Der Einfluss der Chemosynoviorthese mit Natriummorrhuate auf humane Knorpelzellen und Knorpel in vitro:
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2006
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
I. Einleitung 1
/./ Die Rheumatoide Arthritis /
1.1.1 Ätiologie und Pathogenese 1
1.1.2 Klinik 2
1.1.3 Therapie 3
1.1.3.1 Konservative Therapie 3
1.1.3.2 Operative Therapie 4
1.1.3.3 Synoviorthese 4
1.1.3.3.1 Radiosynoviorthese 5
1.1.3.3.2 Chemosynoviorthese 5
1.1.3.3.2.1 Osmiumsäure 5
1.1.3.3.2.2 Natriummorrhuate 6
1.2 Hyaliner Gelenkknorpel 7
1.2.1 Allgemeines 7
1.2.2 Aufbau 7
1.2.2.1 Zellen 7
1.2.2.2 Interzellularsubstanz 7
1.2.3 Regressive Veränderungen 8
1.3 Fragestellung 9
II. Material und Methoden 10
11.1 Material 10
II.l.l Knorpelgewebe 10
II. 1.2 Labormaterialien 13
II. 1.2.1 Materialien zur Zellkultivierung 13
II. 1.2.1.1 Kulturmedium, Mediumzusätze und Chemikalien 13
11.1.2.1.2 Kits und Substanzen für die Zellkulturversuche 13
II. 1.2.1.3 Verbrauchsmaterialien 13
11.1.2.2 Materialien für die Histologie 14
11.1.2.2.1 Alkohole und Lösungen 14
II. 1.2.2.2 Verbrauchsmaterialien 15
11.1.2.2.3 Material für immunhistologische und konservative Knorpelfärbungen 15
II. 1.2.2.4 Antikörper 15
II. 1.3 Geräte 16
II. 1.4 Natriummorrhuate 16
11.2 Methoden 17
II.2.1 Zellkulturmethoden 17
11.2.1.1 Allgemeines 17
11.2.1.2 Isolierung von Knorpelzellen 17
11.2.1.3 Kultivierung humaner Chondrozyten als Monolayer 18
H.2.1.4 Ablösen der Zellen 18
II.2.1.5 Kultivierung humaner Chondrozyten in Alginat 19
II.2.1.5.1 Einbetten der Zellen in die Alginatmatrix 19
I
II.2.1.5.2 Herauslösen der Zellen aus der Alginatmatrix 20
II.2.1.6 Präparierung der Zellkulturplatte 20
11.2.2 Photometrische Messungen der Zellparameter 21
H.2.2.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 21
H.2.2.2 Bestimmung der Zeilproliferation (BrdU) 21
II.2.2.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 22
11.2.3 Histologische Arbeitsmethoden 23
11.2.3.1 Herstellen von Stanzen aus humanem Knorpelgewebe 23
11.2.3.2 Einbettung der Knorpelstücke in Paraffin 23
H.2.3.3 Schneiden der Gewebeblöcke 24
H.2.3.4 Immunhistologische Färbungen 24
H.2.3.4.1 Färbe und Waschschritte 24
H.2.3.4.2 Apoptose und Caspase 3 25
II.2.3.5 Konservative Färbungen 25
11.2.3.5.1 Hämatoxylin Eosin Färbung 25
11.2.3.5.2 Alcian Blau Färbung 26
11.2.4 Statistik 26
III. Ergebnisse 27
///./ Morphologische Beobachtungen bei der Zellkultivierung 27
111.2 Ergebnisse der Monolayer Zellversuche 27
111.2.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 28
111.2.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 29
111.2.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 30
111.3 Ergebnisse der Alginatkultur Zellversuche 31
111.3.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 31
111.3.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 32
111.3.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 34
111.4 Ergebnisse der Histologie 35
111.4.1 Ergebnisse der Anti Caspase 3 Färbungen 35
111.4.1.1 Anti Caspase 3 Färbungen am Hodengewebe einer Maus 35
111.4.1.2 Anti Caspase 3 Färbungen am humanem Knorpelgewebe 35
111.4.2 Ergebnisse der Anti Kollagen Färbungen 35
111.4.3 Ergebnisse der HE und Alcian Blau Färbungen 36
111.4.4 Abbildungen 37
IV. Diskussion 39
IV. 1 Beurteilung der Methoden 39
IV. 1.1 Übertragbarkeit der in vitro Studie auf in vivo Verhältnisse 39
IV. 1.2 Zellkultivierung 40
IV.1.2.1 Monolayerkultur 40
IV.1.2.2 Alginatkultur 41
IV. 1.3 Photometrische Messungen 41
IV.1.3.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 42
IV.1.3.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 42
IV.1.3.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 43
IV. 1.4 Histologie 43
ii
IV.2 Beurteilung der Ergebnisse 44
IV.2.1 Photometrische Messungen 44
IV.2.2 Histologie 46
IV.3 Diskussion der Ergebnisse dieser Arbeil mit der Literatur 47
V. Zusammenfassung 53
VI. Literaturverzeichnis 55
VII. Anhang 62
Vll.l Abkürzungsverzeichnis 62
V1I.2 SOPs (Standard Operating Procedures) der Photometrischen Messungen 63
VII.2.1 SOP von WST 1 und BrdU 63
VII.2.2 SOP von Cytotoxicity Detection Kit (LDH) 64
VII.3 Veröffentlichungen 65
VII.3.1 Abstracts 65
VII.3.2 Poster 65
Vll.4 Preise 66
Lebenslauf
Danksagung
in
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
I. Einleitung 1
/./ Die Rheumatoide Arthritis /
1.1.1 Ätiologie und Pathogenese 1
1.1.2 Klinik 2
1.1.3 Therapie 3
1.1.3.1 Konservative Therapie 3
1.1.3.2 Operative Therapie 4
1.1.3.3 Synoviorthese 4
1.1.3.3.1 Radiosynoviorthese 5
1.1.3.3.2 Chemosynoviorthese 5
1.1.3.3.2.1 Osmiumsäure 5
1.1.3.3.2.2 Natriummorrhuate 6
1.2 Hyaliner Gelenkknorpel 7
1.2.1 Allgemeines 7
1.2.2 Aufbau 7
1.2.2.1 Zellen 7
1.2.2.2 Interzellularsubstanz 7
1.2.3 Regressive Veränderungen 8
1.3 Fragestellung 9
II. Material und Methoden 10
11.1 Material 10
II.l.l Knorpelgewebe 10
II. 1.2 Labormaterialien 13
II. 1.2.1 Materialien zur Zellkultivierung 13
II. 1.2.1.1 Kulturmedium, Mediumzusätze und Chemikalien 13
11.1.2.1.2 Kits und Substanzen für die Zellkulturversuche 13
II. 1.2.1.3 Verbrauchsmaterialien 13
11.1.2.2 Materialien für die Histologie 14
11.1.2.2.1 Alkohole und Lösungen 14
II. 1.2.2.2 Verbrauchsmaterialien 15
11.1.2.2.3 Material für immunhistologische und konservative Knorpelfärbungen 15
II. 1.2.2.4 Antikörper 15
II. 1.3 Geräte 16
II. 1.4 Natriummorrhuate 16
11.2 Methoden 17
II.2.1 Zellkulturmethoden 17
11.2.1.1 Allgemeines 17
11.2.1.2 Isolierung von Knorpelzellen 17
11.2.1.3 Kultivierung humaner Chondrozyten als Monolayer 18
H.2.1.4 Ablösen der Zellen 18
II.2.1.5 Kultivierung humaner Chondrozyten in Alginat 19
II.2.1.5.1 Einbetten der Zellen in die Alginatmatrix 19
I
II.2.1.5.2 Herauslösen der Zellen aus der Alginatmatrix 20
II.2.1.6 Präparierung der Zellkulturplatte 20
11.2.2 Photometrische Messungen der Zellparameter 21
H.2.2.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 21
H.2.2.2 Bestimmung der Zeilproliferation (BrdU) 21
II.2.2.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 22
11.2.3 Histologische Arbeitsmethoden 23
11.2.3.1 Herstellen von Stanzen aus humanem Knorpelgewebe 23
11.2.3.2 Einbettung der Knorpelstücke in Paraffin 23
H.2.3.3 Schneiden der Gewebeblöcke 24
H.2.3.4 Immunhistologische Färbungen 24
H.2.3.4.1 Färbe und Waschschritte 24
H.2.3.4.2 Apoptose und Caspase 3 25
II.2.3.5 Konservative Färbungen 25
11.2.3.5.1 Hämatoxylin Eosin Färbung 25
11.2.3.5.2 Alcian Blau Färbung 26
11.2.4 Statistik 26
III. Ergebnisse 27
///./ Morphologische Beobachtungen bei der Zellkultivierung 27
111.2 Ergebnisse der Monolayer Zellversuche 27
111.2.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 28
111.2.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 29
111.2.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 30
111.3 Ergebnisse der Alginatkultur Zellversuche 31
111.3.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 31
111.3.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 32
111.3.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 34
111.4 Ergebnisse der Histologie 35
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111.4.1.1 Anti Caspase 3 Färbungen am Hodengewebe einer Maus 35
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111.4.2 Ergebnisse der Anti Kollagen Färbungen 35
111.4.3 Ergebnisse der HE und Alcian Blau Färbungen 36
111.4.4 Abbildungen 37
IV. Diskussion 39
IV. 1 Beurteilung der Methoden 39
IV. 1.1 Übertragbarkeit der in vitro Studie auf in vivo Verhältnisse 39
IV. 1.2 Zellkultivierung 40
IV.1.2.1 Monolayerkultur 40
IV.1.2.2 Alginatkultur 41
IV. 1.3 Photometrische Messungen 41
IV.1.3.1 Bestimmung der Zellvitalität (WST 1) 42
IV.1.3.2 Bestimmung der Zellproliferation (BrdU) 42
IV.1.3.3 Bestimmung der Zytotoxizität (LDH) 43
IV. 1.4 Histologie 43
ii
IV.2 Beurteilung der Ergebnisse 44
IV.2.1 Photometrische Messungen 44
IV.2.2 Histologie 46
IV.3 Diskussion der Ergebnisse dieser Arbeil mit der Literatur 47
V. Zusammenfassung 53
VI. Literaturverzeichnis 55
VII. Anhang 62
Vll.l Abkürzungsverzeichnis 62
V1I.2 SOPs (Standard Operating Procedures) der Photometrischen Messungen 63
VII.2.1 SOP von WST 1 und BrdU 63
VII.2.2 SOP von Cytotoxicity Detection Kit (LDH) 64
VII.3 Veröffentlichungen 65
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