Untersuchungen zur Genotoxizität von Nikotin an humanen Lymphozyten und Tonsillengewebe:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2006
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| Beschreibung: | Regensburg, Univ., Diss., 2006 |
| Beschreibung: | 63 S. Ill., graph. Darst. |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 DNA-Schädigung, Tumorinitiation und Kanzerogenese im oberen Aerodige-
stivtrakt 1
1.2 Kanzerogene Stoffe im Zigarettenrauch 1
1.3 Testsubstanz Nikotin 2
1.4 Der Comet Assay zum Nachweis fremdstoffinduzierter DNA-Schädigung ... 4
1.4.1 Funktionsprinzip 4
1.4.2 Quantifizierung der DNA-Schädigung 4
1.5 Arbeitshypothese und Ziele der Arbeit 5
2 Material und Methoden 6
2.1 Patientenkollektiv 6
2.1.1 Einverständnis und Votum der Ethikkommission 6
2.1.2 Spenderanamnesen und -charakteristika 6
2.2 Technik des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays 6
2.2.1 Überblick über den Versuchsablauf und die Versuchsreihen A, B und
C mit Graphik 6
2.2.2 Probengewinnung und Zellseparation 8
2.2.3 Zellzählung und Vitalitätstestung 10
2.2.4 Inkubation mit Nikotin 11
2.2.5 Aufbringen auf Objektträger 12
2.2.6 Lyse von Zeil- und Kernmembran 12
2.2.7 Elektrophorese im alkalischen Milieu 12
2.2.8 Neutralisation 13
2.2.9 Fluoreszenzfärbung 13
2.2.10 Auswertung und Datenspeicherung 13
2.3 Methodenspezifische Labormaterialien 15
2.3.1 Reagenzien 15
2.3.2 Verbrauchsmaterialien 16
2.3.3 Geräte und Programme 17
2.4 Graphische Ergebnisdarstellung und Erläuterung der statistischen Testverfahren 17
2.4.1 Diagramme 17
2.4.2 Statistische Testverfahren 18
3 Ergebnisse *
3.1 Vitalitätstests . . . 19
3.2 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin ...... 20
3.2.1 Tonsillengewebe 20
3.2.2 Lymphozyten 21
3.3 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 22
3.3.1 Tonsillengewebe 22
3.3.2 Lymphozyten 24
3.4 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alkalischen
und neutralisierten Inkubationsmedien 26
3.4.1 Tonsillengewebe 26
3.4.2 Lymphozyten 28
3.5 Vergleich der Mutagensensitivität von Tonsillengewebe und Lymphozyten . . 30
4 Diskussion 32
4.1 Diskussion der Methode 32
4.2 Diskussion der Ergebnisse 34
4.2.1 Kontrollen und Vitalitätstests 34
4.2.2 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin . . 34
4.2.3 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unter¬
schiedlicher Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 35
4.2.4 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alka¬
lischen und neutralisierten Inkubationsmedien 35
4.2 5 Vergleich der Mutagensensitivität von Tonsillengewebe und Lymphozyten 35
4.3 Kanzerogenese durch Nikotin 36
4.3.1 Genotoxisches Potential 36
4.3.2 Oxidativer Stress 37
4.3.3 Apoptose 38
4.3.4 Angiogenese und Tumorwachstum 39
4.3.5 Genpolymorphismus und Metabolisierung 39
4.4 Zusammenfassende Bewertung der Ergebnisse 40
4.5 Ausblick 41
5 Zusammenfassung 42
5.1 Hintergrund und Ziele der Untersuchung 42
5.2 Methodik, Stoffe und Patientenkollektiv 42
5.3 Ergebnisse 42
5.4 Schlussfolgerung 43
6 Literatur 44
7 Anhang 54
7.1 Einzelergebnisse 54
7.2 Verwendete Abkürzungen 60
7.3 Veröffentlichungen aus der Arbeit 60
7.3.1 Publikationen 60
7.3.2 Kongressbeiträge 61
7.4 Lebenslauf 62
7.5 Danksagung 63
Abbildungsverzeichnis
1 Strukturformel von Nikotin 3
2 Überblick über den Ablauf des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays ... 9
3 Lymphozyten-Isolierung 10
4 OTM-Messung 14
Graphische Darstellung der Ergebnisse in Boxplots:
5 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin von 0,125 bis 4 mM 20
6 Inkubation von Lymphozyten mit Nikotin von 0,125 bis 4 mM 21
7 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin unterschiedlicher Hersteller bzw.
Lagerungsbedingungen 23
8 Inkubation von Lymphozyten mit Nikotin unterschiedlicher Hersteller bzw.
Lagerungsbedingungen 25
9 Inkubation von Tonsillengewebe in neutralisiertem Milieu 27
10 Inkubation von Tonsillengewebe in alkalischem Milieu 27
11 Inkubation von Lymphozyten in neutralisiertem Milieu 29
12 Inkubation von Lymphozyten in alkalischem Milieu 29
Tabellenverzeichnis
1 Anamnesen der Probenspender 7
Statistische Auswertung der Ergebnisse:
2 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin von 0,125 bis 4mM 20
3 Inkubation von Lymphozyten mit Nikotin von 0,125 bis 4mM 21
4 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin verschiedener Hersteller bzw. La¬
gerungsbedingungen 22
5 Inkubation von Lymphozyten mit Nikotin verschiedener Hersteller bzw. Lage¬
rungsbedingungen 24
6 Inkubation von Tonsillengewebe in neutralisiertem bzw. alkalischem Milieu . . 26
7 Inkubation von Lymphozyten in neutralisiertem bzw. alkalischem Milieu ... 28
8 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe A 30
9 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe B 31
10 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe C 31
Darstellung der Einzelergebnisse:
11 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin 55
12 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 56
13 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen (Fortsetzung) 57
14 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alkalischen
und neutralisierten Inkubationsmedien 58
15 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alkalischen
und neutralisierten Inkubationsmedien (Fortsetzung) 59
|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 DNA-Schädigung, Tumorinitiation und Kanzerogenese im oberen Aerodige-
stivtrakt 1
1.2 Kanzerogene Stoffe im Zigarettenrauch 1
1.3 Testsubstanz Nikotin 2
1.4 Der Comet Assay zum Nachweis fremdstoffinduzierter DNA-Schädigung . 4
1.4.1 Funktionsprinzip 4
1.4.2 Quantifizierung der DNA-Schädigung 4
1.5 Arbeitshypothese und Ziele der Arbeit 5
2 Material und Methoden 6
2.1 Patientenkollektiv 6
2.1.1 Einverständnis und Votum der Ethikkommission 6
2.1.2 Spenderanamnesen und -charakteristika 6
2.2 Technik des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays 6
2.2.1 Überblick über den Versuchsablauf und die Versuchsreihen A, B und
C mit Graphik 6
2.2.2 Probengewinnung und Zellseparation 8
2.2.3 Zellzählung und Vitalitätstestung 10
2.2.4 Inkubation mit Nikotin 11
2.2.5 Aufbringen auf Objektträger 12
2.2.6 Lyse von Zeil- und Kernmembran 12
2.2.7 Elektrophorese im alkalischen Milieu 12
2.2.8 Neutralisation 13
2.2.9 Fluoreszenzfärbung 13
2.2.10 Auswertung und Datenspeicherung 13
2.3 Methodenspezifische Labormaterialien 15
2.3.1 Reagenzien 15
2.3.2 Verbrauchsmaterialien 16
2.3.3 Geräte und Programme 17
2.4 Graphische Ergebnisdarstellung und Erläuterung der statistischen Testverfahren 17
2.4.1 Diagramme 17
2.4.2 Statistische Testverfahren 18
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3.1 Vitalitätstests . . . 19
3.2 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin . 20
3.2.1 Tonsillengewebe 20
3.2.2 Lymphozyten 21
3.3 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 22
3.3.1 Tonsillengewebe 22
3.3.2 Lymphozyten 24
3.4 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alkalischen
und neutralisierten Inkubationsmedien 26
3.4.1 Tonsillengewebe 26
3.4.2 Lymphozyten 28
3.5 Vergleich der Mutagensensitivität von Tonsillengewebe und Lymphozyten . . 30
4 Diskussion 32
4.1 Diskussion der Methode 32
4.2 Diskussion der Ergebnisse 34
4.2.1 Kontrollen und Vitalitätstests 34
4.2.2 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin . . 34
4.2.3 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unter¬
schiedlicher Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 35
4.2.4 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alka¬
lischen und neutralisierten Inkubationsmedien 35
4.2 5 Vergleich der Mutagensensitivität von Tonsillengewebe und Lymphozyten 35
4.3 Kanzerogenese durch Nikotin 36
4.3.1 Genotoxisches Potential 36
4.3.2 Oxidativer Stress 37
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4.4 Zusammenfassende Bewertung der Ergebnisse 40
4.5 Ausblick 41
5 Zusammenfassung 42
5.1 Hintergrund und Ziele der Untersuchung 42
5.2 Methodik, Stoffe und Patientenkollektiv 42
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5.4 Schlussfolgerung 43
6 Literatur 44
7 Anhang 54
7.1 Einzelergebnisse 54
7.2 Verwendete Abkürzungen 60
7.3 Veröffentlichungen aus der Arbeit 60
7.3.1 Publikationen 60
7.3.2 Kongressbeiträge 61
7.4 Lebenslauf 62
7.5 Danksagung 63
Abbildungsverzeichnis
1 Strukturformel von Nikotin 3
2 Überblick über den Ablauf des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays . 9
3 Lymphozyten-Isolierung 10
4 OTM-Messung 14
Graphische Darstellung der Ergebnisse in Boxplots:
5 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin von 0,125 bis 4 mM 20
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11 Inkubation von Lymphozyten in neutralisiertem Milieu 29
12 Inkubation von Lymphozyten in alkalischem Milieu 29
Tabellenverzeichnis
1 Anamnesen der Probenspender 7
Statistische Auswertung der Ergebnisse:
2 Inkubation von Tonsillengewebe mit Nikotin von 0,125 bis 4mM 20
3 Inkubation von Lymphozyten mit Nikotin von 0,125 bis 4mM 21
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8 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe A 30
9 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe B 31
10 Vergleich der Schädigung von Tonsillengewebe und Lymphozyten: Versuchs¬
reihe C 31
Darstellung der Einzelergebnisse:
11 Versuchsreihe A: Dosisabhängige genotoxische Effekte von Nikotin 55
12 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen 56
13 Versuchsreihe B: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin unterschiedlicher
Bezugsquellen und Lagerungsbedingungen (Fortsetzung) 57
14 Versuchsreihe C: Vergleich genotoxischer Effekte von Nikotin in alkalischen
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| spelling | Semmler, Marzell 1978- Verfasser (DE-588)132779757 aut Untersuchungen zur Genotoxizität von Nikotin an humanen Lymphozyten und Tonsillengewebe vorgelegt von Marzell Semmler 2006 63 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Regensburg, Univ., Diss., 2006 Tonsilla (DE-588)4209645-5 gnd rswk-swf Nicotin (DE-588)4131089-5 gnd rswk-swf Mutagenität (DE-588)4120777-4 gnd rswk-swf Lymphozyt (DE-588)4036762-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Nicotin (DE-588)4131089-5 s Mutagenität (DE-588)4120777-4 s Lymphozyt (DE-588)4036762-9 s DE-604 Tonsilla (DE-588)4209645-5 s b DE-604 HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=015453561&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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