Die Rolle der c-Jun-N-terminalen Kinase (JNK) im neuronalen Zelltod nach Schädigung des Cytoskeletts:
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Inhaltsverzeichnis
1/
Abbildungsverzeichnis i/i/
Tabellenverzeichnis
VIII
Abkürzungsverzeichnis 1 Einleitung
1.1 Funktion und Bedeutung der c-Jun N-terminalen Kinase (JNK) 1
1.2 PC12-Zellen, ein neurobiologisches Zellsystem 4
1.3 Das Cytoskelett als integraler Bestandteil der Zelle 4
1.4 Gifte des Cytoskeletts 7
1.4.1 Cytochalasin D 1.4.2 Colohicin Q
1.4.3 Taxol (Paclitaxel) 10
1.5 Zielsetzung der Arbeit 2 Material und Methoden 2.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterialien 11
2.2 Herstellung und Sterilisation von Puffern und Lösungen 13
13
2.3 Antikörper 2.4 Herkunft, Kultivierung und Differenzierung von PC12-Zellen 14
14
2.4.1 Herkunft der PC12-Zellen 14
2.4.2 Kultivierung der PC12-Zellen 2.4.3 Passage von PC12-Zellen 16
2.4.4 Differenzierung von PC12-Zellen 2.5 Stimulation von PC12-Zellen durch Cytochalasin D, Colchicin und Taxol 16
2.6 Einfrieren von PC12-Zellen 2.7 Bestimmung der Zellzahl bei PC12-Zellen 17
18
2.8 Herstellung von Gesamtzelllysaten 2.9 Bestimmung des Proteingehaltes von Gesamtzellextrakten 19
2.10 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese und Western-Blot 20
2.10.1 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 20
2.10.2 Western-Blot 22
2.10.3 Strippen von Western-Blot-Membranen 24
2.11 Statistische Auswertung der Stimulationsversuche 24
2.12 Zeil-Morphologie 3 Ergebnisse 3.1 Morphologie unstimulierter PC12-Zellen 25
3.1.1 Naive PC12-Zellen 3.1.2 Differenzierte PC12-Zellen „„
tio
3.2 Einfluss von Cytoskelett-Toxinen auf die Morphologie bzw. das Cytoskelett
von PC12-Zellen 27
3.3 Naive PC12-Zellen 29
3.3.1 Zelltod durch Cytoskelett-Toxine 3.3.2 JNK-Inhibition und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine 32
3.4 Differenzierte PC12-Zellen 35
3.4.1 Zelltod durch Cytoskelett-Toxine -,-
oo
3.4.2 JNK-Inhibition und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine 37
3.5 Aktivierung der JNK....
40
3.5.1 Naive PC12-Zellen
40
3.5.2 Differenzierte PC12-Zellen 42
3.6 Ergebnisübersicht der Stimulationsversuche 44
4 Diskussion 45
4.1 Stimulation und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine in naiven Zellen 45
4.2 Die Rolle der JNK in naiven Zellen 46
4.3 Stimulation und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine in differenzierten PC12-
Zellen 47
5 Zusammenfassung ¦•¦¦•¦¦•••.......„„,„., „„„„,,, (.„..„„„„„„„„„„„„„sT
6 Referenzen...
53
Danksagung 59
Cum culum vitae.
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1.3 Das Cytoskelett als integraler Bestandteil der Zelle 4
1.4 Gifte des Cytoskeletts 7
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1.5 Zielsetzung der Arbeit 2 Material und Methoden 2.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterialien 11
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2.8 Herstellung von Gesamtzelllysaten 2.9 Bestimmung des Proteingehaltes von Gesamtzellextrakten 19
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2.11 Statistische Auswertung der Stimulationsversuche 24
2.12 Zeil-Morphologie 3 Ergebnisse 3.1 Morphologie unstimulierter PC12-Zellen 25
3.1.1 Naive PC12-Zellen 3.1.2 Differenzierte PC12-Zellen „„
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3.5 Aktivierung der JNK.
40
3.5.1 Naive PC12-Zellen
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3.5.2 Differenzierte PC12-Zellen 42
3.6 Ergebnisübersicht der Stimulationsversuche 44
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4.1 Stimulation und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine in naiven Zellen 45
4.2 Die Rolle der JNK in naiven Zellen 46
4.3 Stimulation und Zelltod durch Cytoskelett-Toxine in differenzierten PC12-
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5 Zusammenfassung ¦•¦¦•¦¦•••.„„,„., „„„„,,, (.„.„„„„„„„„„„„„„sT
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