Wertigkeit der Stammzellvermittelten Toleranzinduktion im akuten Abstossungsmodell nach heterotoper Herztransplantation in der Ratte:
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INHALTSVERZEICHNIS
1 Einleitung 1
1.1 Transplantatabstoßung 1
1.2 Immunsuppression 2
1.3 Immuntoleranz 2
1.3.1 Spenderspezifische Bluttransfusionen 3
1.3.2 Allopeptide 3
1.3.3 Anogeninjektion in den Thymus 4
1.3.4 Monoklonale Antikörper 4
1.3.5 Hemmung der Co-Samulation und Co-Aktivierung von T-Zellen 4
1.3.6 Chimärismus und Knochenmarktransplantation 5
2 Fragestellung ¦ 6
3 Material und Methoden 7
3.1 Reagenzien, Medien, Pufferlösungen und Medikamente 7
3.2 Versuchstiere, Tierhaltung und Zusammensetzung der Tiergruppen 8
3.2.1 Versuchstiere 8
3.2.2 Tierhaltung. 9
3.2.3 Tiergruppen der experimentellen Ansätze 9
3.3 Operationsverfahren 9
3.3.1 Narkose und technische Hilfsmittel 9
3.3.2 Technik der heterotopen Herztransplantation 9
3.4 Induktion eines gemischten Chimärismus 10
3.4.1 Eradikation der Knochenmarkzellen im LEW-Empfanger. 10
3.4.2 Isolierung und T-Zell-Depleüon von Knochenmark 11
3.4.3 Transplantation der Knochenmarkzellen 11
3.5 Immunsuppressive Therapie mit FK506 (Tacrolimus) 11
3.6 Klinische Verlaufskontrolle 11
3.7 Organentnahme und Aufbereitung des Gewebes 11
3.7.1 Aufbereitung des Gewebes und Fixierung. 12
3.7.2 Hämatoxylin-Eosin-(H.E.-) Färbung. 12
3.7.3 Immunhistochemie 12
3.7.4 Durchflußzytometrie 14
3.7.5 Einseitig gemischte Lymphozytenkultur (MLC) 17
3.7.6 51Cr-Freisetzungstest 17
3.8 Statistik 18
4 Ergebnisse 19
4.1 Klinischer Verlauf. 19
4.2 Pathomorphologie allogen transplantierter Herzen 20
4.2.1 Histopathologische Morphologie allogener Herztransplantate 20
4.3 Immunregulatorische Vorgänge im allogenen Spenderherz in Abhängigkeit von der
durchgeführten Behandlung. 22
4.3.1 Verteilung immunkompetenter Effektorzellen der spezifischen und unspezifischen
Immunabwehr in transplantierten Herzen (immunhistochemische Auswertung) 22
4.3.2 Proliferationsverhalten immunkompetenter Effektorzellen nach heterotoper
Herztransplantation (immunhistochemische Auswertung) 24
IY . _
4.4 Immunregulatorische Vorgänge in empfängereigenen lymphatischen Organen in
Abhängigkeit von der durchgeführten Behandlung 25
4.4.1 Verteilung spenderspezifischer Zellen im Thymus der Empfängertiere
(immunhistochemische Färbung mit dem mAk Mn4) 25
4.4.2 Durchflußzytometrische Evaluation des gemischten Chimärismus im peripheren Blut
sowie in der Milz herztransplantierter Empfängertiere 27
4.4.3 Proliferationsverhalten von empfängereigenen T-Lymphozyten in der einseitig
gemischten Lymphozytenkultur (MLQ 29
4.4.4 NK-Zellvermittelte Lyserate in der Milz transplantierter LEW-Tiere
(51Chrom-Freisetzungstest) 31
5 Diskussion 32
5.1 Auswirkung der Knochenmark-Ablao on und anschließender spenderspezifischer
Knochenmark-Transplantation 32
5.2 Auswirkungen auf den Gesamtorganismus in Abhängigkeit von der
Empfängerbehandlung 34
5.3 Schlussfolgerung und Aussichten 35
6 Zusammenfassung 37
7 Literaturverzeichnis 38
8 Anhang 45
9 Danksagung 49
10 Lebenslauf. 50
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1 Einleitung 1
1.1 Transplantatabstoßung 1
1.2 Immunsuppression 2
1.3 Immuntoleranz 2
1.3.1 Spenderspezifische Bluttransfusionen 3
1.3.2 Allopeptide 3
1.3.3 Anogeninjektion in den Thymus 4
1.3.4 Monoklonale Antikörper 4
1.3.5 Hemmung der Co-Samulation und Co-Aktivierung von T-Zellen 4
1.3.6 Chimärismus und Knochenmarktransplantation 5
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3 Material und Methoden 7
3.1 Reagenzien, Medien, Pufferlösungen und Medikamente 7
3.2 Versuchstiere, Tierhaltung und Zusammensetzung der Tiergruppen 8
3.2.1 Versuchstiere 8
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3.2.3 Tiergruppen der experimentellen Ansätze 9
3.3 Operationsverfahren 9
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3.3.2 Technik der heterotopen Herztransplantation 9
3.4 Induktion eines gemischten Chimärismus 10
3.4.1 Eradikation der Knochenmarkzellen im LEW-Empfanger. 10
3.4.2 Isolierung und T-Zell-Depleüon von Knochenmark 11
3.4.3 Transplantation der Knochenmarkzellen 11
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3.6 Klinische Verlaufskontrolle 11
3.7 Organentnahme und Aufbereitung des Gewebes 11
3.7.1 Aufbereitung des Gewebes und Fixierung. 12
3.7.2 Hämatoxylin-Eosin-(H.E.-) Färbung. 12
3.7.3 Immunhistochemie 12
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3.7.6 51Cr-Freisetzungstest 17
3.8 Statistik 18
4 Ergebnisse 19
4.1 Klinischer Verlauf. 19
4.2 Pathomorphologie allogen transplantierter Herzen 20
4.2.1 Histopathologische Morphologie allogener Herztransplantate 20
4.3 Immunregulatorische Vorgänge im allogenen Spenderherz in Abhängigkeit von der
durchgeführten Behandlung. 22
4.3.1 Verteilung immunkompetenter Effektorzellen der spezifischen und unspezifischen
Immunabwehr in transplantierten Herzen (immunhistochemische Auswertung) 22
4.3.2 Proliferationsverhalten immunkompetenter Effektorzellen nach heterotoper
Herztransplantation (immunhistochemische Auswertung) 24
IY . _
4.4 Immunregulatorische Vorgänge in empfängereigenen lymphatischen Organen in
Abhängigkeit von der durchgeführten Behandlung 25
4.4.1 Verteilung spenderspezifischer Zellen im Thymus der Empfängertiere
(immunhistochemische Färbung mit dem mAk Mn4) 25
4.4.2 Durchflußzytometrische Evaluation des gemischten Chimärismus im peripheren Blut
sowie in der Milz herztransplantierter Empfängertiere 27
4.4.3 Proliferationsverhalten von empfängereigenen T-Lymphozyten in der einseitig
gemischten Lymphozytenkultur (MLQ 29
4.4.4 NK-Zellvermittelte Lyserate in der Milz transplantierter LEW-Tiere
(51Chrom-Freisetzungstest) 31
5 Diskussion 32
5.1 Auswirkung der Knochenmark-Ablao'on und anschließender spenderspezifischer
Knochenmark-Transplantation 32
5.2 Auswirkungen auf den Gesamtorganismus in Abhängigkeit von der
Empfängerbehandlung 34
5.3 Schlussfolgerung und Aussichten 35
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