Nachweis kurzer extrachromosomaler DNA in soliden Tumoren:
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2006
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adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1 Tumorgenese als genetischer Mehrschrittprozess 6
1.2 Diagnostik maligner Erkrankungen 10
1.3 Extrachromosomale DNA 12
1.3.1 Short extrachromosomal DNA (SED) 14
2 Zielsetzung der Arbeit 16
3 Material und Methoden 17
3.1 Material 17
3.1.1 Lösungen 17
3.1.2 Medien und Medienzusätze 19
3.1.3. PlasmidpUC19 19
3.1.4. Oligonukleotide 19
3.1.5 Gewebe Array 20
3.2 Methoden 20
3.2.1 Plasmidpräparation nach der Boilingmethode 20
3.2.2 Plasmidrestriktion 21
3.2.3 Photometrische Konzentrationsbestimmung der Nukleinsäuren 21
3.2.4 Agarose Gelelektrophorese 21
3.2.5 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) 22
3.2.6 Digoxygenin Markierung von DNA mit Hilfe der Polymerase Ketten
Reaktion 23
3.2.7 Übertragung von Nukleinsäuren auf Nylon Membranen („dot blof
Verfahren) 23
3.2.8 Chemolumineszenz Nachweis der mit Digoxygenin dTUP markierten
Nukleinsäuren 23
3.2.9 in situ Hybridisierung (ISH) 24
4 Ergebnisse 26
4.1 Generierung der Hybridisierungssonden 26
4.2 Beispiele für Hybridisierungssignale 27
4.3 Hybridisierungsergebnisse 31
4.4 Übersicht 34
4.4.1 Gewebe 34
4.4.2 Statistische Auswertungen der in situ Hybridisierungen 37
4.5 Benigne Neoplasien 43
4.6 Hybridisierungsunterschiede innerhalb desselben Gewebes 44
4.7 Organsysteme 47
4.7.1 Leber 47
4.7.2 Harnblase 50
4.7.3 Gastrointestinaltrakt 52
5 Diskussion 55
6 Zusammenfassung 61
7 Literaturverzeichnis 62
8 Tabellen und Abbildungsverzeichnis 66
8.1 Tabellenverzeichnis 66
8.2 Abbildungsverzeichnis 66
9 Anhang 68
9.1 Sequenzen der verwendeten DNA Sonden 68
9.1.1 pUC 19 Sonde (316bp Länge) 68
9.1.2 AML02 Sonde(503bp Länge) 68
9.1.3 AML12 Sonde(365bp Länge) 68
10 Lebenslauf 69
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 6
1.1 Tumorgenese als genetischer Mehrschrittprozess 6
1.2 Diagnostik maligner Erkrankungen 10
1.3 Extrachromosomale DNA 12
1.3.1 Short extrachromosomal DNA (SED) 14
2 Zielsetzung der Arbeit 16
3 Material und Methoden 17
3.1 Material 17
3.1.1 Lösungen 17
3.1.2 Medien und Medienzusätze 19
3.1.3. PlasmidpUC19 19
3.1.4. Oligonukleotide 19
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3.2 Methoden 20
3.2.1 Plasmidpräparation nach der Boilingmethode 20
3.2.2 Plasmidrestriktion 21
3.2.3 Photometrische Konzentrationsbestimmung der Nukleinsäuren 21
3.2.4 Agarose Gelelektrophorese 21
3.2.5 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) 22
3.2.6 Digoxygenin Markierung von DNA mit Hilfe der Polymerase Ketten
Reaktion 23
3.2.7 Übertragung von Nukleinsäuren auf Nylon Membranen („dot blof
Verfahren) 23
3.2.8 Chemolumineszenz Nachweis der mit Digoxygenin dTUP markierten
Nukleinsäuren 23
3.2.9 in situ Hybridisierung (ISH) 24
4 Ergebnisse 26
4.1 Generierung der Hybridisierungssonden 26
4.2 Beispiele für Hybridisierungssignale 27
4.3 Hybridisierungsergebnisse 31
4.4 Übersicht 34
4.4.1 Gewebe 34
4.4.2 Statistische Auswertungen der in situ Hybridisierungen 37
4.5 Benigne Neoplasien 43
4.6 Hybridisierungsunterschiede innerhalb desselben Gewebes 44
4.7 Organsysteme 47
4.7.1 Leber 47
4.7.2 Harnblase 50
4.7.3 Gastrointestinaltrakt 52
5 Diskussion 55
6 Zusammenfassung 61
7 Literaturverzeichnis 62
8 Tabellen und Abbildungsverzeichnis 66
8.1 Tabellenverzeichnis 66
8.2 Abbildungsverzeichnis 66
9 Anhang 68
9.1 Sequenzen der verwendeten DNA Sonden 68
9.1.1 pUC 19 Sonde (316bp Länge) 68
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