Entwicklung eines immunchemischen Nachweisverfahrens für Cefquinom:
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Veröffentlicht: |
Wettenberg
VVB Laufersweiler
2006
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
Seite
1 EINLEITUNG 1
2 SCHRIFTTUM 3
2.1 Hemmstoffe bzw. Rückstände von Antiinfekti
2.2 Rechtliche Grundlagen 5
2.3 Charakterisierung von Cefquinom 8
2.3.1 Allgemeines zu ß-Laktamantibiotika bzw. zu Cephalosporinen 8
2.3.2 Gesundheitliche und technologische Risiken durch Rückstände 13
von ß-Laktamantibioüka in Lebensmitteln tierischen Ursprungs
2.3.2. ] Gesundheitliche Risiken für den Verbraucher 13
2.3.2.2 Technologische Risiken 15
2.3.3 Eigenschaften und therapeutische Anwendung von Cefquinom 17
2.3.3.1 Chemisch-physikalische Eigenschaften 17
2.3.3.2 Therapeutischer Einsatz von Cefquinom in der Veterinärmedizin 17
2.3.3.3 Pharmakologische Eigenschaften von Cefquinom, Bewertung 20
durch die Europäische Arzneimittelbehörde (EMEA) sowie
Rückstandsbildung in Milch
2.4 Nachweisverfahren für Cefquinom in Milch 23
2.4.1 Mikrobiologische Nachweisverfahren 23
2.4.2 Rezeptorbindungstests 27
2.4.3 Enzymatischer Test 29
2.4.4 Immunologische Verfahren 30
2.4.5 Physikalisch-chemische Nachweisverfahren 32
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 36
3.1 Material und Geräte 36
3.1.1 Chemikalien und
3.1.2 Antibiotika 37
Seite
3.1.3 Puffer und Lösungen 38
3.1.4 Immunreagentien 38
3.1.5 Geräte und sonstige Materialien 38
3.1.6 Probenmaterial 39
3.2 Methodik 40
3.2.1 Herstellung der Immunreagenzien 40
3.2.1.1 Kopplung mittels Glutardialdehydkondensation (GA) 41
3.2.1.2 Kopplung mittels wasserlöslichem Carbodiimid (CD) 42
3.2.1.3 Kopplung mittels Carbonyldiimidazol
3.2.1.4 Kopplung mittels reduktiver Alkylierung unter Verwendung von 45
Natrium-Perjodat (PJ)
3.2.1.5 Kopplung mittels para-Benzoquinon (BQ) 46
3.2.1.6 Charakterisierung der hergestellten Cefquinom-Konjugate 47
3.2.2 Gewinnung spezifischer Anti-Cefquinom-Antiseren 48
3.2.2.1 Immunisierung 48
3.2.2.2 Blutentnahme und Serumgewinnung 48
3.2.2.3 Kontrolle des Immunisierungsverlaufs 49
3.2.2.4 Auswahl geeigneter
Titration (Hemmtitration)
3.2.3 Entwicklung eines
(Doppelantikörpertechnik)
3.2.3.1 Durchführung 51
3.2.3.2 Optimierung der Nachweisempfindlichkeit 51
3.2.3.3 Ermittlung der Standardkurvenparameter 53
3.2.4 Entwicklung eines
3.2.4.1 Durchführung 54
3.2.4.2 Optimierung der Nachweisempfindlichkeit 54
3.2.4.3 Ermittlung der Standardkurvenparameter 56
3.2.4.4 Ermittlung der Spezifität der Enzymimmuntests 56
3.2.5 Versuche zur Anwendbarkeit des
Enzymimmuntests
III
Seite
4 ERGEBNISSE 59
4.1 Herstellung der Immunreagenzien 59
4.2 Gewinnung spezifischer
4.2.1 Annkörper-Tüerverlauf 61
4.3 Auswahl geeigneter
4.4 Entwicklung eines
(Doppelantikörpertechnik)
4.4.1 Überprüfung und Optimierung der Nachweisempfindlichkeit 63
4.5 Entwicklung eines
4.5.1 Testsensitivität 66
4.6 Ermittlung der Spezifität 71
4.7 Anwendbarkeit des
Enzyminununtests zum Nachweis von Cefquinom in Milch
5 DISKUSSION 76
5.1 Anforderungen an ein immunchemisches Testsystem 76
für Cefquinom
5.2 Antikörper gegen Cefquinom und Entwicklung 77
enzymimmunchemischerNachweisverfahren
5.3 Anwendbarkeit des Enzyminununtests 80
6 ZUSAMMENFASSUNG 82
7
8 LITERATURVERZEICHNIS 86
ANHANG
ANHANG
|
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INHALTSVERZEICHNIS
Seite
1 EINLEITUNG 1
2 SCHRIFTTUM 3
2.1 Hemmstoffe bzw. Rückstände von Antiinfekti
2.2 Rechtliche Grundlagen 5
2.3 Charakterisierung von Cefquinom 8
2.3.1 Allgemeines zu ß-Laktamantibiotika bzw. zu Cephalosporinen 8
2.3.2 Gesundheitliche und technologische Risiken durch Rückstände 13
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2.3.2. ] Gesundheitliche Risiken für den Verbraucher 13
2.3.2.2 Technologische Risiken 15
2.3.3 Eigenschaften und therapeutische Anwendung von Cefquinom 17
2.3.3.1 Chemisch-physikalische Eigenschaften 17
2.3.3.2 Therapeutischer Einsatz von Cefquinom in der Veterinärmedizin 17
2.3.3.3 Pharmakologische Eigenschaften von Cefquinom, Bewertung 20
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2.4 Nachweisverfahren für Cefquinom in Milch 23
2.4.1 Mikrobiologische Nachweisverfahren 23
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2.4.3 Enzymatischer Test 29
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3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 36
3.1 Material und Geräte 36
3.1.1 Chemikalien und
3.1.2 Antibiotika 37
Seite
3.1.3 Puffer und Lösungen 38
3.1.4 Immunreagentien 38
3.1.5 Geräte und sonstige Materialien 38
3.1.6 Probenmaterial 39
3.2 Methodik 40
3.2.1 Herstellung der Immunreagenzien 40
3.2.1.1 Kopplung mittels Glutardialdehydkondensation (GA) 41
3.2.1.2 Kopplung mittels wasserlöslichem Carbodiimid (CD) 42
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3.2.1.6 Charakterisierung der hergestellten Cefquinom-Konjugate 47
3.2.2 Gewinnung spezifischer Anti-Cefquinom-Antiseren 48
3.2.2.1 Immunisierung 48
3.2.2.2 Blutentnahme und Serumgewinnung 48
3.2.2.3 Kontrolle des Immunisierungsverlaufs 49
3.2.2.4 Auswahl geeigneter
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3.2.3 Entwicklung eines
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3.2.3.1 Durchführung 51
3.2.3.2 Optimierung der Nachweisempfindlichkeit 51
3.2.3.3 Ermittlung der Standardkurvenparameter 53
3.2.4 Entwicklung eines
3.2.4.1 Durchführung 54
3.2.4.2 Optimierung der Nachweisempfindlichkeit 54
3.2.4.3 Ermittlung der Standardkurvenparameter 56
3.2.4.4 Ermittlung der Spezifität der Enzymimmuntests 56
3.2.5 Versuche zur Anwendbarkeit des
Enzymimmuntests
III
Seite
4 ERGEBNISSE 59
4.1 Herstellung der Immunreagenzien 59
4.2 Gewinnung spezifischer
4.2.1 Annkörper-Tüerverlauf 61
4.3 Auswahl geeigneter
4.4 Entwicklung eines
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4.7 Anwendbarkeit des
Enzyminununtests zum Nachweis von Cefquinom in Milch
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5.1 Anforderungen an ein immunchemisches Testsystem 76
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5.2 Antikörper gegen Cefquinom und Entwicklung 77
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5.3 Anwendbarkeit des Enzyminununtests 80
6 ZUSAMMENFASSUNG 82
7
8 LITERATURVERZEICHNIS 86
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