Untersuchungen zum Einfluss von Cycldextriden auf das Proliverationsverhalten von HaCaT-Keratinozyten:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis Seite
Verzeichnis der Abkürzungen 3
Zusammenfassung 5
1 EINLEITUNG 7
1.1 Gewinnung, Struktur und Eigenschaften der Cyclodextrine 7
1.2 Bildung und Dissoziation von Komplexen 12
1.3 Anwendung von Cyclodextrinen 13
1.3.1 Wirkungsprinzipien 13
1.3.2 Anwendungsbereiche 14
1.4 Die menschliche Haut 17
1.4.1 Aufbau und Funktionen der menschlichen Haut 17
1.4.2 Haut und Zytokine 18
1.4.2.1 Interleukin 6 19
1.4.2.2 Interleukin 8 20
1.4.3 Haut und die Bedeutung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) 22
2 ZIELE DER ARBEIT 24
3 MATERIAL UND METHODEN 26
3.1 Material 26
3.1.1 Zellen 26
3.1.2 Fluoreszenzfarbstoffe 26
3.1.3 Kits 26
3.1.4 Messung der Fluoreszenz 26
3.1.5 Messung der Biolumineszenz 27
3.1.6 Puffer 27
3.1.7 Verwendete Lösungen 27
3.1.8 Cyclodextrine 27
3.2 Methoden 27
3.2.1 Zellkultur 27
3.2.2 HaCaT Keratinozyten 28
3.2.2.1 Allgemeines 28
3.2.2.2 Züchtung von HaCaT Keratinozyten 28
3.2.2.3 Passagieren von HaCaT Keratinozyten 29
3.2.3 Herstellung der Cyclodextrin Lösungen 30
3.2.4 Inkubation der Zellen mit den Cyclodextrin Lösungen 30
3.2.5 ATP Biolumineszenz Messungen 30
3.2.6 Fluorometrischer Assay mit PicoGreen 31
3.2.7 Fluorometrischer Zellproliferationsassay CyQUANT 32
3.2.8 Proteinbestimmung 33
3.2.9 Bestimmung von IL 6 und IL 8 33
3.2.10 Bestimmung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) 34
3.2.11 Bestimmung von LDH 34
3.2.12 Statistische Analyse 35
4 ERGEBNISSE 36
4.1 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das
Proliferations und Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten
mit Hilfe des ATP Biolumineszenzassays 36
4.1.1 a , ß und y Cyclodextrine 36
4.1.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 38
4.1.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 39
4.2 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das Proliferations und
Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten mit Hilfe des PicoGreen
Fluoreszenzassays 41
4.2.1 a , ß und y Cyclodextrine 41
4.2.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 42
4.2.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 44
4.3 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das Proliferations und
Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten mit Hilfe des CyQUANT
Fluoreszenzassays 46
4.3.1 oc , ß und y Cyclodextrine 46
4.3.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 47
4.3.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 49
4.4 Messung von IL 6 und IL 8 bei HaCaT Keratinozyten unter dem Einfluss von
a , ß und y Cyclodextrinen 51
4.5 Messung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) bei HaCaT Keratinozyten unter
dem Einfluss von a , ß und y Cyclodextrinen 54
4.6 Messung von Lactatdehydrogenase (LDH) bei HaCaT Keratinozyten unter dem
Einfluss von a , ß und y Cyclodextrinen sowie deren Methyl und
Hydroxypropyl Derivaten 55
4.7 Zusammenfassung der Ergebnisse 57
5 DISKUSSION 59
5.1 Vergleichende Betrachtung der verwendeten Testmethoden 59
5.2 Beeinflussung der Proliferation von HaCaT Keratinozyten durch die
verschiedenen Cyclodextrine 61
5.3 Cyclodextrine und Interleukine 69
5.4 Cyclodextrine und Reaktive Sauerstoffspezies 72
6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 74
7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 76
8 LITERATURVERZEICHNIS 78
9 ANHANG 91
Danksagung 91
Lebenslauf 92
Ehrenwörtliche Erklärung 93
|
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Inhaltsverzeichnis Seite
Verzeichnis der Abkürzungen 3
Zusammenfassung 5
1 EINLEITUNG 7
1.1 Gewinnung, Struktur und Eigenschaften der Cyclodextrine 7
1.2 Bildung und Dissoziation von Komplexen 12
1.3 Anwendung von Cyclodextrinen 13
1.3.1 Wirkungsprinzipien 13
1.3.2 Anwendungsbereiche 14
1.4 Die menschliche Haut 17
1.4.1 Aufbau und Funktionen der menschlichen Haut 17
1.4.2 Haut und Zytokine 18
1.4.2.1 Interleukin 6 19
1.4.2.2 Interleukin 8 20
1.4.3 Haut und die Bedeutung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) 22
2 ZIELE DER ARBEIT 24
3 MATERIAL UND METHODEN 26
3.1 Material 26
3.1.1 Zellen 26
3.1.2 Fluoreszenzfarbstoffe 26
3.1.3 Kits 26
3.1.4 Messung der Fluoreszenz 26
3.1.5 Messung der Biolumineszenz 27
3.1.6 Puffer 27
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3.1.8 Cyclodextrine 27
3.2 Methoden 27
3.2.1 Zellkultur 27
3.2.2 HaCaT Keratinozyten 28
3.2.2.1 Allgemeines 28
3.2.2.2 Züchtung von HaCaT Keratinozyten 28
3.2.2.3 Passagieren von HaCaT Keratinozyten 29
3.2.3 Herstellung der Cyclodextrin Lösungen 30
3.2.4 Inkubation der Zellen mit den Cyclodextrin Lösungen 30
3.2.5 ATP Biolumineszenz Messungen 30
3.2.6 Fluorometrischer Assay mit PicoGreen 31
3.2.7 Fluorometrischer Zellproliferationsassay CyQUANT 32
3.2.8 Proteinbestimmung 33
3.2.9 Bestimmung von IL 6 und IL 8 33
3.2.10 Bestimmung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) 34
3.2.11 Bestimmung von LDH 34
3.2.12 Statistische Analyse 35
4 ERGEBNISSE 36
4.1 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das
Proliferations und Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten
mit Hilfe des ATP Biolumineszenzassays 36
4.1.1 a , ß und y Cyclodextrine 36
4.1.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 38
4.1.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 39
4.2 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das Proliferations und
Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten mit Hilfe des PicoGreen
Fluoreszenzassays 41
4.2.1 a , ß und y Cyclodextrine 41
4.2.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 42
4.2.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 44
4.3 Untersuchungen zum Einfluss von Cyclodextrinen auf das Proliferations und
Zytotoxizitätsverhalten von HaCaT Keratinozyten mit Hilfe des CyQUANT
Fluoreszenzassays 46
4.3.1 oc , ß und y Cyclodextrine 46
4.3.2 Methylderivate der a , ß und y Cyclodextrine 47
4.3.3 Hydroxypropyl Derivate der a und ß Cyclodextrine 49
4.4 Messung von IL 6 und IL 8 bei HaCaT Keratinozyten unter dem Einfluss von
a , ß und y Cyclodextrinen 51
4.5 Messung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) bei HaCaT Keratinozyten unter
dem Einfluss von a , ß und y Cyclodextrinen 54
4.6 Messung von Lactatdehydrogenase (LDH) bei HaCaT Keratinozyten unter dem
Einfluss von a , ß und y Cyclodextrinen sowie deren Methyl und
Hydroxypropyl Derivaten 55
4.7 Zusammenfassung der Ergebnisse 57
5 DISKUSSION 59
5.1 Vergleichende Betrachtung der verwendeten Testmethoden 59
5.2 Beeinflussung der Proliferation von HaCaT Keratinozyten durch die
verschiedenen Cyclodextrine 61
5.3 Cyclodextrine und Interleukine 69
5.4 Cyclodextrine und Reaktive Sauerstoffspezies 72
6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 74
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