Expression der Zellzyklusregulatoren p16, Cyclin D1 und Rb in kolorektalen Karzinomen: Korrelationen mit klinisch-pathologischen Parametern einschließlich der Prognose
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen
1. EINLEITUNG
1
11 KOLOREKTALE KARZINOME 1
1.1.1. Epidemiologie 1
1.12. Ätiologie und Pathogenese 2
1.1.3. Lokalisation, Morphologie und histopathologische Typen 7
1.1.4. Ausbreitungsstadien und Differenzierungsgrad 8
1.1.5. Therapie 11
1.1.6. Prognose 13
1.2 DER ZELLZYKLUS 15
13 DAS P16 TUMORSUPPRESSSORGEN 19
1.3.1. Hintergründe 19
1.3.1.1. Homologe und Verwandte 20
1.3.1.2. Struktur 20
1.3.1.3. Alternatives Transkript vom INK4a/CDKN2A Locus 21
1.3 1.4 Alternatives Produkt vom INK4a/CDKN2A Locus 21
1.3.2. Tumorsuppressive Eigenschaften/Funktion und Regulation 22
1.3.3. Mutationen 27
1.3.4. Immunhistochemischer Nachweis 30
1.3.5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 30
1.3.6. Prognostische Aussagekraft 31
i .3.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 33
1.4. DER ZELLZYKLUSREGULATOR CYCLIN Dl 34
1.4.1. Hintergründe 34
1.4.1.1. Struktur 35
1.4.1.2. Alternative Transkripte 36
1.4.2. Funktion und Regulation 37
1.4.3. Mutationen 44
1.4.4. Immunhistochemischer Nachweis 46
1.4 5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 48
1.4.6. Prognostische Aussagekraft 48
1 4.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 49
1.5. DAS RETINOBLASTOMAPROTEIN 50
1.5.1 Hintergründe 50
1.5.1.1. Struktur 51
1.5.1.2. Homologe und Verwandte 53
1 5.2. Funktion und Regulation 54
1.5.3. Mutationen 60
1.5.4. Immunhistochemischer Nachweis 61
1.5.5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 61
1.5.6. Prognostische Aussagekraft 62
1.5.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 64
1.6. SCHEMATISCHE DARSTELLUNG DES
P16/CDK4/CYCLIN Dl/RB PFADES 66
1.7. FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 67
2. MATERIAL UND METHODEN *
2.1. PATIENTENKOLLEKTIV 68
2.2. EVALUATION DER KOLOREKTALEN KARZINOME 68
2.3. DIE IMMUNOMAX METHODE 69
2.3.1. Hintergründe 69
2.3.2. Prinzip der Immunomax Methode 70
2.3.3. Beschreibung des verwendeten Antikörpers pl6 71
2.3.4. Ablauf der Färbung das Färbeprotokoll 71
2.3.4.1. EntparafFinieren 71
2.3.4.2. Vorbehandlung in der Mikrowelle 72
2.3.4.3 Hemmung der endogenen Peroxidase 72
2.3.4.4. Immunmarkierung 72
2.3.4.5. Markierung mit dem Brückenantikörper 73
2.3.4.6. Konjugation mit der Meerettichperoxidase 73
2.3.4.7. Tyramininkubation 73
2.3.4.8. Kopplung an die alkalische Phosphatase 74
2.3.4.9. Farbereaktion/Entwicklung 74
2.4. DIE ENVIS1ON™+ METHODE 75
2.4.1. Hintergründe 75
2.4.2. Prinzip 76
2.4.3. Beschreibung der verwendeten Antikörper 77
2.4.3.1. Cyclin Dl 77
2.4.3.2. Retinoblastoma Gen Protein 78
2.4.4 Ablauf der Färbung das Färbeprotokoll 78
2.4.4.1. Entparaffinierung 78
2.4.4.2. Vorbehandlung 78
2.4.4.3. Peroxidaseblock 79
2.4.4.4. Inkubation mit dem Primärantikörper 79
2.4.4.5. Inkubation mit der EnVisionTM+ Polymerlösung 79
2.4.4.6. Inkubation mit dem Substrat Chromogen 79
2.4.4.7. Gegenfärbung 80
2.5. LICHTMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 80
2.6. STATISTISCHE ANALYSE 81
3. ERGEBNISSE
82
3.1. IMMUNHISTOCHEMISCHES EXPRESSIONSMUSTER 82
3.2. ALLGMEINE BESCHREIBUNO DES PATIENTENKOLLEKTIVS 84
3.3. BESCHREIBUNO DES GESAMTKOLLEKTIVS 84
3.3.1. Alter, Geschlecht und Überleben 84
3.3.2. Beschreibung des Gesamtkollektivs hinsichtlich klinisch¬
pathologischer Parameter 85
3.4. STATISTISCHE ANYLYSE DER P16 IMMUNHISTOCHEMIE 86
3.4.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 86
3.4.2. Beziehung zwischen der pl6 Expression und den klinisch¬
pathologischen Variablen 87
3.4.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 20% 91
3.4.3. Überlebensanalyse 91
3.5. STATISTISCHE ANAYLYSE DER CYCLIN DI
IMMUNHISTOCHEMIE 95
3.5.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 95
3.5.2. Beziehung zwischen der Cyclin Dl Expression und den
klinisch pathologischen Variablen 96
3.5.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 5 % und / 20 % 97
3.5.3. Überlebensanalyse 99
3.5.3.1. Überlebensanalyse bei einem Cut off point
von / 5% 100
3.6. STATISTISCHE ANAYLYSE DER RB IMMUNHISTOCHEMIE 102
3.6.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 102
3.6 2. Beziehung zwischen der Rb Expression und den klinisch¬
pathologischen Variablen 102
3.6.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 20 % und / 50 % 104
3.6.3. Überlebensanalyse 104
4. DISKUSSION
106
4.1 BEDEUTUNG DER 1DENTIFEIERUNG UNABHÄNGIGER
PROGNOSEFAKTOREN IM KOLOREKTALEN KARZINOM 106
4.2. KRITISCHE ANALYSE DER P16 , CYCLIN Dl UND RB
IMMUNHISTOCHEMIE 107
4.2.1. P16 107
4.2.2. Cyclin Dl 114
4.2.3. Rb
121
5. ZUSAMMENFASSUNG 125
6. LITERATURVERZEICHNIS 126
7. VORABVERÖFFENTLICHUNG 186
8. ANHANG 187
8.1.1 Beschreibung der verwendeten Lösungen bei der
Immunomax Methode 187
8.1.2 Beschreibung der verwendeten Materialien bei der EnVision™+
Methode 189
Lebenslauf
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen
1. EINLEITUNG
1
11 KOLOREKTALE KARZINOME 1
1.1.1. Epidemiologie 1
1.12. Ätiologie und Pathogenese 2
1.1.3. Lokalisation, Morphologie und histopathologische Typen 7
1.1.4. Ausbreitungsstadien und Differenzierungsgrad 8
1.1.5. Therapie 11
1.1.6. Prognose 13
1.2 DER ZELLZYKLUS 15
13 DAS P16 TUMORSUPPRESSSORGEN 19
1.3.1. Hintergründe 19
1.3.1.1. Homologe und Verwandte 20
1.3.1.2. Struktur 20
1.3.1.3. Alternatives Transkript vom INK4a/CDKN2A Locus 21
1.3 1.4 Alternatives Produkt vom INK4a/CDKN2A Locus 21
1.3.2. Tumorsuppressive Eigenschaften/Funktion und Regulation 22
1.3.3. Mutationen 27
1.3.4. Immunhistochemischer Nachweis 30
1.3.5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 30
1.3.6. Prognostische Aussagekraft 31
i .3.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 33
1.4. DER ZELLZYKLUSREGULATOR CYCLIN Dl 34
1.4.1. Hintergründe 34
1.4.1.1. Struktur 35
1.4.1.2. Alternative Transkripte 36
1.4.2. Funktion und Regulation 37
1.4.3. Mutationen 44
1.4.4. Immunhistochemischer Nachweis 46
1.4 5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 48
1.4.6. Prognostische Aussagekraft 48
1 4.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 49
1.5. DAS RETINOBLASTOMAPROTEIN 50
1.5.1 Hintergründe 50
1.5.1.1. Struktur 51
1.5.1.2. Homologe und Verwandte 53
1 5.2. Funktion und Regulation 54
1.5.3. Mutationen 60
1.5.4. Immunhistochemischer Nachweis 61
1.5.5. Profil in normalem und neoplastischem Gewebe 61
1.5.6. Prognostische Aussagekraft 62
1.5.7. Bedeutung beim kolorektalen Karzinom 64
1.6. SCHEMATISCHE DARSTELLUNG DES
P16/CDK4/CYCLIN Dl/RB PFADES 66
1.7. FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 67
2. MATERIAL UND METHODEN *
2.1. PATIENTENKOLLEKTIV 68
2.2. EVALUATION DER KOLOREKTALEN KARZINOME 68
2.3. DIE IMMUNOMAX METHODE 69
2.3.1. Hintergründe 69
2.3.2. Prinzip der Immunomax Methode 70
2.3.3. Beschreibung des verwendeten Antikörpers pl6 71
2.3.4. Ablauf der Färbung das Färbeprotokoll 71
2.3.4.1. EntparafFinieren 71
2.3.4.2. Vorbehandlung in der Mikrowelle 72
2.3.4.3 Hemmung der endogenen Peroxidase 72
2.3.4.4. Immunmarkierung 72
2.3.4.5. Markierung mit dem Brückenantikörper 73
2.3.4.6. Konjugation mit der Meerettichperoxidase 73
2.3.4.7. Tyramininkubation 73
2.3.4.8. Kopplung an die alkalische Phosphatase 74
2.3.4.9. Farbereaktion/Entwicklung 74
2.4. DIE ENVIS1ON™+ METHODE 75
2.4.1. Hintergründe 75
2.4.2. Prinzip 76
2.4.3. Beschreibung der verwendeten Antikörper 77
2.4.3.1. Cyclin Dl 77
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2.4.4 Ablauf der Färbung das Färbeprotokoll 78
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2.4.4.5. Inkubation mit der EnVisionTM+ Polymerlösung 79
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2.4.4.7. Gegenfärbung 80
2.5. LICHTMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 80
2.6. STATISTISCHE ANALYSE 81
3. ERGEBNISSE
82
3.1. IMMUNHISTOCHEMISCHES EXPRESSIONSMUSTER 82
3.2. ALLGMEINE BESCHREIBUNO DES PATIENTENKOLLEKTIVS 84
3.3. BESCHREIBUNO DES GESAMTKOLLEKTIVS 84
3.3.1. Alter, Geschlecht und Überleben 84
3.3.2. Beschreibung des Gesamtkollektivs hinsichtlich klinisch¬
pathologischer Parameter 85
3.4. STATISTISCHE ANYLYSE DER P16 IMMUNHISTOCHEMIE 86
3.4.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 86
3.4.2. Beziehung zwischen der pl6 Expression und den klinisch¬
pathologischen Variablen 87
3.4.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 20% 91
3.4.3. Überlebensanalyse 91
3.5. STATISTISCHE ANAYLYSE DER CYCLIN DI
IMMUNHISTOCHEMIE 95
3.5.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 95
3.5.2. Beziehung zwischen der Cyclin Dl Expression und den
klinisch pathologischen Variablen 96
3.5.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 5 % und / 20 % 97
3.5.3. Überlebensanalyse 99
3.5.3.1. Überlebensanalyse bei einem Cut off point
von / 5% 100
3.6. STATISTISCHE ANAYLYSE DER RB IMMUNHISTOCHEMIE 102
3.6.1. Häufigkeitsverteilung der Positivitat 102
3.6 2. Beziehung zwischen der Rb Expression und den klinisch¬
pathologischen Variablen 102
3.6.2.1. Statistische Analyse bei einem Cut off point
von / 20 % und / 50 % 104
3.6.3. Überlebensanalyse 104
4. DISKUSSION
106
4.1 BEDEUTUNG DER 1DENTIFEIERUNG UNABHÄNGIGER
PROGNOSEFAKTOREN IM KOLOREKTALEN KARZINOM 106
4.2. KRITISCHE ANALYSE DER P16 , CYCLIN Dl UND RB
IMMUNHISTOCHEMIE 107
4.2.1. P16 107
4.2.2. Cyclin Dl 114
4.2.3. Rb
121
5. ZUSAMMENFASSUNG 125
6. LITERATURVERZEICHNIS 126
7. VORABVERÖFFENTLICHUNG 186
8. ANHANG 187
8.1.1 Beschreibung der verwendeten Lösungen bei der
Immunomax Methode 187
8.1.2 Beschreibung der verwendeten Materialien bei der EnVision™+
Methode 189
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