therapiestrategien 9
1.3 Gentransfer 11
1.3.1 Anforderungen an ein Carriersystem 11
1.3.2 Biologische Carriersysteme 12
1.3.3 Physikalische Methoden des Gentransfers 12
1.3.4 Physikochemische Gentransfersysteme 13
1.4 DNA für die liposomale Gentherapie 18
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1.4.2 Reportergene 19
1.4.3 DNA Qualität 20
1.4.4 DNA und Lipofektion 20
2 Zielstellung der Arbeit 25
3 Materialien und Methoden 26
3.1 Materialien 26
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3.1.2 Kits 26
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3.2.2 Methoden für die Transfektionsversuche 35
3.2.3 Zellkultur 36
3.2.4 Nachweismethoden für Reportergene 38
4 Ergebnisse 40
4.1 Versuche an Mäuse RPE Zellen 40
4.1.1 Überblick 40
4.1.2 Vitalität 40
4.1.3 Aktivität der ß Galaktosidase 45
4.1.4 Fazit über die Versuche mit Mäuse RPEs 50
4.2 Versuche mit humanen RPE Zellen 50
4.2.1 VERSUCH 3 50
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4.2.5 VERSUCH 8 72
4.2.6 Fazit über alle Versuche an humanen Zellen 78
4.3 Versuche mit porcinen RPE Zellen 80
5
4.3.1 VERSUCH 6 (Platten PP1 PP4) 80
4.3.2 Vitalität 80
4.3.3 Aktivität der ß Galaktosidase 82
4.3.4 Fazit über die Versuche mit porcinen Zellen 86
5 Diskussion 87
5.1 Lipide und Additive 88
5.2 RPE Zellen 89
5.3 Reifungszeit der Lipopolyplexe 89
5.4 Komplexmedium 89
5.5 Inkubationszeit 89
5.6 Kulturbedingungen nach Transfektion 90
5.7 Messzeitpunkt 90
5.8 Herstellung der Liposomen 90
5.9 DNA Herstellung, Art und Qualität 91
5.10 Ausblick 92
6 Literaturvereichnis 94
7 Anhang 102
7.1 Strukturformeln der verwendeten Lipide 102
7.1.1 DOCSPER 102
7.1.2 DAC Chol 102
7.1.3 DOPE 102
7.2 Replikation und Transkription bei Pro und Eukaryonten 103
7.2.1 Replikation 103
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